استاندارد سازی فرآیندها شامل بهینه سازی آنها و ایجاد و هماهنگی متعاقب آنها است و به عملکرد بهینه طولانی مدت-مستقل از کاربر امکان پذیر است. استاندارد سازی نتایج با کیفیت بالا و همچنین تکرارپذیری و مقایسه آنها را تضمین می کند.
هدف (کلاسیک) PCR تولید یک نتیجه قابل اعتماد و قابل تکرار است. برای برنامه های خاص ، عملکردمحصول PCRهمچنین مرتبط است برای این واکنش ها ، باید مراقب باشید تا نمونه ها به خطر بیفتند و گردش کار PCR پایدار باشد. به طور خاص ، این ترجمه به به حداقل رساندن معرفی آلودگی هایی است که می تواند منجر به نتایج منفی مثبت یا کاذب کاذب یا حتی مهار واکنش PCR شود. علاوه بر این ، شرایط واکنش باید تا حد امکان برای هر نمونه جداگانه در یک اجرا یکسان باشد و همچنین به واکنشهای بعدی (با همان روش) قابل انتقال باشد. این به ترکیب واکنش ها و همچنین به نوع کنترل دما در چرخه اشاره دارد. البته از خطاهای کاربر تا حد امکان جلوگیری می شود.
در زیر ، ما چالش هایی را که در طول آماده سازی و در طول اجرای یک PCR مشاهده می شود - و رویکردهای راه حل هایی که با توجه به ابزارها و مواد مصرفی مورد استفاده برای استاندارد سازی گردش کار PCR وجود دارد ، نشان خواهیم داد.
آماده سازی واکنش
توزیع اجزای واکنش به روکش های PCR یا صفحات ، به ترتیب شامل چالش های مختلفی است که باید برطرف شوند:
شرایط واکنش
دوز دقیق و دقیق اجزای فردی در هنگام هدف قرار دادن یکسان ترین شرایط واکنش ممکن ضروری است. علاوه بر یک تکنیک پیپتینگ خوب ، انتخاب ابزار مناسب بسیار مهم است. مخلوط های اصلی PCR اغلب حاوی موادی هستند که ویسکوزیته را افزایش می دهند یا کف تولید می کنند. در طی فرآیند پیپت ، اینها منجر به مرطوب کننده قابل توجهی ازنکات پیپت، بنابراین دقت پیپت را کاهش می دهد. استفاده از سیستم های توزیع مستقیم یا نکات پیپت جایگزین که کمتر در معرض خیس شدن قرار دارند می تواند دقت و دقت روند پیپ را بهبود ببخشد.
الودگی
در طی فرآیند توزیع ، آئروسل ها تولید می شوند که در صورت دسترسی به داخل پیپت ، می توانند در مرحله پیپتینگ بعدی نمونه دیگری را آلوده کنند. این کار را می توان با استفاده از نکات فیلتر یا سیستم های جابجایی مستقیم پیشگیری کرد.
مواد مصرفی مانندنکات، کشتی ها و صفحات مورد استفاده در گردش کار PCR نباید حاوی موادی باشند که نمونه را به خطر می اندازند یا نتیجه را جعل می کنند. این موارد شامل DNA ، DNAS ، RNASES و مهار کننده های PCR و همچنین مؤلفه هایی است که ممکن است به طور بالقوه از مواد در طول واکنش - مواد شناخته شده به عنوان شستشو استفاده کنند.
خطای کاربر
هرچه نمونه های بیشتری پردازش شوند ، خطر خطا بیشتر می شود. به راحتی می تواند اتفاق بیفتد که یک نمونه در کشتی اشتباه یا چاه اشتباه قرار می گیرد. این خطر را می توان با علامت گذاری به راحتی قابل تشخیص چاه ها کاهش داد. از طریق اتوماسیون مراحل توزیع ، "عامل انسانی" ، یعنی خطاها و تغییرات مربوط به کاربر ، به حداقل می رسد ، بنابراین تکرارپذیری افزایش می یابد ، به ویژه در مورد حجم واکنش کوچک. این امر به صفحاتی از ثبات ابعادی کافی نیاز دارد که در یک ایستگاه کاری به کار گرفته شوند. بارکد های پیوست قابلیت خواندن دستگاه اضافی را ارائه می دهند ، که ردیابی نمونه را در کل فرآیند ساده می کند.
برنامه نویسی ترموسیکلر
برنامه نویسی یک ابزار می تواند زمان بر و همچنین مستعد خطا باشد. ویژگی های مختلف چرخه حرارتی PCR برای ساده کردن این مرحله فرآیند و از همه مهمتر ، برای ایمن سازی با هم کار می کنند:
عملکرد آسان و راهنمایی خوب کاربر اساس برنامه نویسی کارآمد است. با تکیه بر این بنیاد ، مدیریت کاربر محافظت شده با رمز عبور مانع از تغییر برنامه های خود توسط سایر کاربران خواهد شد. اگر چندین چرخه (از همان نوع) در حال استفاده باشند ، مفید است اگر یک برنامه مستقیماً از طریق USB یا اتصال مستقیم از یک ابزار به ابزار دیگر منتقل شود. نرم افزار رایانه ای مدیریت مرکزی و ایمن برنامه ها ، حقوق کاربر و اسناد را در رایانه امکان پذیر می کند.
اجرای PCR
در حین اجرا ، DNA در رگ واکنش تقویت می شود ، جایی که هر نمونه باید در شرایط واکنش یکسان و مداوم قرار گیرد. جنبه های زیر برای این فرآیند مرتبط است:
کنترل دما
دقت عالی در کنترل دما و همگن بودن بلوک سیکلر پایه ای برای تهویه حتی دما از همه نمونه ها است. کیفیت بالای عناصر گرمایشی و سرمایش (عناصر peltier) و همچنین نحوه اتصال اینها به بلوک ، عوامل تعیین کننده ای هستند که خطر اختلاف دما را به عنوان "اثر لبه" تعیین می کند
تبخیر
غلظت مؤلفه های واکنش فردی نباید در طول واکنش به دلیل تبخیر تغییر کند. در غیر این صورت ، ممکن است خیلی کممحصول PCRممکن است تولید شود ، یا اصلاً. بنابراین با اطمینان از مهر و موم ایمن ، به حداقل رساندن تبخیر بسیار مهم است. در این حالت ، درب گرم شده ترموسیکلر و مهر و موم کشتی دست در دست است. گزینه های مختلف آب بندی برایصفحات PCR (پیوند: مقاله آب بندی)به موجب آن بهترین مهر و موم از طریق آب بندی گرما حاصل می شود. بسته های دیگر نیز ممکن است مناسب باشند ، تا زمانی که فشار تماس درب چرخه ای را می توان در مهر و موم انتخاب شده تنظیم کرد.
استاندارد سازی فرآیند به منظور محافظت از نتایج دقیق و قابل تکرار در طولانی مدت وجود دارد. این شامل نگهداری منظم تجهیزات برای اطمینان از همیشه در شرایط کار مناسب است. همه مواد مصرفی باید از کیفیت بالایی در تمام تعداد زیادی تولید شده برخوردار باشند و در دسترس بودن قابل اعتماد آنها باید تضمین شود.
زمان پست: نوامبر -29-2022