Cómo sellar una placa de PCR

Introducción

placas de PCR, un elemento básico del laboratorio durante muchos años, se están volviendo aún más frecuentes en el entorno moderno a medida que los laboratorios aumentan su rendimiento y emplean cada vez más la automatización en sus flujos de trabajo. Lograr estos objetivos y al mismo tiempo preservar la precisión y la integridad de los experimentos puede resultar difícil. Una de las áreas comunes donde pueden aparecer errores es con el sellado deplacas de PCR, con una técnica deficiente que permite la evaporación de las muestras, alterando el pH y, por lo tanto, alterando las funciones enzimáticas e invitando a la contaminación. Aprendiendo a sellar unplaca de PCRelimina correctamente estos riesgos y garantiza resultados reproducibles.

Encuentre el sello adecuado para su placa PCR

Tapas de placa versus sellos de película versus tapas
Gorrasson una buena manera de sellar su placa con un sello hermético, al mismo tiempo que le brindan la flexibilidad de abrir y volver a sellar la placa fácilmente según lo necesite sin desperdicio. Sin embargo, los límites tienen un par de inconvenientes clave.

En primer lugar tendrás que comprar la gorra específica que sea compatible, lo que los hace poco versátiles. Tendrás que asegurarte de que la tapa que elijas se ajuste a la placa, lo cual depende de su fabricante, y elegir entre abovedada o plana según el termociclador que estés utilizando.

En segundo lugar, aplicar las tapas a la placa puede resultar muy repetitivo y tedioso, con el riesgo de contaminación cruzada si se coloca la tapa equivocada en el pocillo equivocado.

Si bien los sellos de película son menos flexibles en términos de extracción y reemplazo, son muy versátiles ya que se adaptan a cualquier tipo de placa de PCR, sin importar quién sea el fabricante. Simplemente se pueden cortar a medida, lo que los hace muy eficaces.

Otra opción es una tapa tipo plato. Estos ofrecen menos protección que las tapas y sellos, y principalmente solo se usan como cobertura a corto plazo para evitar la contaminación.

Sellos ópticos versus sellos de película de aluminio

Ya sea que necesite un sello óptico transparente o unpelícula de papel de aluminioSellar tu plato lo decide tu formato experimental.Películas de sellado ópticoSon transparentes para permitirle observar las muestras, al mismo tiempo que las protegen y evitan la evaporación. También son particularmente útiles en experimentos de qPCR que implican realizar mediciones de fluorescencia de alta precisión directamente desde la placa, en cuyo caso necesitará una película selladora que filtre la menor fluorescencia posible. Es importante asegurarse de que el sello o la tapa que está utilizando tenga un nivel de claridad óptica lo suficientemente alto para garantizar que las lecturas sean precisas.

Las películas de aluminio son apropiadas para cualquier muestra que sea sensible a la luz o que deba almacenarse a menos de 80 °C. Por esta razón, la mayoría de las muestras destinadas al almacenamiento a largo plazo requerirán una película de aluminio. Las películas de aluminio también son perforables, lo que resulta útil para examinar pocillos individuales o para la transferencia de muestras mediante agujas. Esto puede ocurrir manualmente o como parte de una plataforma robótica.

Tenga en cuenta también que las sustancias agresivas que incluyen ácidos, bases o disolventes requerirán un sello que pueda resistirlos, en cuyo caso probablemente sea más apropiado un sello de aluminio.

Película adhesiva versus película termosellada
Sellos de película adhesivason muy sencillos y fáciles de aplicar. Todo lo que necesita es que un usuario aplique el sello a la placa y use una herramienta aplicadora simple para presionar hacia abajo y formar un sello hermético.

Los sellados térmicos son más avanzados y proporcionan un sellado más duradero que tiene tasas de evaporación reducidas en comparación con un sello adhesivo convencional. Esta opción es apropiada si busca almacenar muestras a largo plazo, aunque esto conlleva un requisito adicional para el equipo de sellado de placas.

Cómo sellar una placa de PCR

Método de sellado de placas

Autoadhesivo

1. Asegúrese de trabajar sobre una superficie de trabajo plana y estable.

2. Retire la película de su embalaje y retire el respaldo.

3. Coloque con cuidado el sello en la placa, asegurándose de que todos los pocillos estén cubiertos.

4. Utilice una herramienta aplicadora para aplicar presión sobre la placa. Comience desde un extremo y avance hacia el otro, presionando uniformemente

5. Repita esto numerosas veces.

6. Pase el aplicador por los pocillos exteriores para asegurarse de que también estén sellados correctamente.

Sellos térmicos

Los termosellados funcionan derritiendo la película hasta el borde de cada pocillo, con la ayuda de un sellador de placas. Para operar un sellador térmico, consulte las instrucciones proporcionadas por el fabricante del equipo. Asegúrese de que el fabricante del que obtiene su equipo tenga buena reputación, ya que es muy importante que el sello sea adecuado, efectivo y hermético.

Consejos superiores para sellar placas

a. Al aplicar presión al sello, hágalo en dirección horizontal y vertical para garantizar un sellado adecuado.

b. Siempre es una buena práctica realizar una prueba de cualquier cosa que esté haciendo, y esto no es diferente con el sellado de placas. Pruebe con un plato vacío antes de usar uno con muestras.

do. Al realizar la prueba, retire el sello y observe que el adhesivo se pegó correctamente, sin espacios. Hay una representación visual de esto en el primer documento de referencia. Si no ha sellado la placa correctamente, cuando retire el sello habrá espacios donde el adhesivo no se haya adherido completamente a la placa.

d. Para el envío y transporte de muestras, puede resultarle útil aplicar un sello de plástico encima del sello de aluminio para una protección adicional (especialmente contra perforaciones).

mi. Asegúrese siempre de que no haya protuberancias ni arrugas al aplicar la película; esto provocará fugas y evaporación.