Anplifikazio-erreakzio arrakastatsuak izateko, beharrezkoa da erreakzio-osagai indibidualak prestaketa bakoitzean kontzentrazio egokian egotea. Gainera, garrantzitsua da kutsadurarik ez gertatzea.
Batez ere, erreakzio asko konfiguratu behar direnean, master mix izeneko bat prestatzea ezarri da, erreaktibo bakoitza bereizita ontzi bakoitzean pipetatu beharrean. Aurrez konfiguratutako nahasketak komertzialki eskuragarri daude, eta horietan laginaren osagai espezifikoak (primer) eta ura bakarrik gehitzen dira. Bestela, master mixa zuk zeuk prestatu dezakezu. Bi aldaeretan, nahasketa PCR ontzi bakoitzean txantiloirik gabe banatzen da eta banakako DNA lagina bereizita gehitzen da amaieran.
Master mix bat erabiltzeak hainbat abantaila ditu: Lehenik eta behin, pipetatze-urrats bakarren kopurua murrizten da. Modu honetan, bai pipetatzean erabiltzaileak akatsak izateko arriskua bai kutsatzeko arriskua gutxitzen dira eta, jakina, denbora aurrezten da. Printzipioz, pipetearen zehaztasuna ere handiagoa da, bolumen handiagoak dosifikatzen baitira. Hau erraz ulertzen da pipeten datu teknikoak egiaztatzean: zenbat eta bolumen dosifikatua txikiagoa izan, orduan eta desbideraketak handiagoak izan daitezke. Prestaketa guztiak ontzi beretik etortzeak eragin positiboa du homogeneotasunean (ondo nahastuta egonez gero). Horrek esperimentuen erreproduzigarritasuna ere hobetzen du.
Nahasketa nagusia prestatzerakoan, gutxienez % 10 gehigarriko bolumena gehitu behar da (adibidez, 10 prestaketa behar badira, kalkulatu 11 oinarri hartuta), azken ontzia ere behar bezala bete dadin. Modu honetan, pipetearen zehaztasun ezak (arinak) eta detergenteak dituzten soluzioak dosifikatzerakoan lagin-galeren eragina konpentsatu daiteke. Detergenteak entzima-disoluzioetan daude, hala nola polimerasak eta nahasketa nagusiak, normalaren barruko gainazalean aparra eta hondarrak sortzen dituzte.pipeta puntak.
Aplikazioaren eta banatu nahi den likido motaren arabera, pipetatze-teknika zuzena (1) aukeratu behar da eta ekipo egokia aukeratu behar da. Detergenteak dituzten soluzioetarako, zuzeneko desplazamendu-sistema edo "erretentzio baxua" izeneko pipeta-puntak gomendatzen dira, aire-kuxin-pipetentzako alternatiba gisa. -ren eraginaACE PIPETA puntagainazal bereziki hidrofobo batean oinarritzen da. Detergenteak dituzten likidoek ez dute hondakin-filmik uzten barrutik eta kanpotik, eta horrela, disoluzioaren galera ahalik eta txikiena izan daiteke.
Osagai guztien dosifikazio zehatzaz gain, garrantzitsua da prestakinen kutsadurarik ez gertatzea. Ez da nahikoa purutasun handiko kontsumigarriak erabiltzea, pipeta-pipette batean aire-kuxin-prozesuak pipetan geratzen diren aerosolak sor ditzakeelako. Aerosolean egon daitekeen DNA lagin batetik bestera transferitu daiteke hurrengo pipetatze-urratsean eta, horrela, kutsadura eragin. Goian aipatutako zuzeneko desplazamendu-sistemek ere arrisku hori gutxitu dezakete. Aire-kuxin-pipetetarako, zentzuzkoa da iragazki-puntak erabiltzea pipeta-konoa babesteko zipriztinak, aerosolak eta biomolekulak mantenduz.
Argitalpenaren ordua: 2022-12-06