Foar suksesfolle amplifikaasjereaksjes is it needsaaklik dat de yndividuele reaksjekomponinten oanwêzich binne yn 'e juste konsintraasje yn elke tarieding. Dêrneist is it wichtich dat der gjin fersmoarging optreedt.
Benammen as in protte reaksjes opset wurde moatte, is fêststeld om in saneamde mastermix te meitsjen ynstee fan elk reagens apart yn elk skip te pipetterjen. Pre-konfigureare mingen binne kommersjeel beskikber, wêryn allinich sample-spesifike komponinten (primer) en wetter wurde tafoege. As alternatyf kin de mastermix troch josels taret wurde. Yn beide farianten wurdt it mingsel ferdield oan elk PCR-skip sûnder in sjabloan en it yndividuele DNA-monster wurdt apart oan 'e ein tafoege.
It brûken fan in mastermix hat ferskate foardielen: As earste wurdt it oantal inkele pipettingstappen fermindere. Op dizze manier wurdt sawol it risiko fan brûkersflaters by pipetearjen as it risiko fan fersmoarging minimalisearre en wurdt fansels tiid besparre. Yn prinsipe is de krektens fan pipetten ek heger, om't gruttere folumes dosearre wurde. Dit is maklik te begripen by it kontrolearjen fan de technyske gegevens fan pipetten: Hoe lytser it dosearre folume, hoe heger de ôfwikingen kinne wêze. It feit dat alle tariedingen komme út itselde skip hat in posityf effekt op homogeniteit (as goed mingd). Dit ferbetteret ek de reprodusearberens fan 'e eksperiminten.
By it tarieden fan de mastermix moat op syn minst 10% ekstra folume tafoege wurde (bygelyks as 10 tariedings nedich binne, berekkenje op basis fan 11), sadat sels it lêste skip goed fol is. Op dizze manier kinne (lytse) pipetting-ûnnaaktyfheden, en it effekt fan sampleferlies by it doseren fan oplossings dy't detergent befetsje, kompensearre wurde. Detergenten binne befette yn enzyme-oplossingen lykas polymerases en mastermixen, wêrtroch't skomfoarming en residuen op 'e binnenste oerflak fan normalepipet tips.
Ofhinklik fan 'e tapassing en it type floeistof dat moat wurde útjûn, moat de juste pipettetechnyk (1) wurde keazen en de passende apparatuer selektearre. Foar oplossings dy't detergenten befetsje, wurde in direkte ferpleatsingsysteem of de saneamde "leech retinsje" pipettetips as alternatyf foar pipetten foar luchtkessen oanrikkemandearre. It effekt fanACE PIPETTE tipis basearre op in bysûnder hydrofoob oerflak. Vloeistoffen dy't detergenten befetsje litte gjin oerbliuwende film op 'e binnen en bûten, sadat it ferlies fan oplossing kin wurde minimalisearre.
Njonken de krekte dosearring fan alle ûnderdielen is it ek wichtich dat der gjin fersmoarging fan de tariedings optreedt. It is net genôch om verbruiksartikelen fan hege suverens te brûken, om't it pipetproses yn in pipet foar luchtkussen aerosolen kinne produsearje dy't yn 'e pipet bliuwe. It DNA dat kin wêze befette yn de aerosol kin wurde oerdroegen fan de iene stekproef nei de folgjende yn de folgjende pipetting stap en sa liede ta fersmoarging. De hjirboppe neamde direkte ferpleatsingssystemen kinne dit risiko ek minimalisearje. Foar pipetten mei luchtkussen is it sinfol om filtertips te brûken om de pipettekegel te beskermjen troch spatten, aerosolen en biomolekulen te behâlden.
Post tiid: Dec-06-2022