Αποθηκεύστε κρυοπαθή σε υγρό άζωτο

Κρυοπαραγωγοίχρησιμοποιούνται συνήθως για την κρυογονική αποθήκευση κυτταρικών σειρών και άλλων κρίσιμων βιολογικών υλικών, σε dewars γεμάτα με υγρό άζωτο.

Υπάρχουν διάφορα στάδια που εμπλέκονται στην επιτυχή διατήρηση των κυττάρων σε υγρό άζωτο. Ενώ η βασική αρχή είναι ένα αργό πάγωμα, η ακριβής τεχνική που χρησιμοποιείται εξαρτάται από τον τύπο κυττάρου και το χρησιμοποιούμενο κρυοπροστατευτικό. Υπάρχουν αρκετές εκτιμήσεις ασφαλείας και βέλτιστες πρακτικές που πρέπει να ληφθούν υπόψη κατά την αποθήκευση κυττάρων σε τέτοιες χαμηλές θερμοκρασίες.

Αυτή η ανάρτηση στοχεύει να δώσει μια επισκόπηση του τρόπου με τον οποίο αποθηκεύονται οι κρυοεπιχειρησιακές σε υγρό άζωτο.

Τι είναι τα cryovials

Τα κρυοπαρακάδες είναι μικρά, καλυμμένα φιαλίδια σχεδιασμένα για την αποθήκευση υγρών δειγμάτων σε εξαιρετικά χαμηλές θερμοκρασίες. Εξασφαλίζουν ότι τα κύτταρα που διατηρούνται σε κρυοπροστατευτικό δεν έρχονται σε άμεση επαφή με το υγρό άζωτο, ελαχιστοποιώντας τον κίνδυνο κυτταρικών καταγμάτων, ενώ εξακολουθούν να επωφελούνται από την ακραία επίδραση ψύξης του υγρού αζώτου.

Τα φιαλίδια είναι συνήθως διαθέσιμα σε μια σειρά από όγκους και σχέδια - μπορούν να είναι εσωτερικά ή εξωτερικά σπείρωμα με επίπεδη ή στρογγυλεμένα πυθμένα. Είναι επίσης διαθέσιμες αποστειρωμένες και μη αποστειρωμένες μορφές.

 

Ποιος χρησιμοποιείΚυλινδρικάΓια την αποθήκευση κυττάρων σε υγρό άζωτο

Μια σειρά από NHS και ιδιωτικά εργαστήρια, καθώς και ερευνητικά ιδρύματα που ειδικεύονται στην τραπεζική αίματος του λώρου, τη βιολογία των επιθηλιακών κυττάρων, την ανοσολογία και τη βιολογία των βλαστικών κυττάρων χρησιμοποιούν κρυοσυντηρητικά κύτταρα.

Τα κύτταρα που διατηρούνται με αυτόν τον τρόπο περιλαμβάνουν Β και Τ κύτταρα, κύτταρα CHO, αιματοποιητικό στέλεχος και προγονικά κύτταρα, υβριδώματα, εντερικά κύτταρα, μακροφάγους, μεσεγχυματικά στελέχη και προγονικά κύτταρα, μονοκύτταρα, μυέλωμα, ΝΚ κύτταρα και πολυτελή κύτταρα στελεχών.

 

Επισκόπηση του τρόπου αποθήκευσης κρυοπαιμονιών σε υγρό άζωτο

Η κρυοσυντήρηση είναι μια διαδικασία που διατηρεί κύτταρα και άλλα βιολογικά κατασκευάσματα με την ψύξη τους σε πολύ χαμηλές θερμοκρασίες. Τα κύτταρα μπορούν να αποθηκευτούν σε υγρό άζωτο για χρόνια χωρίς απώλεια βιωσιμότητας των κυττάρων. Πρόκειται για ένα περίγραμμα των χρησιμοποιούμενων διαδικασιών.

