0,2–5 µL mahtude pipeteerimisel on pipeteerimise täpsus ja täpsus ülimalt olulised, hea pipeteerimistehnika on oluline, sest käsitsemisvead on väikeste koguste puhul ilmsemad.
Kuna rohkem tähelepanu pööratakse reaktiivide ja kulude vähendamisele, on väiksemate mahtude järele suur nõudlus, nt PCR Mastermixi või ensüümreaktsioonide valmistamiseks. Kuid väikeste koguste 0,2–5 µL pipeteerimine seab pipeteerimise täpsuse ja täpsusega uued väljakutsed. Järgmised punktid on olulised:
- Pipeti ja otsa suurus: valige alati väikseima võimaliku nimimahuga ja väikseima otsaga pipett, et õhkpadi oleks võimalikult väike. Näiteks 1 µL pipeteerimisel valige 0,25–2,5 µL pipett ja sellele sobiv otsik, mitte 1–10 µL pipett.
- Kalibreerimine ja hooldus: On oluline, et teie pipetid oleksid korralikult kalibreeritud ja hooldatud. Väikesed kohandused ja katkised osad pipetil toovad kaasa süstemaatiliste ja juhuslike vigade väärtuste tohutu suurenemise. Kalibreerimine vastavalt ISO 8655-le tuleb läbi viia üks kord aastas.
- Positiivse nihkega pipetid: kontrollige, kas teie laboris on väikese mahuga positiivse nihkega pipett. Üldiselt annab seda tüüpi pipettide kasutamine täpsuse ja täpsuse osas parema pipetimise tulemuse kui klassikaliste õhkpadjaga pipettide puhul.
- Proovige kasutada suuremaid koguseid: võite kaaluda proovi lahjendamist, et lõppreaktsioonis pipeteerida suuremaid koguseid sama kogusega. See võib vähendada pipeteerimisvigu väga väikese proovikoguse korral.
Lisaks heale tööriistale peab teadlasel olema väga hea pipeteerimistehnika. Pöörake erilist tähelepanu järgmistele sammudele:
- Otsakinnitus: Ärge ummistage pipetti otsa, kuna see võib kahjustada peenikest otsikut, põhjustada vedelikukiire ümbersuunamist või düüsi kahjustamist. Otsiku kinnitamisel rakendage ainult kerget survet ja kasutage vedruga otsakoonusega pipetti.
- Pipeti hoidmine: Ärge hoidke pipetti käes, kui ootate tsentrifuugi, tsiklit jne. Pipeti sisemus kuumeneb ja õhupadja laieneb, mille tulemuseks on pipeteerimisel kõrvalekalded seatud mahust.
- Eelniisutamine: otsiku ja pipeti sees oleva õhu niisutamine valmistab otsiku proovi jaoks ette ja väldib aurustumist ülekandemahu aspireerimisel.
- Vertikaalne aspiratsioon: see on väga oluline väikeste koguste käsitsemisel, et vältida kapillaarefekti, mis tekib pipeti nurga all hoidmisel.
- Sukeldumissügavus: kastke otsikut nii vähe kui võimalik, et vältida kapillaarefekti tõttu vedeliku sattumist otsikusse. Rusikareegel: mida väiksem on ots ja maht, seda väiksem on sukeldumissügavus. Väikeste koguste pipeteerimisel soovitame maksimaalselt 2 mm.
- Doseerimine 45° nurga all: Kui pipetti hoitakse 45° nurga all, on vedeliku optimaalne väljavool tagatud.
- Kokkupuude veresoone seina või vedeliku pinnaga: väikeseid koguseid saab korralikult väljastada ainult siis, kui otsikut hoitakse vastu anuma seina või kastetakse vedelikku. Isegi viimase tilga otsast saab täpselt doseerida.
- Väljapuhumine: väljapuhumine on kohustuslik pärast väikeste koguste väljastamist, et väljastada isegi viimane tilk vedeliku otsas. Väljapuhumine peaks toimuma ka vastu anuma seina. Olge vedeliku pinnal väljapuhumisel ettevaatlik, et proovi ei satuks õhumulle.
Postitusaeg: 18.02.2021