Cómo pipetear volúmenes pequeños con pipetas manuales portátiles

A medida que se centra más la atención en reducir los reactivos y los costos, hay una gran demanda de volúmenes más pequeños, por ejemplo, para la preparación de PCR Mastermix o reacciones enzimáticas. Pero pipetear volúmenes pequeños de 0,2 a 5 µl plantea nuevos desafíos para la exactitud y precisión del pipeteo. Los siguientes puntos son esenciales:

1. Tamaño de pipeta y punta: Elija siempre la pipeta con el menor volumen nominal posible y la punta más pequeña para mantener el colchón de aire lo más pequeño posible. Al pipetear 1 µL, por ejemplo, elija una pipeta de 0,25 – 2,5 µL y una punta adecuada en lugar de una pipeta de 1 – 10 µL.
2. Calibración y mantenimiento: Es esencial que sus pipetas estén calibradas y mantenidas adecuadamente. Pequeños ajustes y piezas rotas en una pipeta provocan un aumento masivo de los valores de error sistemáticos y aleatorios. Se debe realizar una calibración según ISO 8655 una vez al año.
3. Pipetas de desplazamiento positivo: compruebe si tiene una pipeta de desplazamiento positivo con un rango de volumen bajo en su laboratorio. En general, el uso de este tipo de pipetas conduce a mejores resultados de pipeteo en términos de exactitud y precisión que con las clásicas pipetas con colchón de aire.
4. Intente utilizar volúmenes más grandes: puede considerar diluir su muestra para pipetear volúmenes más grandes con la misma cantidad en la reacción final. Esto puede reducir los errores de pipeteo con volúmenes de muestra muy pequeños.

Además de una buena herramienta, el investigador debe tener una muy buena técnica de pipeteo. Preste especial atención a los siguientes pasos:

1. Accesorio de punta: No atasque la pipeta en la punta, ya que esto puede dañar el extremo de la punta fina y provocar que el haz de líquido se redirija o dañar el orificio. Aplique sólo una ligera presión al colocar una punta y utilice una pipeta con un cono para puntas accionado por resorte.
2. Sostener la pipeta: No sostenga la pipeta en la mano mientras espera la centrífuga, el ciclador, etc. El interior de la pipeta se calentará y hará que el colchón de aire se expanda, lo que provocará desviaciones del volumen establecido al pipetear.
3. Prehumedecimiento: La humidificación del aire dentro de la punta y la pipeta prepara la punta para la muestra y evita la evaporación al aspirar el volumen de transferencia.
4. Aspiración vertical: Esto es muy importante cuando se manipulan volúmenes pequeños para evitar el efecto capilar que se produce cuando se sostiene la pipeta en ángulo.
5. Profundidad de inmersión: Sumerja la punta lo menos posible para evitar que entre líquido en la punta debido al efecto capilar. Regla general: cuanto más pequeños sean la punta y el volumen, menor será la profundidad de inmersión. Recomendamos un máximo de 2 mm al pipetear volúmenes pequeños.
6. Dispensación en un ángulo de 45°: Se garantiza un flujo óptimo del líquido cuando la pipeta se mantiene en un ángulo de 45°.
7. Contacto con la pared del recipiente o la superficie del líquido: solo se pueden dispensar volúmenes pequeños correctamente cuando la punta se sostiene contra la pared del recipiente o se sumerge en líquido. Incluso la última gota de la punta se puede dispensar con precisión.
8. Soplado: Es obligatorio realizar un soplo después de dispensar volúmenes bajos para dispensar incluso la última gota de líquido presente en la punta. El soplado también debe realizarse contra la pared del recipiente. Tenga cuidado de no introducir burbujas de aire en la muestra al realizar un soplado en la superficie del líquido.