 

Προετοιμασία κυττάρων

Η ακριβής μέθοδος για την παρασκευή δειγμάτων θα ποικίλει ανάλογα με τον τύπο κυττάρου, αλλά γενικά τα κύτταρα συλλέγονται και φυγοκεντρούνται για την ανάπτυξη ενός πλούσιου σε κυτταρικά σφαιρίδια. Αυτό το σφαιρίδιο στη συνέχεια επαναιωρήθηκε στο υπερκείμενο αναμεμειγμένο με κρυοπροστατευτικό ή μέσο κρυοσυντήρησης.

Μέσος κρυοσυντήρησης

Αυτό το μέσο χρησιμοποιείται για τη διατήρηση των κυττάρων στα περιβάλλοντα χαμηλής θερμοκρασίας στα οποία θα υποβληθεί με την αναστολή του σχηματισμού ενδοεπιχειρησιακών και εξωκυτταρικών κρυστάλλων και επομένως τον κυτταρικό θάνατο. Ο ρόλος τους είναι να παρέχουν ένα ασφαλές, προστατευτικό περιβάλλον για κύτταρα και ιστούς κατά τη διάρκεια των διαδικασιών κατάψυξης, αποθήκευσης και απόψυξης.

Ένα μέσο όπως το φρέσκο ​​κατεψυγμένο πλάσμα (FFP), το διάλυμα με ηπαρίνη πλασμυίου ή τα διαλύματα χωρίς συστατικά χωρίς ορό, αναμειγνύονται με κρυοπροστατευτικά όπως διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) ή γλυκερόλη.

Το επαναπροσδιορισμένο σφαιρίδιο δείγματος είναι κτύπημα σε πολυπροπυλενικά κρυβικά όπωςSuzhou Ace Biomedical Company Cryogenic Storage Vials.

Είναι σημαντικό να μην υπερβείτε τα κρυοβάθμια, καθώς αυτό θα αυξήσει τον κίνδυνο ρωγμών και την πιθανή απελευθέρωση περιεχομένων (1).

 

Ελεγχόμενος ρυθμός κατάψυξης

Γενικά, χρησιμοποιείται ένας αργός ελεγχόμενος ρυθμός κατάψυξης για την επιτυχή κρυοσυντήρηση των κυττάρων.

Αφού τα δείγματα υποβάλλονται σε κρυογονικά φιαλίδια, τοποθετούνται σε υγρό πάγο ή σε ψυγείο 4 ℃ και η διαδικασία κατάψυξης ξεκινά μέσα σε 5 λεπτά. Ως γενικός οδηγός, τα κύτταρα ψύχονται με ρυθμό -1 έως -3 ανά λεπτό (2). Αυτό επιτυγχάνεται χρησιμοποιώντας προγραμματιζόμενο ψυγείο ή τοποθετώντας φιαλίδια σε ένα μονωμένο κουτί τοποθετημένο σε καταψύκτη ελεγχόμενου ρυθμού -90 ° C.

 

Μεταφορά σε υγρό άζωτο

Τα κατεψυγμένα κρυογονικά φιαλίδια μεταφέρονται στη συνέχεια σε δεξαμενή υγρού αζώτου για αόριστες περιόδους που παρέχουν θερμοκρασία μικρότερη από -135 ℃ διατηρείται.

Αυτές οι εξαιρετικά χαμηλές θερμοκρασίες μπορούν να ληφθούν με εμβάπτιση στο άζωτο υγρού ή ατμού.

Υγρή ή ατμός φάση;

Η αποθήκευση στο άζωτο υγρής φάσης είναι γνωστό ότι διατηρεί την ψυχρή θερμοκρασία με απόλυτη συνοχή, αλλά συχνά δεν συνιστάται για τους ακόλουθους λόγους:

