Les réactions en chaîne par polymérase (PCR) sont l’une des méthodes les plus connues utilisées dans les laboratoires des sciences de la vie.
Les plaques PCR sont produites à partir de plastiques de première qualité pour un excellent traitement et analyse des échantillons ou des résultats collectés.
Ils possèdent des parois fines et homogènes pour assurer un transfert thermique précis.
En préparation des applications en temps réel, d’infimes sections d’ADN ou d’ARN sont isolées et stockées dans des plaques PCR.
Les plaques PCR sont très efficaces en matière de thermoscellage et limitent également le flux de chaleur.
Cependant, aussi efficaces et fiables que soient les plaques PCR, les erreurs et les inexactitudes surviennent facilement lors du traitement des échantillons.
Par conséquent, si vous souhaitez obtenir un produit de bonne et de haute qualitéPlaques PCR.L’idéal est de contacter un fabricant de plaques PCR fiable. Avec cela, vous êtes assuré d’obtenir la meilleure offre.
Voici quelques précautions à suivre pour éviter la contamination des réactifs ou des échantillons et éviter que des inexactitudes ne s’insinuent dans les résultats.
Stérilisation des environs
Des positifs ou des négatifs incorrects se produisent en raison de la présence d'impuretés, ce qui vous fait douter des résultats.
Les impuretés et les contaminants se présentent sous diverses formes, telles que de l'ADN non lié ou des additifs chimiques, ce qui finit par diminuer l'efficience et l'efficacité de la réaction.
Il existe de nombreuses façons de réduire considérablement le taux de contamination de la plaque PCR.
L’utilisation de pointes à filtre stérilisées est un autre moyen utile d’empêcher les impuretés de s’infiltrer dans vos échantillons à travers les pipettes.
Consacrez un ensemble d’équipements entièrement propres, composé de pipettes et de portoirs, exclusivement à l’usage de la PCR. Cela garantira un transfert négligeable d’impuretés ou de contaminants dans le laboratoire.
Utilisez des agents de blanchiment et de l'éthanol sur les pipettes, les portoirs et les paillasses pour essuyer les contaminants.
Prévoyez un espace réservé pour toutes vos réactions PCR afin de minimiser davantage la contamination par les particules.
Utilisez des gants propres à chaque étape et remplacez-les fréquemment.
Plaques PCR
Inspectez la concentration et la pureté du modèle.
La propreté de la paillasse et de l’équipement utilisé lors de l’analyse des échantillons avec la PCR doit être maintenue. Il est essentiel de valider le degré de pureté des échantillons avant analyse et traitement.
Généralement, les analyseurs prennent en compte la concentration et le niveau de pureté des échantillons d'ADN.
Endeavour, le rapport d'absorbance pour 260 nm/280 nm ne doit pas être inférieur à 1,8. Tandis que des longueurs d'onde ultérieures comprises entre 230 nm et 320 nm sont utilisées pour identifier les impuretés.
Dans un cas, des sels chaotropiques et d'autres composés organiques sont détectés à un taux d'absorbance de 230 nm. La turbidité des échantillons d'ADN est également détectée et vérifiée à un taux d'absorbance de 320 nm.
Évitez de surcharger les plaques PCR avec du produit
Même si l’on souhaite analyser plusieurs produits simultanément, cela entraîne une contamination croisée des plaques PCR.
La surcharge des plaques PCR avec différents produits est un gaspillage et rend extrêmement difficile la vérification des échantillons.
Tenir des registres des réactifs PCR aliquotes
Des cycles de congélation/dégel continus et une utilisation fréquente d'aliquotes peuvent endommager les réactifs PCR, les enzymes et les DNTP par recristallisation.
Efforcez-vous toujours de surveiller le taux d’aliquote utilisé lors de la préparation des échantillons à analyser.
Le LIMS préférable est plus adapté pour contrôler l’inventaire et la quantité de réactifs et d’échantillons congelés ou décongelés.
Choisissez la meilleure température de recuit.
Choisir et utiliser une mauvaise température de recuit est encore une autre méthode. Les résultats de la PCR contiennent des erreurs.
Parfois, la réaction ne se déroule pas comme prévu. Il est souhaité de réduire la température de recuit afin de faciliter une réaction réussie.
Cependant, abaisser la température augmente les risques de faux positifs et d’apparition de dimères d’amorce.
Il est important de confirmer l'analyse de la courbe de fusion lors de l'utilisation des plaques PCR car c'est un bon indicateur pour sélectionner la bonne température de recuit.
Le logiciel de conception d'amorces facilite la conception, fournit une température de recuit correcte et réduit directement les erreurs dans les plaques PCR.
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Heure de publication : 30 octobre 2021