Cómo pipetear volúmenes pequeños con pipetas manuales de mano

A medida que se está enfocando más en la reducción de reactivos y costos, los volúmenes más pequeños tienen una gran demanda, por ejemplo, para la preparación de Mastermix de PCR o reacciones enzimáticas. Pero los pequeños volúmenes de pipeteo de 0.2 a 5 µl establecen nuevos desafíos para la precisión y precisión de la pipa. Los siguientes puntos son esenciales:

1. Pipeta y tamaño de la punta: siempre elija la pipeta con el volumen nominal más bajo posible y la punta más pequeña para mantener el cojín de aire lo más pequeño posible. Al pipetear 1 µl, por ejemplo, elija una pipeta 0.25 - 2.5 µl y una punta coincidente en lugar de una pipeta de 1 a 10 µl.
2. Calibración y mantenimiento: es esencial que sus pipetas estén correctamente calibradas y mantenidas. Pequeños ajustes y piezas rotas en una pipeta conducen a un aumento masivo en los valores de error sistemáticos y aleatorios. Una calibración según ISO 8655 debe realizarse una vez al año.
3. Pipetas de desplazamiento positivo: verifique si tiene una pipeta de desplazamiento positivo con un rango de bajo volumen en su laboratorio. En general, el uso de este tipo de pipeta conduce a un mejor resultado de pipeteo en términos de precisión y precisión que con las pipetas clásicas de cojín de aire.
4. Intente usar volúmenes más grandes: puede considerar diluir su muestra para pipette volúmenes más grandes con la misma cantidad en la reacción final. Esto puede reducir los errores de pipeteo con volúmenes de muestra muy pequeños.

Además de una buena herramienta, el investigador debe tener una muy buena técnica de pipeteo. Preste especial atención a los siguientes pasos:

1. Adjunto de la punta: no atasque la pipeta en la punta, ya que esto puede dañar el extremo de la punta fina, lo que hace que el haz líquido sea redirigido o dañe el orificio. Solo aplique presión de luz al conectar una punta y use una pipeta con un cono de punta cargado de resorte.
2. Sosteniendo la pipeta: no sostenga la pipeta en la mano mientras espera la centrífuga, el ciclador, etc. El interior de la pipeta se calentará y conducirá el colchón de aire para que se expanda, lo que resulta en desviaciones del volumen establecido al pipetear.
3. Precrampar: la humidificación del aire dentro de la punta y la pipeta prepara la punta para la muestra y evita la evaporación al aspirar el volumen de transferencia.
4. Aspiración vertical: esto es muy importante cuando se maneja pequeños volúmenes para evitar el efecto capilar que ocurre cuando la pipeta se mantiene en ángulo.
5. Profundidad de inmersión: sumerja la punta lo menos posible para evitar que el líquido ingrese a la punta debido al efecto capilar. Regla general: cuanto más pequeños son la punta y el volumen, menor será la profundidad de inmersión. Recomendamos un máximo de 2 mm al pipetear volúmenes pequeños.
6. Dispensando a un ángulo de 45 °: el flujo óptimo del líquido se garantiza cuando la pipeta se mantiene en un ángulo de 45 °.
7. Contacto con la pared de la embarcación o la superficie líquida: los volúmenes pequeños solo se pueden dispensar adecuadamente cuando la punta se sostiene contra la pared del vaso o sumergirse en líquido. Incluso la última gota de la punta se puede dispensar con precisión.
8. Extraño: una explosión es obligatoria después de dispensar volúmenes bajos para dispensar incluso la última gota de líquido presente en la punta. La explosión también debe llevarse a cabo contra la pared del vaso. Tenga cuidado de no llevar burbujas de aire a la muestra al realizar una explosión en la superficie líquida.