Kryovialswurde faak brûkt foar de kryogene opslach fan sellen en oare krityske biologyske materialen, yn dewars fol mei floeibere stikstof.

D'r binne ferskate stadia belutsen by it suksesfolle behâld fan sellen yn floeibere stikstof. Wylst it basisprinsipe in stadige frieze is, hinget de krekte brûkte technyk ôf fan it seltype en it brûkte kryoprotektant. D'r binne ferskate feiligens oerwagings en bêste praktiken om rekken te hâlden by it opslaan fan sellen by sokke lege temperatueren.

Dizze post is fan doel in oersjoch te jaan fan hoe't kryovialen wurde opslein yn floeibere stikstof.

Wat binne Kryovials

Kryovials binne lytse, ôfsletten fleskes ûntworpen foar it bewarjen fan floeibere monsters by ekstreem lege temperatueren. Se soargje derfoar dat sellen bewarre yn kryoprotectant net yn direkt kontakt komme mei de floeibere stikstof, it minimalisearjen fan it risiko fan sellulêre fraktueren, wylst se noch profitearje fan it ekstreme koelende effekt fan floeibere stikstof.

De fleskes binne meastentiids te krijen yn in ferskaat oan folumes en ûntwerpen - se kinne yntern of ekstern wurde threaded mei platte of rûne boaiem. Sterile en net-sterile formaten binne ek beskikber.

Wa brûktCyrovialsom sellen te bewarjen yn floeibere stikstof

In berik fan NHS en partikuliere laboratoaria, lykas ûndersyksynstituten dy't spesjalisearje yn koordbloedbankieren, epitheliale selbiology, immunology en stamselbiology brûke kryovialen om sellen te cryopreservearjen.

Sellen bewarre op dizze manier omfetsje B- en T-sellen, CHO-sellen, hematopoietyske stam- en progenitorsellen, hybridoma's, intestinale sellen, makrofagen, mesenchymale stam- en progenitorsellen, monozyten, myeloma, NK-sellen en pluripotinte stamsellen.

Oersjoch fan hoe't jo kryovialen opslaan yn floeibere stikstof

Cryopreservation is in proses dat sellen en oare biologyske konstruksjes behâldt troch se te koelen nei heul lege temperatueren. Sellen kinne jierrenlang yn floeibere stikstof wurde opslein sûnder ferlies fan sel libbensfetberens. Dit is in skets fan de brûkte prosedueres.

Sel tarieding

De krekte metoade foar it tarieden fan samples sil ferskille ôfhinklik fan it seltype, mar yn 't algemien wurde de sellen sammele en sintrifugeare om in sel-rike pellet te ûntwikkeljen. Dizze pellet wurdt dan opnij suspendearre yn 'e supernatant mingd mei kryoprotectant as in kryokonserveringsmedium.

Cryopreservation Medium

Dit medium wurdt brûkt om sellen te behâlden yn 'e omjouwings mei lege temperatueren wêr't se sille wurde ûnderwurpen troch de formaasje fan intra- en ekstrazellulêre kristallen te ynhiberjen en dêrmei selsdea. Harren rol is it leverjen fan in feilige, beskermjende omjouwing foar sellen en weefsels tidens it befriezen, opslaan en ûntdooien.

In medium lykas farsk beferzen plasma (FFP), heparinisearre plasmalyte-oplossing of serumfrije oplossings sûnder dierkomponinten wurdt mingd mei kryoprotektanten lykas dimethylsulfoxide (DMSO) of glycerol.

De re-liquified sample pellet wurdt aliquoted yn polypropylene cryovials lykasSuzhou Ace Biomedical bedriuw Cryogenic Storage Vials.

It is wichtich om de kryovialen net te oerfoljen, om't dit it risiko fan kraken en de mooglike frijlitting fan ynhâld sil ferheegje (1).

Kontrolearre Freeze Rate

Yn 't algemien wurdt in stadige kontroleare befriezingssifer brûkt foar it suksesfolle kryokonservering fan sellen.

Nei't samples binne ferdield yn kryogene vials, wurde se pleatst op wiet iis as yn in 4 ℃ kuolkast en de befriezingproseduere wurdt binnen 5 minuten begon. As algemiene hantlieding wurde sellen kuolle mei in taryf fan -1 oant -3 per minút (2). Dit wurdt berikt mei in programmabele koeler of troch it pleatsen fan vials yn in isolearre doaze pleatst yn in -70 ° C oant -90 ° C kontrolearre snelheid freezer.

