Por sukcesaj plifortigaj reagoj, estas necese, ke la individuaj reagkomponentoj ĉeestas en la ĝusta koncentriĝo en ĉiu preparo. Krome, gravas, ke ne okazas poluado.
Precipe kiam multaj reagoj devas esti aranĝitaj, estis establita por prepari tielnomitan majstran miksaĵon anstataŭ pipeti ĉiun reakciilon aparte en ĉiun vazon. Antaŭ-konfiguritaj miksaĵoj estas komerce haveblaj, en kiuj nur provaĵo-specifaj komponentoj (primo) kaj akvo estas aldonitaj. Alternative, la majstra miksaĵo povas esti preparita memstare. En ambaŭ variantoj, la miksaĵo estas distribuita al ĉiu PCR-ŝipo sen ŝablono kaj la individua DNA-provaĵo estas aldonita aparte ĉe la fino.
Uzi majstran miksaĵon havas plurajn avantaĝojn: Unue, la nombro da ununuraj pipetaj paŝoj estas reduktita. Tiel, kaj la risko de uzanteraroj dum pipetado kaj la risko de poluado estas minimumigitaj kaj, kompreneble, tempo estas ŝparita. Principe, la pipeta precizeco ankaŭ estas pli alta, ĉar pli grandaj volumoj estas dozitaj. Ĉi tio estas facile komprenebla kiam oni kontrolas la teknikajn datumojn de pipetoj: Ju pli malgranda la dozita volumeno, des pli altaj la devioj povas esti . La fakto, ke ĉiuj preparaĵoj venas de la sama ŝipo, havas pozitivan efikon sur homogeneco (se bone miksitaj). Ĉi tio ankaŭ plibonigas la reprodukteblecon de la eksperimentoj.
Preparante la majstran miksaĵon, almenaŭ 10% kroman volumon devus esti aldonita (ekz. se 10 preparoj estas bezonataj, kalkulu surbaze de 11), tiel ke eĉ la lasta vazo plenigis ĝuste. Tiamaniere, (malgravaj) pipetaj eraroj, kaj la efiko de specimena perdo dum dozado de detergent-enhavantaj solvoj povas esti kompensitaj. Detergentoj estas enhavitaj en enzimsolvoj kiel ekzemple polimerazoj kaj majstraj miksaĵoj, kaŭzante ŝaŭman formadon kaj restaĵojn sur la interna surfaco de normalo.pipetoj.
Depende de la apliko kaj la speco de likvaĵo por esti dispensata, la ĝusta pipeta tekniko (1) devus esti elektita kaj la taŭga ekipaĵo elektita. Por solvoj enhavantaj lesivojn, oni rekomendas rektan movosistemon aŭ la tiel nomatajn "malalta reteno" pipetpipetojn kiel alternativon por aerkusenaj pipetoj. La efiko deACE PIPETA pintobaziĝas sur precipe hidrofoba surfaco. Likvaĵoj enhavantaj lesivojn ne lasas restaĵofilmon interne kaj ekstere, tiel ke la perdo de solvo povas esti minimumigita.
Krom la ĝusta dozado de ĉiuj komponantoj, ankaŭ gravas, ke ne okazas poluado de la preparoj. Ne sufiĉas uzi konsumaĵojn de alta pureco, ĉar la pipeta procezo en aerkusena pipeto povas produkti aerosolojn, kiuj restas en la pipeto. La DNA kiu povas esti enhavita en la aerosolo povas esti transdonita de unu provaĵo al la venonta en la sekva pipeta paŝo kaj tiel konduki al poluado. La rektaj movsistemoj menciitaj supre ankaŭ povas minimumigi ĉi tiun riskon. Por aerkusenaj pipetoj havas sencon uzi filtrilaj konsiletoj por protekti la pipetkonuson retenante ŝprucojn, aerosolojn kaj biomolekulojn.
Afiŝtempo: Dec-06-2022