Por sukcesaj amplifaj reagoj, necesas, ke la individuaj reagaj komponentoj ĉeestas en la ĝusta koncentriĝo en ĉiu preparo. Krome gravas, ke neniu poluado okazas.
Precipe kiam multaj reagoj devas esti agorditaj, ĝi estis establita por prepari tiel nomatan majstran miksaĵon anstataŭ pipeti ĉiun reagenton aparte en ĉiun ŝipon. Antaŭ-agorditaj miksaĵoj estas komerce haveblaj, en kiuj aldoniĝas nur specimen-specifaj komponentoj (printilo) kaj akvo. Alternative, la majstra miksaĵo povas esti preparita mem. En ambaŭ variantoj, la miksaĵo estas distribuita al ĉiu PCR -ŝipo sen ŝablono kaj la individua DNA -specimeno estas aldonita aparte ĉe la fino.
Uzi majstran miksaĵon havas plurajn avantaĝojn: unue, la nombro de unuopaj pipetaj paŝoj estas reduktita. Tiamaniere, ambaŭ la risko de uzantaj eraroj dum pipetado kaj la risko de poluado estas minimumigitaj kaj kompreneble tempo estas ŝparita. Principe, la pipeta precizeco estas ankaŭ pli alta, ĉar pli grandaj volumoj estas dosigitaj. Ĉi tio estas facile komprenebla dum kontrolado de la teknikaj datumoj de pipetoj: ju pli malgranda estas la doza volumo, des pli alta povas esti la devioj. La fakto, ke ĉiuj preparoj devenas de la sama ŝipo havas pozitivan efikon sur homogeneco (se bone miksita). Ĉi tio ankaŭ plibonigas la reprodukteblecon de la eksperimentoj.
Kiam oni preparas la majstran miksaĵon, almenaŭ 10 % kroma volumo devas esti aldonita (ekz. Se 10 preparoj estas bezonataj, kalkulu surbaze de 11), tiel ke eĉ la lasta ŝipo plenigita ĝuste. Tiamaniere, (malgrava) pipado de malĝustaĵoj, kaj la efiko de specimeno perdo dum dozo de detergentaj solvoj povas esti kompensita. Detergentoj estas enhavitaj en enzimaj solvoj kiel polimerasoj kaj majstraj miksaĵoj, kaŭzante ŝaŭman formadon kaj restaĵojn sur la interna surfaco de normalaPipetaj Konsiletoj.
Depende de la apliko kaj la tipo de likvaĵo por esti dispensitaj, la ĝusta pipeta tekniko (1) devas esti elektita kaj la taŭga ekipaĵo elektita. Por solvoj enhavantaj detergentojn, rekta movo-sistemo aŭ la tiel nomataj "malaltaj retenaj" pipetaj konsiletoj kiel alternativo por aer-kusenaj pipetoj estas rekomendindaj. La efiko deAce Pipette -pintobaziĝas sur precipe hidrofoba surfaco. Likvaĵoj enhavantaj detergentojn ne lasas restaĵon filmon interne kaj ekstere, tiel ke la perdo de solvo povas esti minimumigita.
Krom la ĝusta dozo de ĉiuj komponentoj, gravas ankaŭ, ke neniu poluado de la preparoj okazas. Ne sufiĉas uzi konsumeblaĵojn kun alta pureco, ĉar la pipeta procezo en aera kusena pipeto povas produkti aerosolojn, kiuj restas en la pipeto. La DNA, kiu povas esti enhavita en la aerosolo, povas esti translokigita de unu specimeno al la sekva en la sekva pipeta paŝo kaj tiel konduki al poluado. La rektaj movaj sistemoj menciitaj supre povas ankaŭ minimumigi ĉi tiun riskon. Por aer-kusenaj pipetoj, havas sencon uzi filtrilajn konsiletojn por protekti la pipetan konuson konservante splasojn, aerosolojn kaj biomolekulojn.
Afiŝotempo: Dec-06-2022