  • Η ανάγκη για μεγάλους όγκους (βάθος) υγρού αζώτου που αποτελεί πιθανό κίνδυνο. Τα εγκαύματα ή η ασφυξία λόγω αυτού είναι ένας πραγματικός κίνδυνος.
  • Τεκμηριωμένες περιπτώσεις διασταυρούμενης μόλυνσης από μολυσματικούς παράγοντες όπως Aspergillus, Hep Β και ιογενή εξαπλώνεται μέσω του υγρού αζώτου μέσου (2,3)
  • Το δυναμικό για το υγρό άζωτο να διαρρεύσει στα φιαλίδια κατά τη διάρκεια της εμβάπτισης. Όταν απομακρύνεται από την αποθήκευση και θερμαίνεται σε θερμοκρασία δωματίου, το άζωτο επεκτείνεται ταχέως. Κατά συνέπεια, το φιαλίδιο μπορεί να καταστραφεί όταν απομακρύνεται από την αποθήκευση του υγρού αζώτου, δημιουργώντας κίνδυνο τόσο από τα πετώντας συντρίμμια όσο και από την έκθεση στο περιεχόμενο (1, 4).

Για τους λόγους αυτούς, η εξαιρετικά χαμηλή αποθήκευση θερμοκρασίας είναι συνήθως σε αζώτου φάσης ατμών. Όταν τα δείγματα πρέπει να αποθηκεύονται στη φάση της υγρής φάσης, πρέπει να χρησιμοποιούνται εξειδικευμένες σωλήνες κρυοενεργού.

Το μειονέκτημα της φάσης ατμών είναι ότι μπορεί να εμφανιστεί μια κατακόρυφη κλίση θερμοκρασίας με αποτέλεσμα τις διακυμάνσεις της θερμοκρασίας μεταξύ -135 ℃ και -190 ℃. Αυτό απαιτεί προσεκτική και επιμελή παρακολούθηση των επιπέδων του υγρού αζώτου και των μεταβολών της θερμοκρασίας (5).

Πολλοί κατασκευαστές συνιστούν ότι τα κρυοεπιχειρησιακά είναι κατάλληλα για αποθήκευση μέχρι -135 ℃ ή για χρήση μόνο στη φάση ατμών.

Απομόνοντας τα κρυοσυντηρημένα κύτταρα σας

Η διαδικασία απόψυξης είναι αγχωτική για μια κατεψυγμένη καλλιέργεια και απαιτείται σωστός χειρισμός και τεχνική για να εξασφαλιστεί η βέλτιστη βιωσιμότητα, ανάκτηση και λειτουργικότητα των κυττάρων. Τα ακριβή πρωτόκολλα απόψυξης θα εξαρτώνται από συγκεκριμένους τύπους κυττάρων. Ωστόσο, η ταχεία απόψυξη θεωρείται πρότυπο για:

  • Μείωση τυχόν αντίκτυπου στην κυτταρική ανάκαμψη
  • Βοηθήστε στη μείωση του χρόνου έκθεσης στις διαλυμένες ουσίες που υπάρχουν στα μέσα κατάψυξης
  • Ελαχιστοποιήστε τυχόν ζημιά από την ανακρυστάλλωση πάγου

Τα λουτρά νερού, τα λουτρά χάντρας ή τα εξειδικευμένα αυτοματοποιημένα όργανα χρησιμοποιούνται συνήθως για την απόψυξη των δειγμάτων.

Πιο συχνά 1 κυτταρική γραμμή αποψύχθηκε κάθε φορά για 1-2 λεπτά, στροβιλίζοντας απαλά σε ένα λουτρό 37 ℃ νερού έως ότου υπάρχει μόνο ένα μικρό κομμάτι πάγου που απομένει στο φιαλίδιο πριν πλυθούν σε ένα προωθημένο μέσο ανάπτυξης.

Για ορισμένα κύτταρα όπως έμβρυα θηλαστικών, η αργή θέρμανση είναι απαραίτητη για την επιβίωσή τους.

Τα κύτταρα είναι τώρα έτοιμα για κυτταρική καλλιέργεια, απομόνωση κυττάρων ή στην περίπτωση αιματοποιητικών βλαστικών κυττάρων - μελέτες βιωσιμότητας για να εγγυηθούν την ακεραιότητα των βλαστικών κυττάρων δότη πριν από τη μυελοκαταστατική θεραπεία.

