Prozesuen estandarizazioak haien optimizazioa eta ondorengo ezarpena eta harmonizazioa barne hartzen ditu, epe luzerako errendimendu optimoa ahalbidetuz, erabiltzailearengandik independentea. Estandarizazioak kalitate handiko emaitzak bermatzen ditu, baita haien erreproduzigarritasuna eta konparagarritasuna ere.
PCR (klasikoaren) helburua emaitza fidagarri eta erreproduzigarria sortzea da. Zenbait aplikaziotarako, etekinaPCR produktuaere garrantzitsua da. Erreakzio horietarako, kontuz ibili behar da laginak arriskuan jartzen ez direla eta PCR lan-fluxua egonkorra izaten jarraitzen duela. Zehazki, emaitza positibo faltsuak edo negatibo faltsuak ekar ditzaketen kutsadurak murriztea edo PCR erreakzioa galarazi ere egiten du. Gainera, erreakzio-baldintzak ahalik eta berdinak izan behar dira proba bateko lagin bakoitzarentzat eta ondorengo erreakzioetara ere transferigarriak izan behar dira (metodo berekoak). Horrek erreakzioen konposizioari egiten dio erreferentzia, baita ziklogailuaren tenperatura-kontrol motari ere. Erabiltzaileen akatsak, noski, ahalik eta gehien saihestu behar dira.
Jarraian, PCR baten prestaketan eta exekuzioan zehar aurkitzen diren erronkak erakutsiko ditugu, eta PCR lan-fluxuen estandarizaziorako erabiltzen diren tresnei eta kontsumigarriei dagokienez dauden soluzioen ikuspegiak.
Erreakzioaren prestaketa
Erreakzio-osagaiak PCR-ontzietan edo plaketan banatzeak, hurrenez hurren, gainditu beharreko erronka ugari ditu:
Erreakzio-baldintzak
Banakako osagaien dosifikazio zehatza eta zehatza ezinbestekoa da ahalik eta erreakzio-baldintza berdintsuenak lortzeko. Pipetatze-teknika onaz gain, tresna egokia hautatzea ezinbestekoa da. PCR master-mixek biskositatea areagotzen duten edo aparra sortzen duten substantziak izaten dituzte. Pipetatze-prozesuan, hauek bustitze handia eragiten dutepipeta puntak, horrela pipetaren zehaztasuna murriztuz. Hezetzeko joera gutxiago duten pipeta-puntu alternatiboen erabilera zuzeneko sistemak erabiltzeak pipetatze-prozesuaren zehaztasuna eta zehaztasuna hobetu ditzake.
Kutsadurak
Banaketa-prozesuan, aerosolak sortzen dira eta pipetaren barrura iristen uzten badira, beste lagin bat kutsa dezakete hurrengo pipetatze-urratsean. Hori saihestu daiteke iragazki-puntak edo zuzeneko desplazamendu-sistemak erabiliz.
Kontsumigarriak, esaterakoaholkuakPCR lan-fluxuan erabiltzen diren ontziek eta plakek ez dute lagina arriskuan jartzen edo emaitza faltsutzen duten substantziarik eduki behar. Horien artean, DNA, DNasak, RNasak eta PCR inhibitzaileak daude, baita erreakzioan zehar materiala potentzialki lixibiatu daitezkeen osagaiak ere, lixibiagarriak izenez ezagutzen diren substantziak.
Erabiltzailearen errorea
Zenbat eta lagin gehiago prozesatu, orduan eta handiagoa da errore-arriskua. Erraz gerta daiteke lagin bat okerreko ontzira edo okerreko putzura pipetatzea. Arrisku hori dezente murriztu daiteke putzuak erraz hautematen diren markatuz. Banaketa-urratsen automatizazioaren bidez, “giza faktorea”, hau da, erroreak eta erabiltzaileekin lotutako aldaerak gutxitzen dira, eta horrela, erreproduzigarritasuna areagotzen da, batez ere erreakzio bolumen txikien kasuan. Honek lan-estazio batean dimentsio-egonkortasun nahikoa duten plakak behar dira. Erantsitako barra-kodeek makinaren irakurgarritasun gehigarria eskaintzen dute, eta horrek prozesu osoan zehar laginaren jarraipena errazten du.
Termoziklatuaren programazioa
Tresna bat programatzeak denbora asko behar duela frogatu daiteke, baita akatsetarako joera ere. PCR termiko ziklogailuaren funtzio desberdinek elkarrekin funtzionatzen dute prozesu-urrats hau errazteko eta, batez ere, segurua izateko:
Funtzionamendu erraza eta erabiltzailearen orientazio ona dira programazio eraginkorren oinarria. Oinarri hori oinarri hartuta, pasahitz bidez babestutako erabiltzaileen administrazioak norberaren programak beste erabiltzaileek aldatzea eragotziko du. Hainbat ziklogailu (mota berekoak) erabiltzen badira, onuragarria da programa bat tresna batetik bestera zuzenean USB edo konektibitatearen bidez transferitzea. Ordenagailu-softwareak programak, erabiltzaile-eskubideak eta dokumentuak ordenagailuan kudeatzea ahalbidetzen du.
PCR exekuzioa
Ibilaldian zehar, DNA anplifikatu egiten da erreakzio-ontzian, non lagin bakoitza erreakzio-baldintza berdinak eta koherenteak jasan behar dituena. Prozesurako alderdi hauek garrantzitsuak dira:
Tenperatura kontrola
Tenperatura kontrolatzeko zehaztasun bikaina eta ziklagailu-blokearen homogeneotasuna lagin guztien tenperatura uniforme izateko oinarri dira. Berotze- eta hozte-elementuen kalitate handia (peltier-elementuak), baita hauek blokearekin konektatzeko modua ere, "ertz-efektua" deritzon tenperatura-desberdintasunen arriskua zehaztuko duten faktore erabakigarriak dira.
Lurruntzea
Erreakzio osagai indibidualen kontzentrazioek ez dute aldatu behar erreakzioan zehar lurrunketaren ondorioz. Bestela, baliteke oso gutxi horiPCR produktuasor daiteke, edo bat ere ez. Beraz, ezinbestekoa da lurrunketa minimizatzea zigilu segurua ziurtatuz. Kasu honetan, termoziklagailuaren estalki berotua eta ontziaren zigiluak eskuz esku lan egiten dute. Zigilatzeko aukera desberdinak daude eskuragarriPCR plakak (esteka: Zigilatzeko artikulua), zeinaren bidez zigilu onena bero-zigilaren bidez lortzen da. Beste itxiera batzuk ere egokiak izan daitezke, betiere ziklogailuaren estalkiaren ukipen-presioa hautatutako zigilura egokitu badaiteke.
Prozesuaren estandarizazioa indarrean dago epe luzera emaitza zehatzak eta errepikagarriak bermatzeko. Horrek ekipamenduaren ohiko mantentze-lanak barne hartzen ditu, beti funtzionatzeko egoera onean dagoela ziurtatzeko. Kontsumigarri guztiek kalitate handikoak izan behar dute ekoitzitako lote guztietan, eta haien erabilgarritasun fidagarria bermatu behar da.
Argitalpenaren ordua: 2022-12-29