Kriovilojestas ofte uzitaj por la kriogena stokado de ĉellinioj kaj aliaj kritikaj biologiaj materialoj, en dewars plenigitaj kun likva nitrogeno.

Estas pluraj stadioj implikitaj en la sukcesa konservado de ĉeloj en likva nitrogeno. Dum la baza principo estas malrapida frosto, la preciza tekniko utiligita dependas de la ĉeltipo kaj krioprotektanto uzita. Estas pluraj sekurecaj konsideroj kaj plej bonaj praktikoj por konsideri dum konservado de ĉeloj ĉe tiaj malaltaj temperaturoj.

Ĉi tiu afiŝo celas doni superrigardon pri kiel krioviuloj estas stokitaj en likva nitrogeno.

Kio estas Krioviloj

Kriovials estas malgrandaj, kovritaj fioloj dizajnitaj por stokado de likvaj provaĵoj ĉe ekstreme malaltaj temperaturoj. Ili certigas, ke ĉeloj konservitaj en krioprotektanto ne eniras rektan kontakton kun la likva nitrogeno, minimumigante la riskon de ĉelaj frakturoj dum ankoraŭ profitante el la ekstrema malvarmiga efiko de likva nitrogeno.

La fioloj estas kutime haveblaj en gamo da volumoj kaj dezajnoj - ili povas esti interne aŭ ekstere surfadenigitaj kun plataj aŭ rondetaj fundoj. Sterilaj kaj ne-sterilaj formatoj ankaŭ haveblas.

Kiu UzasCyrovialsStoki Ĉelojn en Likva Nitrogeno

Gamo da NHS kaj privataj laboratorioj, same kiel esplorinstitucioj specialiĝantaj pri korda sangobankado, epiteliĉelbiologio, imunologio kaj stamĉelbiologio uzas kriovilojn por kriokonservi ĉelojn.

Ĉeloj konservitaj tiamaniere inkluzivas B kaj T-ĉelojn, CHO-ĉelojn, Hematopoietajn Stam kaj Praĉelojn, Hibridomojn, Intestajn Ĉelojn, Makrofagojn, Mezenkimajn Stam- kaj Praĉelojn, Monocitojn, Mielomon, NK-Ĉelojn kaj Plurpotencajn Stamĉelojn.

Superrigardo de Kiel Stoki Kriovialojn en Likva Nitrogeno

Kriokonservado estas procezo kiu konservas ĉelojn kaj aliajn biologiajn konstrukciojn malvarmigante ilin al tre malaltaj temperaturoj. Ĉeloj povas esti stokitaj en likva nitrogeno dum jaroj sen perdo de ĉelvivebleco. Ĉi tio estas skizo de la proceduroj uzataj.

Ĉela Preparado

La preciza metodo por prepari specimenojn varias depende de la ĉeltipo, sed ĝenerale, la ĉeloj estas kolektitaj kaj centrifugitaj por evoluigi ĉel-riĉan buleton. Tiu buleto tiam estas resuspendita en la supernatant miksita kun krioprotektant aŭ kriokonservadmedio.

Kriokonservada Mezo

Tiu medio estas utiligita por konservi ĉelojn en la malalt-temperaturaj medioj al kiuj ili estos submetitaj malhelpante la formadon de intra kaj eksterĉelaj kristaloj kaj tial ĉelmorto. Ilia rolo estas provizi sekuran, protektan medion por ĉeloj kaj histoj dum la procezoj de frostigado, stokado kaj degelo.

Medio kiel freŝa frosta plasmo (FFP), heparinigita plaslimsolvaĵo aŭ serum-liberaj, bestaj komponent-liberaj solvoj estas miksitaj kun krioprotektantoj kiel ekzemple dimetilsulfoksido (DMSO) aŭ glicerolo.

La relikvigita specimena buleto estas alikvotita en polipropilenaj krioviloj kiel ekzempleSuzhou Ace Biomedical firmao Cryogenic Storage Vials.

Gravas ne troplenigi la kriovilojn ĉar ĉi tio pliigos la riskon de krakado kaj la eblan liberigon de enhavo (1).

Kontrolita Frostilo-Indico

Ĝenerale, malrapida kontrolita frostrapideco estas utiligita por la sukcesa kriokonservado de ĉeloj.

Post kiam specimenoj estas alikovitaj en kriogenajn fiolojn, ili estas metitaj sur malsekan glacion aŭ en 4℃ fridujon kaj la frostigprocedo komenciĝas ene de 5 minutoj. Kiel ĝenerala gvidilo, ĉeloj estas malvarmetigitaj kun rapideco de -1 ĝis -3 por minuto (2). Ĉi tio estas atingita uzante programeblan malvarmigilon aŭ metante fiolojn en izolitan skatolon metita en -70 °C ĝis -90 °C kontrolitan fridujon.

