La normigado de procezoj inkluzivas ilian optimumigon kaj postan starigon kaj harmoniigon, permesante longtempan optimuman agadon - sendepende de la uzanto. Normigado certigas altkvalitajn rezultojn, same kiel ilian reprodukteblecon kaj kompareblecon.
La celo de (klasika) PCR estas la generacio de fidinda kaj reproduktebla rezulto. Por certaj aplikoj, la rendimento de laPCR-produktoestas ankaŭ grava. Por ĉi tiuj reagoj, oni devas zorgi por certigi, ke specimenoj ne estas endanĝerigitaj kaj ke la PCR-laborfluo restas stabila. Specife, ĉi tio tradukiĝas al minimumigo de la enkonduko de poluadoj, kiuj povus konduki al falsaj pozitivaj aŭ malveraj negativaj rezultoj aŭ eĉ malhelpi la PCR-reagon. Krome, la reagkondiĉoj devus esti kiel eble plej identaj por ĉiu individua provaĵo ene de kuro kaj ankaŭ esti transdoneblaj al postaj reagoj (de la sama metodo). Ĉi tio rilatas al la konsisto de la reagoj same kiel al la speco de temperaturkontrolo en la ciklo. Uzantaj eraroj, kompreneble, estas evitindaj kiel eble plej multe.
Malsupre, ni montros la defiojn kiuj estas renkontitaj dum preparado kaj dum la kuro de PCR - kaj la alirojn al solvoj kiuj ekzistas kun respekto al instrumentoj kaj konsumeblaj uzitaj por la normigado de la PCR-laborfluoj.
Preparado de reago
La liverado de reagkomponentoj en PCR-vazojn, aŭ platojn, respektive, konsistas el multoblaj defioj kiuj devas esti venkitaj:
Reagkondiĉoj
La preciza kaj preciza dozado de la unuopaj komponantoj estas nemalhavebla kiam oni celas la plej identajn reagajn kondiĉojn eblaj. Krom bona pipettekniko, elekti la ĝustan ilon estas kritika. PCR-majstraj miksaĵoj ofte enhavas substancojn kiuj pliigas viskozecon aŭ generas ŝaŭmon. Dum la pipeta procezo, ĉi tiuj kondukas al granda malsekeco de lapipetoj, tiel reduktante pipetprecizecon. La uzo de rektaj dispensaj sistemoj aŭ alternativaj pipetpipetoj, kiuj estas malpli inklinaj al malsekigado, povas plibonigi la precizecon kaj precizecon de la pipeta procezo.
Poluadoj
Dum la liveradprocezo, aerosoloj estas generitaj kiuj, se permesite atingi la internon de la pipeto, eble povas polui alian provaĵon dum la venonta pipetpaŝo. Ĉi tio povas esti malhelpita per uzado de filtrilaj pintoj aŭ rektaj movosistemoj.
Konsumeblaj kiel ekzkonsiletoj, ŝipoj kaj teleroj kiuj estas uzitaj en la PCR-laborfluo ne devas enhavi substancojn kiuj kompromitas la provaĵon aŭ falsas la rezulton. Ĉi tiuj inkluzivas DNA, DNases, RNases kaj PCR-inhibitorojn, same kiel komponantojn, kiuj eble povas eliri el la materialo dum la reago - substancoj konataj kiel leachables.
Eraro de uzanto
Ju pli da specimenoj estas prilaboritaj, des pli alta la erarrisko. Facile povas okazi, ke specimeno estas pipetita en la malĝustan vazon aŭ la malĝustan puton. Ĉi tiu risko povas esti konsiderinde reduktita per facile videbla markado de la putoj. Per la aŭtomatigo de dispensaj paŝoj, la "homa faktoro", t.e., eraroj kaj uzant-rilataj varioj, estas minimumigita, tiel pliigante reprodukteblecon, precipe en la kazo de malgrandaj reagvolumoj. Tio postulas platojn de sufiĉa dimensia stabileco esti utiligitaj en laborstacio. Aldonitaj strekkodoj disponigas plian maŝinlegeblecon, kiu simpligas specimenan spuradon dum la tuta procezo.
Programado de la termociklilo
Programi instrumenton povas pruvi esti tempopostula same kiel erar-inklina. Malsamaj PCR-termociklaj funkcioj funkcias kune por simpligi ĉi tiun procezan paŝon kaj, plej grave, por sekurigi ĝin:
Facila operacio kaj bona uzantgvido estas la bazo de efika programado. Konstruante sur ĉi tiu bazo, pasvorte protektita uzantadministrado malhelpos ke onies propraj programoj estu ŝanĝitaj de aliaj uzantoj. Se pluraj cikliloj (de la sama tipo) estas uzataj, estas utile se programo povas esti transdonita rekte de unu instrumento al alia per USB aŭ konektebleco. Komputila programaro ebligas centran kaj sekuran administradon de programoj, uzantrajtoj kaj dokumentoj en komputilo.
PCR-kuro
Dum la kuro, DNA estas plifortigita en la reagŝipo, kie ĉiu provaĵo devus esti submetita al identaj, konsekvencaj reagkondiĉoj. La sekvaj aspektoj estas gravaj por la procezo:
Kontrolo de temperaturo
Bonega precizeco en temperaturkontrolo kaj homogeneco de la ciklorbloko estas la bazo por eĉ temperaturkondiĉo de ĉiuj provaĵoj. La alta kvalito de la hejtaj kaj malvarmigaj elementoj (peltier-elementoj), same kiel la maniero kiel ili estas konektitaj al la bloko, estas la decidaj faktoroj kiuj determinos la riskon de temperaturdiferencoj konata kiel la "randa efiko"
Evaporiĝo
La koncentriĝoj de la individuaj reagkomponentoj ne devus ŝanĝiĝi dum la kurso de la reago pro vaporiĝo. Alie, eblas ke tre malmultePCR-produktopovas esti generita, aŭ neniu. Tial estas grave minimumigi vaporiĝon certigante sekuran sigelon. En ĉi tiu kazo, la varmigita kovrilo de la termociklilo kaj la sigelo de la ŝipo funkcias man en mano. Malsamaj sigelaj opcioj estas disponeblaj porPCR-platoj (ligo: Sigela artikolo), per kio la plej bona sigelo estas atingita per varmega sigelado. Aliaj fermoj ankaŭ povas esti taŭgaj, kondiĉe ke la kontaktpremo de la ciklilo-kovrilo povas esti alĝustigita al la elektita sigelo.
Proceznormigo estas en loko por protekti precizajn kaj reprodukteblajn rezultojn longtempe. Ĉi tio inkluzivas regulan prizorgadon de la ekipaĵo por certigi, ke ĝi ĉiam estas en bona funkcia stato. Ĉiuj konsumeblaj devas esti konstante altkvalitaj tra ĉiuj produktitaj lotoj, kaj ilia fidinda havebleco devas esti garantiita.
Afiŝtempo: Nov-29-2022