Prozesuen estandarizazioak optimizazioa eta ondorengo establezimendua eta harmonizazioa biltzen ditu, epe luzeko errendimendu optimoa ahalbidetuz - erabiltzailearen independentea. Normalizazioak kalitate handiko emaitzak bermatzen ditu, baita ugalketa eta konparagarritasuna ere.
PCR (klasiko) helburua emaitza fidagarri eta erreproduzitzaile baten sorrera da. Aplikazio jakin batzuetarako, errendimenduaPCR produktuaGarrantzitsua da. Erreakzio horiengatik, zainketa hartu behar da laginak arriskuan ez daudela ziurtatzeko eta PCR lan-fluxua egonkorra dela ziurtatzeko. Zehazki, emaitza negatibo positibo faltsuak edo faltsuak sor ditzakeen kutsadurak sartzea minimizatzera itzultzen da. Gainera, erreakzio baldintzak ahalik eta berdinak izan behar dira korrika barruan lagin bakoitzarentzat eta ondorengo erreakzioetara (metodo bereko) transferitu daitezke. Horrek erreakzioen konposizioa aipatzen du, baita zikloko tenperatura kontrolatzeko ere. Erabiltzaileen akatsak, noski, ahalik eta gehien saihestu behar dira.
Jarraian, PCR baten prestaketan eta PCR baten gainean topatzen diren erronkak frogatuko ditugu PCR laneko fluxuen estandarizaziorako erabiltzen diren tresnekin eta kontsumitzaileei dagokienez.
Erreakzio prestaketa
Erreakzioaren osagaiak PCR-ontzietan edo plateretan, hurrenez hurren, gainditu behar diren erronka batzuk dira:
Erreakzio baldintzak
Osagai indibidualen dosifikazio zehatza eta zehatza ezinbestekoa da posible da erreakzio baldintza berdinenak lortzeko. Hoditeria teknika onaz gain, tresna egokia hautatzea kritikoa da. PCR maisu-nahasketak maiz izaten ditu biskositatea handitzen duten edo aparra sortzen duten substantziak. Pipetazio prozesuan zehar, horiek hezetasun handia dutePipeta Aholkuaketa, beraz, pipeting zehaztasuna murrizten da. Zuzeneko dispentsazio sistemak edo hezetzeak jasaten dituzten pipeta-aholku alternatiboen erabilerak pipetazio prozesuaren zehaztasuna eta zehaztasuna hobetu ditzake.
Kutsadurak
Baztertzeko prozesuan, aerosolak sortzen dira, pipeta barrutik iristen baimenduta badago, beste lagin bat kutsatu dezakeen hurrengo pipetazio urratsean. Hori gerta daiteke iragazki aholkuak edo desplazamendu sistemak erabiliz.
Kontsumigarriak, esaterakoaholak, PCR lan-fluxuetan erabiltzen diren ontziek eta platerak ez dituzte laginak arriskuan jartzen dituzten substantziak eduki edo emaitza faltsutzea. Horien artean, DNA, DNASS, RNASSek eta PCR inhibitzaileen artean daude, baita erreakzioan materialak izan ditzakeen osagaiak ere, lixibi gisa ezagutzen diren substantziak.
Erabiltzailearen akatsa
Zenbat eta lagin gehiago prozesatu, orduan eta errorearen arriskua handiagoa da. Erraz gerta daiteke lagin bat ontzia okerra edo okerra dela. Arrisku hori putzuen markaketa erraz ikus daiteke. Dispensing urratsak automatizatzearen bidez, "giza faktorea", hau da, akatsak eta erabiltzailearekin lotutako aldakuntzak, gutxigabean handitzen dira, batez ere errejenigarritasuna handituz, batez ere erreakzio bolumen txikien kasuan. Horrek lantoki batean lan egiteko dimentsioko egonkortasun nahikoa du. Erantsitako kodetek makina-irakurgarritasun osagarria eskaintzen dute, eta horrek laginen jarraipena errazten du prozesu osoan zehar.
Termokiklaren programazioa
Tresna bat programatzea denbora asko kostatzen dela eta akats-joera izan daiteke. PCR Cycler termiko ezberdinek elkarrekin funtzionatzen dute prozesuaren urratsa sinplifikatzeko eta, garrantzitsuena, segurua izan dadin:
Eragiketa erraza eta erabiltzailearen orientazio ona programazio eraginkorraren oinarria dira. Fundazio honetako eraikinak, pasahitz bidez babestutako erabiltzaile administrazioak norberaren programak beste erabiltzaile batzuek aldatzea eragotziko dute. Zirkulatzaile anitz (mota berekoak) erabiltzen badira, onuragarria da programa bat instrumentu batetik bestera zuzenean transferitu daitekeela USB edo Konektagarritasun bidez. Software informatikoak programa, erabiltzaileen eskubideak eta dokumentuak ordenagailuen administrazio zentrala eta segurua ahalbidetzen ditu.
PCR RUN
Korrikan zehar, ADNa erreakzio ontzian anplifikatzen da, non lagin bakoitza erreakzio baldintza berdinak eta koherenteak jasan behar diren. Alderdi hauek garrantzitsuak dira prozesurako:
Tenperatura kontrolatzea
Zehaztutako tenperatura kontrolatzeko eta cycler blokearen homogeneotasunaren zehaztasun bikaina dira lagin guztien tenperatura girotzeko oinarria. Berogailuaren eta hozte elementuen kalitate handia (peltier elementuak), baita blokearekin konektatuta dauden modua ere, "Ertz Eragina" izenarekin ezagutzen diren tenperatura desadostasun arriskua zehaztuko duten erabakitzeko faktoreak dira.
Lurrazal
Erreakzioaren banakako osagaien kontzentrazioak ez dira lurruntzeagatik erreakzioaren zehar aldatu behar. Bestela, litekeena da oso gutxiPCR produktuasor daiteke, edo batere ez. Beraz, funtsezkoa da lurruntzea minimizatzea zigilu segurua ziurtatuz. Kasu honetan, termokiklaren tapa berotua eta ontziaren zigilua eskuan eskutik lan egiten dute. Zigilatzeko aukera desberdinak eskuragarri daudePCR plakak (esteka: zigilatzeko artikulua), eta, beraz, zigilu onena bero zigilatzearen bidez lortzen da. Beste itxiera batzuk ere egokiak izan daitezke, betiere Cycler estalkiaren kontaktuaren presioa hautatutako zigilura egokitu daiteke.
Prozesuen estandarizazioa bere lekuan dago epe luzera emaitza zehatzak eta erreproduzitzaileak babesteko. Horrek ekipamenduaren ohiko mantentzea barne hartzen du lan egoera onean egon dadin. Kontsumitzaile guztiek kalitate handiko kalitate handikoak izan beharko lituzkete sortutako lote guztietan, eta haien eskuragarritasun fidagarria bermatu behar da.
Ordua: 20122ko azaroaren 29a