Comment piper les petits volumes avec des pipettes manuelles manuelles

Alors que plus d'informations sur la réduction des réactifs et des coûts, les plus petits volumes sont en forte demande, par exemple, pour la préparation des réactions Mastermix ou enzymatiques de PCR. Mais la pipetage de petits volumes de 0,2 à 5 µl pose de nouveaux défis pour la précision et la précision de la pipetage. Les points suivants sont essentiels:

1. Pipette et taille de la pointe: Choisissez toujours la pipette avec le volume nominal le plus bas possible et la plus petite pointe pour garder le coussin d'air aussi petit que possible. Lors de la pipetage de 1 µl par exemple, choisissez une pipette de 0,25 à 2,5 µl et une pointe correspondante plutôt qu'une pipette de 1 à 10 µl.
2. Calibrage et entretien: il est essentiel que vos pipettes soient correctement calibrées et entretenues. De petits ajustements et des pièces cassées sur une pipette entraînent une augmentation massive des valeurs d'erreur systématiques et aléatoires. Un étalonnage selon ISO 8655 doit être effectué une fois par an.
3. Pipettes de déplacement positif: Vérifiez si vous avez une pipette de déplacement positive avec une plage de faible volume dans votre laboratoire. En général, l'utilisation de ce type de pipette conduit à un meilleur résultat de pipetage en termes de précision et de précision qu'avec des pipettes de coussin d'air classiques.
4. Essayez d'utiliser des volumes plus grands: vous pouvez envisager de diluer votre échantillon pour pipiter des volumes plus grands avec la même quantité dans la réaction finale. Cela peut réduire les erreurs de pipetage avec de très petits volumes d'échantillon.

En plus d'un bon outil, le chercheur doit avoir une très bonne technique de pipetage. Portez une attention particulière aux étapes suivantes:

1. Attachement de la pointe: Ne pas bloquer la pipette sur la pointe car cela peut endommager l'extrémité de la pointe fine, la rediffusion du faisceau liquide ou endommage l'orifice. Appliquez uniquement une pression légère lors de la fixation d'une pointe et utilisez une pipette avec un cône de pointe à ressort.
2. Conserver la pipette: ne tenez pas la pipette à la main en attendant la centrifugeuse, le cycleur, etc. L'intérieur de la pipette chauffera et conduira le coussin d'air pour se développer, ce qui entraîne des écarts par rapport au volume défini lors de la pipettage.
3. Présivement: L'humidification de l'air à l'intérieur de la pointe et de la pipette prépare la pointe pour l'échantillon et évite l'évaporation lors de l'aspiration du volume de transfert.
4. Aspiration verticale: Ceci est très important lors de la gestion de petits volumes pour éviter l'effet capillaire qui se produit lorsque la pipette est maintenue à un angle.
5. Profondeur d'immersion: immerger la pointe aussi peu que possible pour empêcher le liquide de saisir la pointe en raison de l'effet capillaire. Règle de base: plus la pointe et le volume sont petites, plus la profondeur d'immersion est faible. Nous recommandons un maximum de 2 mm lors de la pipetage de petits volumes.
6. La distribution à un angle de 45 °: l'écoulement optimal du liquide est garanti lorsque la pipette est maintenue à un angle de 45 °.
7. Contact à la paroi du navire ou à la surface du liquide: Les petits volumes ne peuvent être correctement dispensés que lorsque la pointe est maintenue contre la paroi du navire ou immergé dans le liquide. Même la dernière goutte de la pointe peut être distribuée avec précision.
8. Boule: Une éruption est obligatoire après avoir distribué de faibles volumes pour dispenser même la dernière goutte de liquide présente dans la pointe. L'explosion doit également être réalisée contre le mur du navire. Veillez à ne pas apporter des bulles d'air dans l'échantillon lorsque vous effectuez une éruption à la surface du liquide.