Oerdracht nei floeibere stikstof

De beferzen kryogene vials wurde dan oerbrocht nei in floeibere stikstoftank foar ûnbepaalde perioaden, mits in temperatuer fan minder dan -135 ℃ wurdt hanthavene.

Dizze ultra-lege temperatueren kinne wurde krigen troch ûnderdompeling yn 'e floeibere of dampfase stikstof.

Vloeistof of dampfase?

Opslach yn floeibere faze stikstof is bekend om de kâlde temperatuer mei absolute konsistinsje te behâlden, mar wurdt faak net oanrikkemandearre om de folgjende redenen:

• De needsaak foar grutte folumes (djipte) floeibere stikstof dy't in potinsjele gefaar is. Burns of ferstikking hjirtroch is in reëel risiko.
• Dokuminteare gefallen fan krúskontaminaasje troch ynfekteare aginten lykas aspergillus, hep B en virale fersprieding fia it floeibere stikstofmedium (2,3)
• It potinsjeel dat floeibere stikstof yn 'e vials lekket by ûnderdompeling. Wannear't fuorthelle út opslach en opwaarme ta keamertemperatuer, de stikstof fluch wreidet út. Dêrtroch kin de flesse brekke as se fuortsmiten binne fan opslach fan floeibere stikstof, wêrtroch in gefaar ûntstiet fan sawol fleanend pún as bleatstelling oan 'e ynhâld (1, 4).

Om dizze redenen is opslach mei ultra-lege temperatuer meast foarkommen yn dampfase stikstof. As samples moatte wurde opslein yn 'e floeibere faze, moatte spesjale cryoflex-buizen wurde brûkt.

It neidiel fan 'e dampfaze is dat in fertikale temperatuergradient kin foarkomme, wat resulteart yn temperatuerfluktuaasjes tusken -135 ℃ en -190 ℃. Dit fereasket soarchfâldige en iverige tafersjoch op de floeibere stikstof nivo 's en temperatuer fariaasjes (5).

In protte fabrikanten advisearje dat cryovials geskikt binne foar opslach oant -135 ℃ of allinich foar gebrûk yn 'e dampfaze.

It ûntdooijen fan jo kryopreserveare sellen

De thawing proseduere is stressfolle foar in beferzen kultuer, en goede ôfhanneling en technyk is nedich om te soargjen foar optimale leefberens, herstel, en funksjonaliteit fan de sellen. De krekte ûntdooiprotokollen sille ôfhingje fan spesifike seltypen. Snel ûntjaan wurdt lykwols as standert beskôge foar:

• Ferminderje elke ynfloed op sellulêre herstel
• Helpje de bleatstellingstiid te ferminderjen foar de oplossingen oanwêzich yn 'e befrieze media
• Minimalisearje skea troch iis rekristallisaasje

Wetterbaden, kraalbaden, as spesjalisearre automatisearre ynstruminten wurde faak brûkt om samples te ûntdooijen.

Meast faak wurdt 1 selline tagelyk foar 1-2 minuten ûntdutsen, troch sêft te swirljen yn in 37 ℃ wetterbad oant d'r mar in lyts bytsje iis oerbliuwt yn 'e flesse foardat se wosken wurde yn in foarwaarmde groeimedium.

Foar guon sellen, lykas sûchdierembryo's, is stadige opwaarming essensjeel foar har oerlibjen.

De sellen binne no klear foar selkultuer, selisolaasje, of yn it gefal fan hematopoietyske stamsellen - leefberensstúdzjes om de yntegriteit fan 'e donorstamsellen te garandearjen foardat myeloablative terapy.

It is normale praktyk om lytse aliquots te nimmen fan 'e foarwasske stekproef dy't brûkt wurdt om in seltelling út te fieren om selkonsintraasjes te bepalen foar plating yn kultuer. Jo kinne dan de resultaten fan sel-isolaasjeprosedueres beoardielje en de leefberens fan sellen bepale.

Best Practices foar de opslach fan Kryovials

De suksesfolle kryokonservering fan samples opslein yn kryovialen hinget ôf fan in protte eleminten yn it protokol, ynklusyf juste opslach en rekordhâlding.