Είναι φυσιολογική πρακτική η λήψη μικρών υποπολλαπλασιών του προ -πλαστογραφημένου δείγματος που χρησιμοποιείται για την εκτέλεση ενός αριθμού κυττάρων για τον προσδιορισμό των συγκεντρώσεων κυττάρων για επιμετάλλωση σε καλλιέργεια. Στη συνέχεια, μπορείτε να αξιολογήσετε τα αποτελέσματα των διαδικασιών απομόνωσης κυττάρων και να καθορίσετε τη βιωσιμότητα των κυττάρων.

 

Βέλτιστες πρακτικές για την αποθήκευση των cryovials

Η επιτυχημένη κρυοσυντήρηση των δειγμάτων που είναι αποθηκευμένα σε κρυοπαραγωγούς εξαρτάται από πολλά στοιχεία του πρωτοκόλλου, συμπεριλαμβανομένης της σωστής αποθήκευσης και τήρησης αρχείων.

  • Διαχωρισμένα κύτταρα μεταξύ θέσεων αποθήκευσης- Εάν οι όγκοι επιτρέπουν, χωρισμένα κύτταρα μεταξύ φιαλιδίων και αποθηκεύστε τα σε ξεχωριστές θέσεις για να μειωθεί ο κίνδυνος απώλειας δείγματος λόγω αποτυχιών του εξοπλισμού.
  • Αποτρέψτε τη διασταύρωση-Επιλέξτε αποστειρωμένα κρυογονικά φιαλίδια ή αυτόκλειστο πριν από την επόμενη χρήση
  • Χρησιμοποιήστε τα κατάλληλα μεγέθη φιαλίδια για τα κελιά σας- Τα φιαλίδια έρχονται σε μια σειρά όγκων μεταξύ 1 και 5mls. Αποφύγετε την υπερπήδηση των φιαλιδίων για να μειώσετε τον κίνδυνο ρωγμών.
  • Επιλέξτε Εσωτερικά ή εξωτερικά σπειροειδή κρυογονικά φιαλίδια- Τα εσωτερικά σπείρωμα φιαλίδια συνιστώνται από ορισμένα πανεπιστήμια για μέτρα ασφαλείας - μπορούν επίσης να αποτρέψουν τη μόλυνση κατά τη διάρκεια της πλήρωσης ή όταν αποθηκεύονται στο υγρό άζωτο.
  • Αποτρέψτε τη διαρροή-Χρησιμοποιήστε τις σφραγίδες με διώξεις με διώξεις που διαμορφώνονται στους δακτυλίους βιδωτό-δακτύλιο για να αποφύγετε τη διαρροή και τη μόλυνση.
  • Χρησιμοποιήστε 2D barcodes και φιαλίδια ετικέτας- Για να εξασφαλιστεί η ανιχνευσιμότητα, τα φιαλίδια με μεγάλες περιοχές γραφής επιτρέπουν σε κάθε φιαλίδιο να είναι επαρκής επισημασμένη. Οι 2D γραμμωτές κώδικες μπορούν να βοηθήσουν στη διαχείριση αποθήκευσης και την τήρηση αρχείων. Τα καλύμματα που έχουν κωδικοποιηθεί έγχρωμες είναι χρήσιμα για ευκολότερη αναγνώριση.
  • Επαρκής συντήρηση αποθήκευσης- Για να διασφαλιστεί ότι τα κύτταρα δεν χάνονται, τα δοχεία αποθήκευσης θα πρέπει να παρακολουθούν συνεχώς τα επίπεδα θερμοκρασίας και υγρού αζώτου. Οι συναγερμοί θα πρέπει να τοποθετούνται για να ειδοποιήσουν τους χρήστες σφαλμάτων.

 

Προφυλάξεις ασφαλείας

Το υγρό άζωτο έχει γίνει κοινή πρακτική στη σύγχρονη έρευνα, αλλά φέρει τον κίνδυνο σοβαρού τραυματισμού εάν χρησιμοποιηθεί εσφαλμένα.

