By it pipetteren fan folumes fan 0,2 oant 5 µL, is pipettingsnauwkeurigheid en presyzje fan it grutste belang, in goede pipetteertechnyk is essensjeel, om't hanteringsflaters dúdliker binne mei lytse folumes.
Om't mear fokus wurdt pleatst op it ferminderjen fan reagentia en kosten, binne lytsere folumes yn hege fraach, bygelyks foar de tarieding fan PCR Mastermix as enzymreaksjes. Mar pipetterjen fan lytse folumes fan 0,2 - 5 µL stelt nije útdagings foar pipetterjen fan krektens en presyzje. De folgjende punten binne essensjeel:
- Pipet en tipgrutte: Kies altyd de pipet mei it leechste nominale folume mooglik en de lytste tip om it loftkessen sa lyts mooglik te hâlden. As jo bygelyks 1 µL pipet, kies dan in 0.25 - 2.5 µL pipet en bypassende tip ynstee fan in 1 - 10 µL pipet.
- Kalibraasje en ûnderhâld: It is essinsjeel dat jo pipetten goed kalibrearre en ûnderhâlden binne. Lytse oanpassingen en brutsen dielen op in pipet liede ta in massale ferheging fan systematyske en willekeurige flaterwearden. In kalibraasje neffens ISO 8655 moat ien kear yn 't jier wurde útfierd.
- Positive ferpleatsing pipetten: Kontrolearje as jo in positive ferpleatsing pipette mei in leech folume berik yn jo lab. Yn 't algemien liedt it brûken fan dit type pipet ta in better pipetteerresultaat yn termen fan krektens en presyzje dan mei klassike luchtkussenpipetten.
- Besykje gruttere folumes te brûken: Jo kinne beskôgje om jo stekproef te ferwetterjen om gruttere folumes te pipetearjen mei deselde kwantiteit yn 'e definitive reaksje. Dit kin pipetting flaters ferminderje mei hiel lytse sample folume.
Neist in goed ark moat de ûndersiker in tige goede pipetteertechnyk hawwe. Jou spesjaal omtinken foar de folgjende stappen:
- Tip taheaksel: Klem de pipet net op 'e tip, om't dit it fine tip-ein kin beskeadigje, wêrtroch't de floeibere beam wurdt omlaat of de iepening beskeadige. Allinich ljochte druk tapasse by it befestigjen fan in tip en brûk in pipet mei in springbeladen tipkegel.
- Hâld de pipette: Hâld de pipet net yn 'e hân wylst jo wachtsje op' e sintrifuge, cycler, ensfh De binnenkant fan 'e pipet sil opwarmje en liede it loftkessen om út te wreidzjen, wat resulteart yn ôfwikingen fan it ynstelde folume by it pipetterjen.
- Pre-wetting: De bevochtiging fan 'e loft yn' e tip en pipet taret de tip foar it probleem op en foarkomt ferdamping by it aspirearjen fan it oerdrachtvolumint.
- Fertikale aspiraasje: Dit is heul wichtich by it behanneljen fan lytse folumes om it kapillêre effekt te foarkommen dat optreedt as de pipet yn in hoeke wurdt hâlden.
- Immersion djipte: Dompelje de tip sa min mooglik om te foarkommen dat floeistof yn 'e tip komt troch it kapillêre effekt. Fûgelregel: Hoe lytser de tip en folume, hoe leger de ûnderdompeledjipte. Wy riede in maksimum fan 2 mm oan by pipetten fan lytse folumes.
- Dispensearje yn in hoeke fan 45 °: Optimale útstream fan 'e floeistof wurdt garandearre as de pipet yn in hoeke fan 45 ° wurdt hâlden.
- Kontakt mei skip muorre of floeibere oerflak: Lytse folumes kinne allinnich wurde útjûn as de tip wurdt holden tsjin de skip muorre, of ûnderdompele yn floeiber. Sels de lêste drip fan 'e tip kin sekuer útjûn wurde.
- Blow-out: In blow-out is ferplicht nei it útjaan fan lege folumes om sels de lêste drip floeistof oanwêzich yn 'e tip te dispensearjen. It útblazen moat ek útfierd wurde tsjin de skipmuorre. Wês foarsichtich dat jo gjin luchtbellen yn it stekproef bringe by it útfieren fan in blow-out op it floeibere oerflak.
Posttiid: Febrewaris 18-2021