• Split sellen tusken opslach lokaasjes- As folumes it tastean, spjalte sellen tusken vials en bewarje se op aparte lokaasjes om it risiko fan sampleferlies te ferminderjen fanwegen apparatuerfouten.
• Foarkom krúskontaminaasje- Kies foar ien-gebrûk sterile kryogene fleskes as autoklaaf foar it folgjende gebrûk
• Brûk flessen mei passende grutte foar jo sellen- vials komme yn in berik fan folumes tusken 1 en 5mls. Foarkom it oerfoljen fan vials om it risiko fan barsten te ferminderjen.
• Selektearje ynterne as ekstern threaded kryogene vials- Ynterne threaded vials wurde oanrikkemandearre troch guon universiteiten foar feiligens maatregels - se kinne ek foarkomme fersmoarging by it ynfoljen of as opslein yn de floeibere stikstof.
• Leakage foarkomme- Brûk bi-ynjeksjede sealen getten yn 'e skroefdop of O-ringen om lekken en fersmoarging te foarkommen.
• Brûk 2D barcodes en label fleskes- om traceerberens te garandearjen, kinne fleskes mei grutte skriuwgebieten elke flesje adekwaat labele wurde. 2D barcodes kinne helpe mei opslach behear en rekord hâlden. Kleurkodearre kappen binne nuttich foar makliker identifikaasje.
• Adekwate opslach ûnderhâld- Om te soargjen dat sellen net ferlern gean, moatte opslachfetten de temperatuer en it nivo fan floeibere stikstof konstant kontrolearje. Alarms moatte wurde ynrjochte om brûkers te warskôgjen fan flaters.

Feiligens foarsoarchsmaatregels

Flüssige stikstof is gewoane praktyk wurden yn moderne ûndersyk, mar draacht it risiko op serieuze blessueres as it ferkeard brûkt wurdt.

Goede persoanlike beskermingsapparatuer (PPE) moatte wurde droegen om it risiko fan frostbite, brânwûnen en oare neidielige ynsidinten te minimalisearjen by it behanneljen fan floeibere stikstof. Drage

• Kryogenyske handschoenen
• Laboratoarium jas
• Impact resistant folslein gesicht shield dat ek dekt de nekke
• Slúten-toe skuon
• Splashproof plestik foarskot

Koelkasten foar floeibere stikstof moatte wurde pleatst yn goed fentilearre gebieten om it risiko fan ferstikking te minimalisearjen - ûntsnapte stikstof ferdampt en ferpleatst atmosfearyske soerstof. Stores mei grutte folume moatte alarmsystemen foar leech soerstof hawwe.

It wurkjen yn pearen by it behanneljen fan floeibere stikstof is ideaal en it gebrûk dêrfan bûten normale wurktiden moat ferbean wurde.

Kryovials om jo workflow te stypjen

Suzhou Ace Biomedical bedriuw biedt in brede seleksje fan produkten dy't foldogge oan jo cryopreservation-behoeften foar ferskate soarten sellen. De portefúlje omfettet in berik fan buizen, lykas ek in oanbod fan sterile kryovialen.

Us cryovials binne:

• Lab schroefdop 0,5 ml 1,5 ml 2,0 ml kryoviale kryogene flesjes Konyske ûnderkant kryobuis mei pakking

  ● 0.5ml, 1.5ml, 2.0ml spesifikaasje, mei rok of sûnder rok
  ● Konyske of selsstannige ûntwerp, sterile of net-sterile binne beide beskikber
  ● Screw cap buizen binne makke fan medyske klasse polypropylene
  ● PP Cryotube Vials kinne wurde werhelle beferzen en thawed
  ●It eksterne pet-ûntwerp kin de fersmoargingskâns ferminderje by sample behanneling.
  ● Screw cap kryogenic buizen Universele skroef triedden foar gebrûk
  ● Tubes passe meast foarkommende rotors
  ● Cryogenic buis o-ring buizen passe standert 1-inch en 2-inch, 48well, 81well, 96well en 100well freezer doazen
  ● Autoclavable oant 121 ° C en freezable oant -86 ° C

  PART NO	MATERIAAL	FOLUME	KAPKLEUR	PCS/PÛDE	BAGS / KASE
  ACT05-BL-N	PP	0,5ml	Swart, giel, blau, read, pears, wyt	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ml	Swart, giel, blau, read, pears, wyt	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ml	Swart, giel, blau, read, pears, wyt	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ml	Swart, giel, blau, read, pears, wyt	500	10