Cómo sellar una placa de PCR

Introducción

Placas de PCR, un elemento básico del laboratorio durante muchos años, se están volviendo aún más frecuentes en el entorno moderno a medida que los laboratorios amplían su rendimiento y emplean cada vez más la automatización dentro de sus flujos de trabajo. Lograr estos objetivos mientras preserva la precisión e integridad de los experimentos puede ser difícil. Una de las áreas comunes donde los errores pueden arrastrarse es con el sellado dePlacas de PCR, con una técnica deficiente que permite la evaporación de las muestras, alterando el pH y, por lo tanto, interrumpir las funciones enzimáticas y la invitación de la contaminación. Aprender a sellar unPlaca de PCRElimina correctamente estos riesgos y garantiza resultados reproducibles.

Encuentre el sello adecuado para su placa de PCR

Capas de placa vs. Sellos de película vs. tapas
Tapason una buena manera de sellar su plato con un sello apretado, al tiempo que le brinda la flexibilidad de desallar muy fácilmente y volver a sellar el plato como sea necesario sin ningún desperdicio. Sin embargo, los CAP tienen un par de inconvenientes clave.

En primer lugar, tendrá que comprar el límite específico que sea compatible, lo que los hace no versátiles. Tendrá que asegurarse de que la tapa que elija se ajuste a la placa, que depende de su fabricante, y elija abovedado o plano según el termociclador que esté utilizando.

En segundo lugar, aplicar las tapas a la placa puede ser muy repetitiva y tediosa, con el riesgo de contaminación cruzada si pone la tapa incorrecta en el pozo incorrecto.

Si bien los sellos de películas son menos flexibles en términos de eliminación y reemplazo, son muy versátiles, ya que se ajustarán a cualquier tipo de placa de PCR, sin tener en cuenta quién es el fabricante. Simplemente se pueden cortar al tamaño, haciéndolos muy efectivos.

Otra opción es una tapa de placa. Estos ofrecen menos protección que las tapas y los sellos, y solo se usan principalmente para la cobertura a corto plazo para evitar la contaminación.

Sellos de película óptica vs. Foil

Si necesita un sello óptico, transparente o unpelícula de aluminioSellar su plato se decide por su formato experimental.Películas de sellado ópticoson transparentes para permitirle observar muestras, mientras las protegen y evitan la evaporación. También son particularmente útiles en los experimentos de QPCR que implican realizar mediciones muy precisas de fluorescencia directamente de la placa, en cuyo caso necesitará una película de sellado que filme la menor fluorescencia posible. Es importante asegurarse de que el sello o la tapa que está utilizando tenga un nivel lo suficientemente alto de claridad óptica para garantizar que las lecturas sean precisas.

Las películas de aluminio son apropiadas para cualquier muestra que sea sensible a la luz o que se almacenen a menos de 80 ° C. Por esta razón, la mayoría de las muestras destinadas al almacenamiento a largo plazo requerirán una película de aluminio. Las películas de aluminio también son perforables, lo que es útil para examinar los pozos individuales o para la transferencia de muestras por agujas. Esto puede ocurrir manualmente o como parte de una plataforma robótica.

También considere que las sustancias agresivas que incluyen ácidos, bases o solventes requerirán un sello que pueda resistirlas, en cuyo caso un sello de aluminio probablemente sea más apropiado.

Película de sellado adhesivo versus calor
Sellos de película adhesivason muy sencillos y se aplican fácilmente. Todo lo que necesita es que un usuario aplique el sello a la placa y use una herramienta de aplicador simple para presionar y formar un sello apretado.

Los sellos de calor son más avanzados, proporcionando un sello más duradero que ha reducido las tasas de evaporación en comparación con un sello adhesivo convencional. Esta opción es apropiada si está buscando almacenar muestras a largo plazo, aunque esto viene con un requisito adicional para el equipo de sellado de placas.

Cómo sellar una placa de PCR

Método de sellado de placas

Autoadhesivo

1. Asegúrese de estar trabajando en una superficie de trabajo plana y estable

2. Retire la película de su empaque y retire el respaldo

3. Coloque cuidadosamente el sello en el plato, mientras se asegura de que todos los pozos estén cubiertos

4. Use una herramienta de aplicador para aplicar presión sobre la placa. Comience desde un extremo y trabaje hacia el otro, presionando uniformemente

5. Repita esto en numerosas ocasiones

6. Ejecute su aplicador alrededor de los pozos exteriores, para asegurarse de que también estén correctamente sellados.

Sellos de calor

Los sellos de calor funcionan derritiendo la película al borde de cada pozo, con la ayuda de un sellador de placas. Para operar un sellador de calor, consulte las instrucciones proporcionadas por el fabricante del equipo. Asegúrese de que el fabricante del que obtiene su equipo es de buena reputación, ya que es muy importante que el sello sea adecuado, efectivo y estancado.

Consejos superior de sellado de placa

a. Al aplicar presión al sello, vaya en instrucciones horizontales y verticales para garantizar un sello adecuado

b. Siempre es una buena práctica ejecutar una prueba de lo que sea que esté haciendo, y esto no es diferente con el sellado de placas. Pruebe con una placa vacía antes de usar una con muestras.

do. Cuando pruebe, retire el sello y mire para ver que el adhesivo se quedó correctamente, sin huecos. Hay una representación visual de esto en el primer documento de referencia. Si no ha sellado la placa correctamente, cuando retire el sello habrá huecos donde el adhesivo no ha hecho completamente unirse a la placa.

d. Para el envío y el transporte de muestras, es posible que sea útil aplicar un sello de plástico en la parte superior del sello de aluminio para obtener una protección adicional (especialmente de la perforación).

mi. Siempre asegúrese de que no haya protuberancias ni arrugas al aplicar la película; estos causarán fugas y evaporación