Ο σωστός προσωπικός προστατευτικός εξοπλισμός (PPE) θα πρέπει να φορεθεί για να ελαχιστοποιηθεί ο κίνδυνος κρυοπαγής, εγκαύματα και άλλα δυσμενή περιστατικά κατά τον χειρισμό του υγρού αζώτου. Φθορά

  • Κρυογονικά γάντια
  • Εργαστηριακό παλτό
  • Ανθεκτική στην κρούση πλήρη ασπίδα προσώπου που καλύπτει επίσης το λαιμό
  • Παπούτσια κλειστού δακτύλου
  • Πλαστική ποδιά Plashproof

Τα ψυγεία υγρού αζώτου θα πρέπει να τοποθετούνται σε καλά αεριζόμενες περιοχές για να ελαχιστοποιηθούν ο κίνδυνος ασφυξίας-διαφεύγουν τα ατόρια ατόχους και μετατοπίζει το ατμοσφαιρικό οξυγόνο. Τα καταστήματα μεγάλου όγκου θα πρέπει να διαθέτουν συστήματα συναγερμού χαμηλού οξυγόνου.

Η εργασία σε ζεύγη κατά το χειρισμό του υγρού αζώτου είναι ιδανική και η χρήση του εκτός των κανονικών ωρών εργασίας πρέπει να απαγορεύεται.

 

CryoVials για να υποστηρίξετε τη ροή εργασίας σας

Η Suzhou Ace Biomedical Company προσφέρει μια ευρεία ποικιλία προϊόντων που ανταποκρίνονται στις ανάγκες σας κρυοσυντήρησης για διαφορετικούς τύπους κυττάρων. Το χαρτοφυλάκιο περιλαμβάνει μια σειρά από σωληνίσκους και μια σειρά από αποστειρωμένα κρυοπαθή.

Οι κρυοπαραγωγοί μας είναι:

  • Εργαστηριακό καπάκι βιδών 0,5ml 1,5ml 2.0ml κρυογονικά φιαλίδια κωνικά κάτω κρυοσυμπώνα με φλάντζα

    ● 0,5ml, 1,5ml, 2,0ml προδιαγραφή, με φούστα ή χωρίς φούστα
    ● Ο κωνικός ή αυτο-όρος σχεδιασμός, οι αποστειρωμένες ή μη αποστειρωμένες είναι και οι δύο διαθέσιμες
    ● Οι σωλήνες βιδών είναι κατασκευασμένοι από πολυπροπυλενίου ιατρικού βαθμού
    ● Τα φιαλίδια Cryotube PP μπορούν να καταψυχθούν επανειλημμένα και
    ● Ο σχεδιασμός του εξωτερικού καλύμματος μπορεί να μειώσει την πιθανότητα μόλυνσης κατά τη διάρκεια της θεραπείας του δείγματος.
    ● Κρυογενετικοί σωλήνες βιδωτό καψάκι για χρήση για χρήση
    ● Οι σωλήνες ταιριάζουν στους πιο συνηθισμένους ρότορες
    ● Σωλήνες κρυογόνου σωλήνα Ο-δακτύλιος ταιριάζουν στα πρότυπα 1 ιντσών και 2 ιντσών, 48well, 81well, 96well και 100 κουτί κατάψυξης
    ● αυτόκλειστο στους 121 ° C και καταψύξτε στους -86 ° C

    Μέρος όχι

    ΥΛΙΚΟ

    ΤΟΜΟΣ

    ΚΑΠΑΚΙΧΡΩΜΑ

    PCS/ΤΣΑΝΤΑ

    Τσάντες/θήκη

    Act05-bl-n

    PP

    0,5 ml

    Μαύρο, κίτρινο, μπλε, κόκκινο, μοβ, λευκό

    500

    10

    ACT15-BL-N

    PP

    1,5ml

    Μαύρο, κίτρινο, μπλε, κόκκινο, μοβ, λευκό

    500

    10

    ACT15-BL-NW

    PP

    1,5ml

    Μαύρο, κίτρινο, μπλε, κόκκινο, μοβ, λευκό

    500

    10

    ACT20-BL-N

    PP

    2.0ml

    Μαύρο, κίτρινο, μπλε, κόκκινο, μοβ, λευκό

    500

    10

Κρυογονικός σωλήνας


Χρόνος δημοσίευσης: Δεκ-27-2022