Comment sceller une plaque PCR

Introduction

Plaques PCR, un élément essentiel du laboratoire depuis de nombreuses années, devient encore plus répandu dans le contexte moderne à mesure que les laboratoires augmentent leur débit et utilisent de plus en plus l'automatisation dans leurs flux de travail. Atteindre ces objectifs tout en préservant l’exactitude et l’intégrité des expériences peut s’avérer difficile. L'un des domaines courants dans lesquels des erreurs peuvent s'infiltrer est celui du scellement desPlaques PCR, avec une mauvaise technique permettant l'évaporation des échantillons, modifiant le pH et donc perturbant les fonctions enzymatiques, et favorisant la contamination. Apprendre à sceller unPlaque PCRélimine correctement ces risques et garantit des résultats reproductibles.

Trouvez le joint adapté à votre plaque PCR

Bouchons de plaque, joints en film et couvercles
Casquettessont un bon moyen de sceller votre assiette avec un joint étanche, tout en vous offrant la flexibilité de desceller et de refermer très facilement l'assiette selon vos besoins, sans aucun gaspillage. Cependant, les plafonds présentent quelques inconvénients majeurs.

Tout d’abord, vous devrez acheter le bouchon spécifique compatible, ce qui les rend peu polyvalents. Vous devrez vous assurer que le capuchon que vous choisissez s'adapte à la plaque, ce qui dépend de son fabricant, et choisir soit en forme de dôme, soit en forme de plat en fonction du thermocycleur que vous utilisez.

Deuxièmement, l'application des bouchons sur la plaque peut être très répétitive et fastidieuse, avec un risque de contamination croisée si vous posez le mauvais bouchon sur le mauvais puits.

Bien que les films scellés soient moins flexibles en termes de retrait et de remplacement, ils sont très polyvalents car ils s'adaptent à tout type de plaque PCR, quel que soit le fabricant. Ils peuvent simplement être coupés sur mesure, ce qui les rend très efficaces.

Une autre option est un couvercle d’assiette. Ceux-ci offrent moins de protection que les bouchons et les joints, et ne sont principalement utilisés que pour une couverture à court terme afin d'éviter toute contamination.

Scellés optiques ou en aluminium

Que vous ayez besoin d'un sceau optique transparent ou d'unfilm de papier d'aluminiumsceller votre assiette est décidé par votre format expérimental.Films d'étanchéité optiquessont transparents pour vous permettre d'observer les échantillons, tout en les protégeant et en empêchant l'évaporation. Ils sont également particulièrement utiles dans les expériences qPCR qui impliquent de réaliser des mesures très précises de fluorescence directement à partir de la plaque, auquel cas vous aurez besoin d'un film d'étanchéité qui filtre le moins de fluorescence possible. Il est important de s’assurer que le sceau ou le capuchon que vous utilisez présente un niveau de clarté optique suffisamment élevé pour garantir l’exactitude des lectures.

Les films d'aluminium conviennent à tous les échantillons sensibles à la lumière ou devant être conservés à une température inférieure à 80 °C. Pour cette raison, la plupart des échantillons destinés à un stockage à long terme nécessiteront un film aluminium. Les films en aluminium sont également perçables, ce qui est utile soit pour examiner des puits individuels, soit pour le transfert d'échantillons par des aiguilles. Cela peut se produire manuellement ou dans le cadre d’une plate-forme robotique.

Tenez également compte du fait que les substances agressives comprenant des acides, des bases ou des solvants nécessiteront un joint capable d’y résister, auquel cas un joint en aluminium est probablement plus approprié.

Film adhésif ou film thermoscellable
Scellés en film adhésifsont très simples et faciles à appliquer. Tout ce dont vous avez besoin est qu'un utilisateur applique le joint sur la plaque et utilise un simple outil applicateur pour appuyer et former un joint étanche.

Les thermoscellages sont plus avancés, offrant un joint plus durable qui réduit les taux d'évaporation par rapport à un joint adhésif classique. Cette option est appropriée si vous souhaitez conserver des échantillons à long terme, même si cela nécessite un équipement de scellage de plaques supplémentaire.

Comment sceller une plaque PCR

Méthode de scellage des plaques

Auto-adhésif

1. Assurez-vous de travailler sur une surface de travail plane et stable

2. Retirez le film de son emballage et retirez le support.

3. Placez délicatement le joint sur la plaque, tout en vous assurant que tous les puits sont recouverts.

4. Utilisez un outil applicateur pour appliquer une pression sur la plaque. Commencez par une extrémité et passez à l’autre, en appuyant uniformément

5. Répétez ceci plusieurs fois

6. Passez votre applicateur autour des puits extérieurs pour vous assurer qu'ils sont également correctement scellés.

Thermoscellages

Les thermoscellages fonctionnent en faisant fondre le film sur le bord de chaque puits, à l’aide d’un scellant à plaques. Pour faire fonctionner une thermoscelleuse, référez-vous aux instructions fournies par le fabricant de l’équipement. Assurez-vous que le fabricant auprès duquel vous achetez votre équipement est réputé, car il est très important que le joint soit approprié, efficace et étanche.

Conseils supérieurs pour le scellement des plaques

un. Lorsque vous appliquez une pression sur le joint, allez dans les directions horizontale et verticale pour garantir une bonne étanchéité.

b. C'est toujours une bonne pratique d'effectuer un test de tout ce que vous faites, et ce n'est pas différent avec le scellement des plaques. Testez avec une assiette vide avant d’en utiliser une avec des échantillons.

c. Lors du test, retirez le joint et vérifiez que l'adhésif adhère correctement, sans aucun espace. Il en existe une représentation visuelle dans le premier document de référence. Si vous n'avez pas scellé correctement la plaque, lorsque vous retirez le joint, il y aura des espaces où l'adhésif n'a pas complètement adhéré à la plaque.

d. Pour l'expédition et le transport des échantillons, il peut s'avérer utile d'appliquer un sceau en plastique sur le sceau en aluminium pour une protection supplémentaire (en particulier contre le perçage).

e. Assurez-vous toujours qu'il n'y a pas de bosses ou de plis lors de l'application du film – cela provoquerait des fuites et de l'évaporation.