Nola pipetatu bolumen txikiak eskuzko eskuzko pipetekin

Erreaktiboak eta kostuak murrizteko arreta gehiago jartzen ari direnez, bolumen txikiagoek eskaera handia dute, adibidez, PCR Mastermix edo entzimaren erreakzioak prestatzeko. Baina 0,2 - 5 µL bitarteko bolumen txikiak pipetatzeak erronka berriak ezartzen ditu pipeteatzeko zehaztasun eta zehaztasunerako. Honako puntu hauek ezinbestekoak dira:

1. Pipeta eta puntaren tamaina: aukeratu beti ahalik eta bolumen nominal baxuena duen pipeta eta punta txikiena duen aire-kuxina ahalik eta txikiena izateko. 1 µL pipetatzerakoan, adibidez, aukeratu 0,25 – 2,5 µL pipeta eta bat datorren punta 1 – 10 µL pipeta baino.
2. Kalibrazioa eta mantentze-lanak: ezinbestekoa da zure pipetak behar bezala kalibratu eta mantentzea. Pipetaren doikuntza txikiek eta hautsitako piezak errore sistematikoen eta ausazkoen balioak izugarri handitzen dituzte. ISO 8655 arauaren araberako kalibrazioa urtean behin egin behar da.
3. Desplazamendu positiboaren pipetak: egiaztatu zure laborategian bolumen baxuko pipeta desplazamendu positiborik baduzu. Oro har, pipeta mota hau erabiltzeak pipetatze-emaitza hobea lortzen du zehaztasun eta zehaztasun aldetik aire-kuxin pipeta klasikoekin baino.
4. Saiatu bolumen handiagoak erabiltzen: baliteke zure lagina diluitzea azken erreakzioan kantitate bera duten bolumen handiagoak pipetatzeko. Horrek pipeteatzeko akatsak murrizten ditu lagin-bolumen oso txikiekin.

Tresna onaz gain, ikertzaileak pipeteatzeko teknika oso ona izan behar du. Arreta berezia jarri urrats hauei:

1. Punta eranskina: ez sartu pipeta puntan, honek punta-mutur fina kaltetu dezakeelako likido-sorta birbideratu edo zuloa kaltetu. Punta bat eransten duzunean bakarrik egin presio arina eta erabili malgukidun punta-konoa duen pipeta.
2. Pipeta eustea: Ez eduki pipeta eskuan zentrifugatzailearen, ziklogailuaren eta abarren zain dagoen bitartean. Pipetaren barrualdea berotu egingo da eta aire-kuxina zabaltzera eramango du, eta ondorioz, pipetatzerakoan ezarritako bolumenaren desbideratzeak izango dira.
3. Aurrez bustitzea: puntaren eta pipetaren barruko airearen hezetzeak punta laginarentzat prestatzen du eta transferentzia-bolumena aspiratzerakoan lurruntzea ekiditen du.
4. Aspirazio bertikala: hau oso garrantzitsua da bolumen txikiak maneiatzen direnean, pipeta angelu batean eusten denean sortzen den efektu kapilarra saihesteko.
5. Murgiltze-sakonera: Murgildu punta ahalik eta gutxien, efektu kapilarra dela-eta puntan likidorik sar ez dadin. Oinarrizko araua: zenbat eta txikiago izan punta eta bolumena, orduan eta txikiagoa da murgiltze-sakonera. Gehienez 2 mm gomendatzen dugu bolumen txikiak pipetatzerakoan.
6. 45°-ko angeluan banatzea: likidoaren irteera optimoa bermatzen da pipeta 45°-ko angeluan mantentzen denean.
7. Kontaktua ontziaren hormarekin edo gainazal likidoarekin: bolumen txikiak behar bezala banatu daitezke punta ontziaren hormaren kontra edo likidoan murgilduta dagoenean soilik. Puntako azken tanta ere zehaztasunez banatu daiteke.
8. Leherketa: Leherketa derrigorrezkoa da bolumen baxuak banatu ondoren, puntan dagoen azken likido tanta banatzeko. Leherketa ere ontziaren hormaren kontra egin behar da. Kontuz ibili aire-burbuilak ez sartzeko laginaren gainazalean leherketa bat egiterakoan.