برای واکنشهای تقویت موفقیت آمیز ، لازم است که اجزای واکنش فردی در غلظت صحیح در هر آماده سازی وجود داشته باشد. علاوه بر این ، مهم است که هیچ آلودگی رخ ندهد.
به خصوص هنگامی که بسیاری از واکنش ها باید تنظیم شوند ، ایجاد شده است تا به جای اینکه هر یک از معرفها را به طور جداگانه در هر کشتی قرار دهد ، به اصطلاح مخلوط استاد تهیه شود. مخلوط های از پیش تنظیم شده از نظر تجاری در دسترس هستند ، که در آن فقط اجزای خاص نمونه (آغازگر) و آب اضافه می شوند. از طرف دیگر ، ترکیب اصلی می تواند توسط خودتان تهیه شود. در هر دو نوع ، مخلوط به هر کشتی PCR بدون الگوی توزیع می شود و نمونه DNA جداگانه در انتها به طور جداگانه اضافه می شود.
با استفاده از یک ترکیب اصلی دارای چندین مزیت است: اول ، تعداد مراحل لوله کشی منفرد کاهش می یابد. به این ترتیب ، خطر خطاهای کاربر در هنگام پیپت و خطر آلودگی به حداقل می رسد و البته زمان صرفه جویی می شود. در اصل ، دقت پیپت نیز بیشتر است ، زیرا حجم های بزرگتر دوز می شوند. درک این امر هنگام بررسی داده های فنی پیپت ها آسان است: هرچه حجم دوز کوچکتر باشد ، انحراف بیشتر می تواند باشد. این واقعیت که همه آماده سازی ها از همان کشتی انجام می شود ، تأثیر مثبتی بر همگن بودن دارد (اگر به خوبی مخلوط شود). این همچنین باعث افزایش تکرارپذیری آزمایشات می شود.
هنگام تهیه مخلوط اصلی ، حداقل 10 ٪ حجم اضافی باید اضافه شود (به عنوان مثال اگر 10 آماده سازی لازم است ، بر اساس 11 محاسبه کنید) ، به طوری که حتی آخرین کشتی به درستی پر شده است. در این روش ، (ناچیز) پیپ نادرست ، و تأثیر از دست دادن نمونه در هنگام دوز محلول های حاوی مواد شوینده می تواند جبران شود. مواد شوینده در محلول های آنزیم مانند پلیمرازها و مخلوط های اصلی موجود است و باعث تشکیل کف و باقیمانده در سطح داخلی طبیعی می شودنکات پیپت.
بسته به کاربرد و نوع مایع مورد نیاز برای پخش ، باید تکنیک پیپتینگ صحیح (1) انتخاب شود و تجهیزات مناسب انتخاب شود. برای راه حل های حاوی مواد شوینده ، یک سیستم جابجایی مستقیم یا نکات پیپت به اصطلاح "کم نگهدارنده" به عنوان گزینه ای برای پیپت های آب و هوا توصیه می شود. اثرنوک پیپت آسمبتنی بر یک سطح آبگریز مخصوصاً است. مایعات حاوی مواد شوینده یک فیلم باقیمانده را در داخل و خارج نمی گذارند ، به طوری که از بین رفتن محلول به حداقل می رسد.
علاوه بر دوز دقیق همه مؤلفه ها ، همچنین مهم است که هیچ آلودگی به آماده سازی رخ ندهد. استفاده از مواد مصرفی با خلوص زیاد کافی نیست ، زیرا فرآیند پیپتینگ در یک پیپت کوسن هوا می تواند آئروسل هایی را تولید کند که در پیپت باقی بمانند. DNA که ممکن است در آئروسل موجود باشد می تواند در مرحله پیپتینگ زیر از یک نمونه به نمونه دیگر منتقل شود و در نتیجه منجر به آلودگی شود. سیستم های جابجایی مستقیم که در بالا ذکر شد نیز ممکن است این خطر را به حداقل برساند. برای پیپت های آب و هوا ، استفاده از نکات فیلتر برای محافظت از مخروط پیپت با حفظ اسپلش ، آئروسل و زیست مولکول ها منطقی است.
زمان پست: دسامبر 06-2022