Johdanto
PCR-levytlaboratorioiden peruselementtejä useiden vuosien ajan, ovat yhä yleisempiä nykyaikaisessa ympäristössä, kun laboratoriot lisäävät suorituskykyään ja käyttävät yhä enemmän automaatiota työnkuluissaan. Näiden tavoitteiden saavuttaminen samalla kun säilytetään kokeiden tarkkuus ja eheys, voi olla vaikeaa. Yksi yleisimmistä alueista, joihin virheitä voi hiipiä, on tiivistysPCR-levyt, huonolla tekniikalla, joka mahdollistaa näytteiden haihtumisen, muuttaa pH:ta ja häiritsee siten entsymaattisia toimintoja ja saastuttaa. Oppiminen sinetöimään aPCR-levypoistaa nämä riskit oikein ja varmistaa toistettavat tulokset.
Etsi oikea sinetti PCR-levyllesi
Levykorkit vs. kalvotiivisteet vs. kannet
Capsovat hyvä tapa sinetöidä lautasesi tiukasti, samalla kun sinulla on joustavuus avata ja sulkea levy uudelleen helposti tarpeen mukaan ilman jätettä. Korkeilla on kuitenkin pari keskeistä haittapuolta.
Ensinnäkin sinun on ostettava tietty korkki, joka on yhteensopiva, minkä vuoksi ne eivät ole monipuolisia. Sinun on varmistettava, että valitsemasi korkki sopii levyyn, joka riippuu sen valmistajasta, ja valitse joko kupumainen tai litteä käyttämäsi lämpösyklilaitteen perusteella.
Toiseksi korkkien kiinnittäminen lautaselle voi olla hyvin toistuvaa ja työlästä, ja se voi aiheuttaa ristikontaminaation, jos asetat väärän korkin väärään kaivoon.
Vaikka kalvotiivisteet ovat vähemmän joustavia poistamisen ja vaihtamisen suhteen, ne ovat erittäin monipuolisia, koska ne sopivat kaikentyyppisille PCR-levyille riippumatta siitä, kuka valmistaja on. Ne voidaan yksinkertaisesti leikata sopivaan kokoon, mikä tekee niistä erittäin tehokkaita.
Toinen vaihtoehto on lautasen kansi. Ne tarjoavat vähemmän suojaa kuin korkit ja tiivisteet, ja niitä käytetään pääasiassa vain lyhytaikaiseen peittoon saastumisen estämiseksi.
Optiset vs. foliokalvotiivisteet
Tarvitsetpa optisen, kirkkaan tiivisteen taialumiinifoliokalvolautasen sinetöinti määräytyy kokeellisen muodon mukaan.Optiset tiivistyskalvotovat läpinäkyviä, jotta voit tarkkailla näytteitä samalla kun ne suojaavat niitä ja estävät haihtumisen. Ne ovat myös erityisen hyödyllisiä qPCR-kokeissa, joissa tehdään erittäin tarkkoja fluoresenssimittauksia suoraan levyltä, jolloin tarvitset tiivistyskalvon, joka suodattaa mahdollisimman vähän fluoresenssia. On tärkeää varmistaa, että käyttämäsi tiivisteen tai korkin optinen kirkkaus on riittävän korkea, jotta lukemat ovat tarkkoja.
Foliokalvot sopivat kaikille näytteille, jotka ovat valoherkkiä tai jotka on tarkoitus säilyttää alle 80 °C:ssa. Tästä syystä useimmat pitkäaikaiseen varastointiin tarkoitetut näytteet vaativat foliokalvon. Foliokalvot ovat myös lävistettäviä, mikä on hyödyllistä joko yksittäisten kuoppien tutkimiseen tai näytteiden siirtoon neuloilla. Tämä voi tapahtua manuaalisesti tai osana robottialustaa.
Ota myös huomioon, että aggressiiviset aineet, jotka sisältävät happoja, emäksiä tai liuottimia, vaativat tiivisteen, joka kestää ne, jolloin foliotiiviste on todennäköisesti sopivampi.
Liima vs. kuumasaumauskalvo
Liimakalvotiivisteetovat erittäin suoraviivaisia ja helppokäyttöisiä. Sinun tarvitsee vain, että käyttäjä kiinnittää tiivisteen levyyn ja paina yksinkertaista applikaattorityökalua alas ja muodostaa tiiviin tiivisteen.
Kuumasaumat ovat edistyneempiä ja tarjoavat pidempään kestävän tiivisteen, jolla on alhaisemmat haihtumisnopeudet verrattuna perinteiseen liimatiivisteeseen. Tämä vaihtoehto on sopiva, jos aiot säilyttää näytteitä pitkällä aikavälillä, vaikka tämä sisältää lisävaatimuksen levyjen sulkemislaitteille.
Kuinka sulkea PCR-levy
Levyn tiivistysmenetelmä
Itsekiinnittyvä
1. Varmista, että työskentelet tasaisella ja vakaalla työpinnalla
2. Poista kalvo pakkauksestaan ja poista tausta
3. Aseta sinetti varovasti levylle varmistaen samalla, että kaikki kuopat ovat peitettyinä
4. Käytä applikaattorityökalua paineen kohdistamiseen levyn yli. Aloita toisesta päästä ja siirry toiseen, paina tasaisesti
5. Toista tämä useita kertoja
6. Kiinnitä applikaattori ulkoisten kuoppien ympäri varmistaaksesi, että ne ovat myös kunnolla tiivistetty.
Lämpötiivisteet
Kuumasaumat toimivat sulattamalla kalvon jokaisen kuopan reunaan levytiivistimen avulla. Kuumasaumausaineen käyttöä varten katso laitteen valmistajan antamia ohjeita. Varmista, että valmistaja, jolta hankit laitteesi, on hyvämaineinen, sillä on erittäin tärkeää, että tiiviste on asianmukainen, tehokas ja vesitiivis.
Levyn tiivistyspäät
a. Kun painat tiivistettä, siirry sekä vaaka- että pystysuunnassa varmistaaksesi oikean tiivistyksen
b. On aina hyvä käytäntö suorittaa koeajo mitä tahansa tekemästäsi, eikä tämä eroa levytiivistyksen kanssa. Testaa tyhjällä levyllä ennen kuin käytät sitä näytteiden kanssa.
c. Kun testaat, irrota tiiviste ja katso, että liima on tarttunut kunnolla kiinni ilman rakoja. Tästä on visuaalinen esitys ensimmäisessä viiteasiakirjassa. Jos levyä ei ole tiivistetty kunnolla, tiivistettä poistaessasi jää aukkoja, joissa liima ei ole täysin kiinnittynyt levyyn.
d. Näytteiden kuljetuksessa voi olla hyödyllistä kiinnittää muovitiiviste kalvotiivisteen päälle lisäsuojan saamiseksi (etenkin lävistystä vastaan).
e. Varmista aina, että kalvoa levitettäessä ei ole kuoppia tai ryppyjä - ne aiheuttavat vuotoja ja haihtumista
Postitusaika: 23.11.2022