Translokiĝu al Likva Nitrogeno

La frostigitaj kriogenaj fioloj tiam estas transdonitaj al likva nitrogentanko por nedifinitaj periodoj kondiĉe ke temperaturo de malpli ol -135℃ estas konservita.

Tiuj ultra-malaltaj temperaturoj povas esti akiritaj per mergado en la likva aŭ vaporfaza nitrogeno.

Likva aŭ Vapora Fazo?

Stokado en likva faza nitrogeno povas konservi la malvarman temperaturon kun absoluta konsistenco, sed ofte ne estas rekomendita pro la sekvaj kialoj:

• La bezono de grandaj volumoj (profundo) de likva nitrogeno kiu estas ebla danĝero. Pro tio brulvundoj aŭ sufokado estas vera risko.
• Dokumentitaj kazoj de kruc-poluado de infektaj agentoj kiel ekzemple aspergillus, hep B kaj virusa disvastiĝo per la likva nitrogenmedio (2,3)
• La potencialo por likva nitrogeno liki en la fiolojn dum mergado. Kiam forigita de stokado kaj varmigita al ĉambra temperaturo, la nitrogeno rapide disetendiĝas. Sekve, la fiolo povas frakasi kiam estas forigita de likva nitrogena stokado, kreante danĝeron de kaj flugantaj derompaĵoj kaj eksponiĝo al la enhavo (1, 4).

Pro tiuj kialoj, ultra-malalta temperaturstokado estas plej ofte en vaporfaza nitrogeno. Kiam specimenoj devas esti stokitaj en la likva fazo, specialeca kriofleksa tubo devus esti uzata.

La malavantaĝo de la vaporfazo estas ke vertikala temperaturgradiento povas okazi rezultigante temperaturfluktuojn inter -135 ℃ kaj -190 ℃. Ĉi tio postulas zorgeman kaj diligentan monitoradon de la likva nitrogenniveloj kaj temperaturvarioj (5).

Multaj fabrikistoj rekomendas, ke krioviloj taŭgas por stokado ĝis -135℃ aŭ por uzo nur en la vaporfazo.

Degeli Viajn Kriokonservitajn Ĉelojn

La degelproceduro estas streĉa por frosta kulturo, kaj taŭga manipulado kaj tekniko estas postulataj por certigi optimuman daŭrigeblecon, reakiron kaj funkciecon de la ĉeloj. La precizaj degelprotokoloj dependos de specifaj ĉeltipoj. Tamen, rapida degelo estas konsiderita norma al:

• Malpliigu ajnan efikon al ĉela reakiro
• Helpu redukti la ekspontempon al la solutoj ĉeestantaj en la frostigmedio
• Minimumu ajnan damaĝon per glacia rekristaliĝo

Akvaj banoj, perlobanoj, aŭ specialecaj aŭtomatigitaj instrumentoj estas ofte uzitaj por degeli provaĵojn.

Plej ofte 1 ĉellinio estas degelita samtempe dum 1-2 minutoj, milde kirlante en akvobanon je 37℃ ĝis restas nur malgranda glacio en la fiolo antaŭ ol ili estas lavitaj en antaŭvarmigita kreskmedio.

Por kelkaj ĉeloj kiel ekzemple mamulaj embrioj, malrapida varmiĝo estas esenca por ilia supervivo.

La ĉeloj nun estas pretaj por ĉelkulturo, ĉela izolado, aŭ en la kazo de hematopoietikaj stamĉeloj - vivebleco-studoj por garantii la integrecon de la donacantaj stamĉeloj antaŭ mieloablativa terapio.

Estas normala praktiko preni malgrandajn alikvotojn de la antaŭlavita provaĵo uzita por elfari ĉelnombradon por determini ĉelkoncentriĝojn por tegado en kulturo. Vi povas tiam taksi la rezultojn de ĉelaj izolaj proceduroj kaj determini ĉelan daŭrigeblecon.

Plej bonaj Praktikoj por Stokado de Krioviloj

La sukcesa kriokonservado de provaĵoj stokitaj en krioviloj dependas de multaj elementoj en la protokolo inkluzive de bonorda stokado kaj rekorda konservado.

