Comment pipeter de petits volumes avec des pipettes manuelles portatives

Alors que l'accent est mis davantage sur la réduction des réactifs et des coûts, des volumes plus petits sont très demandés, par exemple pour la préparation de PCR Mastermix ou de réactions enzymatiques. Mais le pipetage de petits volumes compris entre 0,2 et 5 µL pose de nouveaux défis en matière d'exactitude et de précision du pipetage. Les points suivants sont essentiels :

1. Taille de la pipette et de la pointe : Choisissez toujours la pipette avec le volume nominal le plus bas possible et la pointe la plus petite pour garder le coussin d'air aussi petit que possible. Lorsque vous pipetez 1 µL par exemple, choisissez une pipette de 0,25 à 2,5 µL et l'embout correspondant plutôt qu'une pipette de 1 à 10 µL.
2. Calibrage et maintenance : Il est essentiel que vos pipettes soient correctement calibrées et entretenues. Les petits ajustements et les pièces cassées sur une pipette entraînent une augmentation massive des valeurs d'erreur systématiques et aléatoires. Un étalonnage selon ISO 8655 doit être effectué une fois par an.
3. Pipettes volumétriques : Vérifiez si vous disposez d'une pipette volumétrique avec une plage de volume faible dans votre laboratoire. De manière générale, l’utilisation de ce type de pipette permet d’obtenir un meilleur résultat de pipetage en termes d’exactitude et de précision qu’avec les pipettes classiques sur coussin d’air.
4. Essayez d'utiliser des volumes plus importants : vous pouvez envisager de diluer votre échantillon pour pipeter de plus grands volumes avec la même quantité dans la réaction finale. Cela peut réduire les erreurs de pipetage avec de très petits volumes d’échantillons.

En plus d’un bon outil, le chercheur doit posséder une très bonne technique de pipetage. Portez une attention particulière aux étapes suivantes :

1. Fixation de la pointe : Ne coincez pas la pipette sur la pointe car cela pourrait endommager l'extrémité fine de la pointe, rediriger le faisceau de liquide ou endommager l'orifice. N'appliquez qu'une légère pression lors de la fixation d'un embout et utilisez une pipette avec un cône d'embout à ressort.
2. Maintien de la pipette : Ne tenez pas la pipette dans votre main en attendant la centrifugeuse, le cycleur, etc. L'intérieur de la pipette va chauffer et entraîner l'expansion du coussin d'air, ce qui entraînera des écarts par rapport au volume réglé lors du pipetage.
3. Pré-mouillage : L'humidification de l'air à l'intérieur de la pointe et de la pipette prépare la pointe à l'échantillon et évite l'évaporation lors de l'aspiration du volume de transfert.
4. Aspiration verticale : Ceci est très important lors de la manipulation de petits volumes pour éviter l'effet capillaire qui se produit lorsque la pipette est tenue en biais.
5. Profondeur d'immersion : Immergez la pointe le moins possible pour éviter que du liquide ne pénètre dans la pointe par effet capillaire. Règle générale : plus la pointe et le volume sont petits, plus la profondeur d'immersion est faible. Nous recommandons un maximum de 2 mm lors du pipetage de petits volumes.
6. Distribution à un angle de 45° : Un écoulement optimal du liquide est garanti lorsque la pipette est tenue à un angle de 45°.
7. Contact avec la paroi du récipient ou la surface du liquide : de petits volumes ne peuvent être correctement distribués que lorsque l'embout est maintenu contre la paroi du récipient ou immergé dans le liquide. Même la dernière goutte de la pointe peut être distribuée avec précision.
8. Soufflage : Un soufflage est obligatoire après la distribution de faibles volumes pour distribuer même la dernière goutte de liquide présente dans l'embout. L'éruption doit également être effectuée contre la paroi de la cuve. Veiller à ne pas introduire de bulles d'air dans l'échantillon lors d'une soufflage à la surface du liquide.