• Dividi ĉelojn inter stokaj lokoj- Se volumoj permesas, disigu ĉelojn inter fioloj kaj konservu ilin en apartaj lokoj por redukti la riskon de specimena perdo pro ekipaĵmalsukcesoj.
• Malhelpi kruc-poluadon– Elektu unuuzajn sterilajn kriogenajn fiolojn aŭ aŭtoklavon antaŭ posta uzo
• Uzu taŭge grandajn fiolojn por viaj ĉeloj– fioloj venas en gamo da volumoj inter 1 kaj 5 ml. Evitu troplenigi fiolojn por redukti la riskon de krakado.
• Elektu internajn aŭ eksterajn fadenigitajn kriogenajn fiolojn- Interne surfadenigitaj fioloj estas rekomenditaj de iuj universitatoj por sekurecaj mezuroj - ili ankaŭ povas malhelpi poluadon dum plenigado aŭ kiam stokitaj en la likva nitrogeno.
• Malhelpi Elfluon- Uzu du-injektitajn sigelojn mulditajn en la ŝraŭbĉapon aŭ O-ringojn por malhelpi likon kaj poluadon.
• Uzu 2D-strekkodojn kaj etikedajn fiolojn- por certigi spureblecon, fioloj kun grandaj skribaj areoj ebligas al ĉiu fiolo esti adekvata etikedita. 2D strekkodoj povas helpi pri stokado-administrado kaj rekorda tenado. Kolorkodigitaj ĉapoj estas utilaj por pli facila identigo.
• Adekvata konservado prizorgado- Por certigi, ke ĉeloj ne perdiĝas, konservaj vazoj devas konstante kontroli la temperaturon kaj likvan nitrogennivelojn. Alarmoj devus esti ekipitaj por atentigi uzantojn pri eraroj.

Sekurecaj Antaŭzorgoj

Likva nitrogeno fariĝis ofta praktiko en moderna esplorado sed portas la riskon de grava vundo se uzite neĝuste.

Taŭga persona protekta ekipaĵo (PPE) devus esti portita por minimumigi la riskon de frosto, brulvundoj kaj aliaj malfavoraj okazaĵoj dum manipulado de likva nitrogeno. Portu

• Kriogenaj gantoj
• Laboratorio mantelo
• Plena vizaĝa ŝildo imuna al efiko, kiu ankaŭ kovras la kolon
• Fermfingroj ŝuoj
• Ŝpruciga plasta antaŭtuko

Likvaj nitrogenaj fridujoj devas esti metitaj en bone ventolitajn lokojn por minimumigi la riskon de sufokado - eskapinta nitrogeno vaporiĝas kaj delokigas atmosferan oksigenon. Grandaj volumenaj vendejoj devus havi malaltajn oksigenajn alarmsistemojn.

Labori duope dum manipulado de likva nitrogeno estas ideala kaj ĝia uzo ekster normalaj laborhoroj estu malpermesita.

Criovials por subteni vian laborfluon

Suzhou Ace Biomedical-kompanio ofertas ampleksan elekton de produktoj, kiuj plenumas viajn kriokonservajn bezonojn por malsamaj specoj de ĉeloj. La paperaro inkluzivas gamon da tuboj same kiel gamon da sterilaj krioviloj.

Niaj krioviloj estas:

• Laboratorio Ŝraŭbĉapo 0.5mL 1.5mL 2.0mL Kriovialaj Kriogenaj Fioloj Konusa Malsupra Kriotubo kun Gasket

  ● 0.5ml,1.5ml,2.0ml-specifo, kun jupo aŭ sen jupo
  ● Konusa aŭ memstaranta dezajno, sterila aŭ nesterila estas ambaŭ disponeblaj
  ● Ŝraŭbkaptaj tuboj estas faritaj el polipropileno de medicina grado
  ● PP Cryotube Vials povas esti plurfoje frostigitaj kaj degelitaj
  ●La ekstera ĉapo dezajno povas redukti la poluado probablo dum specimena traktado.
  ● Ŝraŭbĉapo kriogenaj tuboj Universalaj ŝraŭbfadenoj por uzo
  ● Tuboj konvenas plej oftajn rotorojn
  ● Kriogenaj tuboj o-ringaj tuboj taŭgas por normaj 1-cola kaj 2-cola, 48-putoj, 81-putoj, 96-putoj kaj 100-putoj frostujkestoj.
  ● Aŭtoklavebla ĝis 121 °C kaj frostebla ĝis -86 °C

  PARTNO	MATERIALO	VOLUMENO	ĈAPOKOLORO	PCS/SAKO	SAKO/KAZO
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	Nigra, Flava, Blua, Ruĝa, Purpura, Blanka	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	Nigra, Flava, Blua, Ruĝa, Purpura, Blanka	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	Nigra, Flava, Blua, Ruĝa, Purpura, Blanka	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	Nigra, Flava, Blua, Ruĝa, Purpura, Blanka	500	10