Πώς να σφραγίσετε μια πλάκα PCR

Εισαγωγή

Πλάκες PCR, βασικό στοιχείο του εργαστηρίου για πολλά χρόνια, γίνονται ακόμη πιο διαδεδομένα στο σύγχρονο περιβάλλον καθώς τα εργαστήρια αυξάνουν την απόδοση τους και χρησιμοποιούν όλο και περισσότερο αυτοματισμό στις ροές εργασίας τους. Η επίτευξη αυτών των στόχων με παράλληλη διατήρηση της ακρίβειας και της ακεραιότητας των πειραμάτων μπορεί να είναι δύσκολη. Ένας από τους κοινούς τομείς όπου μπορεί να παρουσιαστούν σφάλματα είναι η σφράγιση τουΠλάκες PCR, με κακή τεχνική που επιτρέπει την εξάτμιση των δειγμάτων, αλλοιώνοντας το pH και συνεπώς διαταράσσουν τις ενζυμικές λειτουργίες και προκαλώντας μόλυνση. Μαθαίνοντας πώς να σφραγίζετε αΠλάκα PCRεξαλείφει σωστά αυτούς τους κινδύνους και εξασφαλίζει αναπαραγώγιμα αποτελέσματα.

Βρείτε τη σωστή σφράγιση για την πλάκα PCR σας

Καπάκια πλάκας έναντι σφραγίδων φιλμ έναντι καπακιών
Καπέλαείναι ένας καλός τρόπος για να στεγανοποιήσετε το πιάτο σας με σφιχτό σφράγισμα, ενώ σας δίνουν την ευελιξία να ξεσφραγίζετε και να ξανασφραγίζετε το πιάτο πολύ εύκολα όπως χρειάζεστε χωρίς απορρίμματα. Ωστόσο, τα καπάκια έχουν μερικά βασικά μειονεκτήματα.

Πρώτον, θα πρέπει να αγοράσετε το συγκεκριμένο καπάκι που είναι συμβατό, γεγονός που τα κάνει να μην είναι ευέλικτα. Θα πρέπει να βεβαιωθείτε ότι το καπάκι που θα επιλέξετε ταιριάζει στην πλάκα, η οποία εξαρτάται από τον κατασκευαστή της, και να επιλέξετε είτε θολωτό είτε επίπεδο με βάση τον θερμοκυκλωτή που χρησιμοποιείτε.

Δεύτερον, η εφαρμογή των καλυμμάτων στο πιάτο μπορεί να είναι πολύ επαναλαμβανόμενη και κουραστική, με κίνδυνο διασταυρούμενης μόλυνσης εάν τοποθετήσετε το λάθος καπάκι στο λάθος φρεάτιο.

Ενώ οι σφραγίδες μεμβράνης είναι λιγότερο εύκαμπτες όσον αφορά την αφαίρεση και την αντικατάσταση, είναι πολύ ευέλικτες καθώς ταιριάζουν σε κάθε τύπο πλάκας PCR, ανεξάρτητα από το ποιος είναι ο κατασκευαστής. Μπορούν απλά να κοπούν στο μέγεθος, καθιστώντας τα πολύ αποτελεσματικά.

Μια άλλη επιλογή είναι ένα καπάκι πλάκας. Αυτά προσφέρουν λιγότερη προστασία από τα καπάκια και τα σφραγίσματα και χρησιμοποιούνται κυρίως μόνο για βραχυπρόθεσμη κάλυψη για την αποφυγή μόλυνσης.

Σφραγίδες μεμβράνης οπτικών έναντι αλουμινίου

Είτε χρειάζεστε ένα οπτικό, διαφανές σφράγισμα είτε έναμεμβράνη αλουμινόχαρτουΤο να σφραγίσετε το πιάτο σας αποφασίζεται από την πειραματική σας μορφή.Οπτικές μεμβράνες στεγανοποίησηςείναι διαφανή για να σας επιτρέπουν να παρατηρείτε δείγματα, ενώ παράλληλα τα προστατεύουν και αποτρέπουν την εξάτμιση. Είναι επίσης ιδιαίτερα χρήσιμα σε πειράματα qPCR, τα οποία περιλαμβάνουν μετρήσεις φθορισμού υψηλής ακρίβειας απευθείας από την πλάκα, οπότε θα χρειαστείτε ένα φιλμ στεγανοποίησης που φιλτράρει όσο το δυνατόν λιγότερο φθορισμό. Είναι σημαντικό να βεβαιωθείτε ότι η τσιμούχα ή το καπάκι που χρησιμοποιείτε έχει αρκετά υψηλό επίπεδο οπτικής διαύγειας ώστε να διασφαλίζεται ότι οι μετρήσεις είναι ακριβείς.

Οι μεμβράνες αλουμινίου είναι κατάλληλες για δείγματα που είναι ευαίσθητα στο φως ή πρόκειται να φυλαχθούν σε θερμοκρασία κάτω των 80°C. Για το λόγο αυτό, τα περισσότερα δείγματα που προορίζονται για μακροχρόνια αποθήκευση θα απαιτούν μια μεμβράνη αλουμινίου. Οι μεμβράνες αλουμινίου μπορούν επίσης να τρυπηθούν, κάτι που είναι χρήσιμο είτε για την εξέταση μεμονωμένων φρεατίων είτε για τη μεταφορά δειγμάτων με βελόνες. Αυτό μπορεί να συμβεί χειροκίνητα ή ως μέρος μιας ρομποτικής πλατφόρμας.

Σκεφτείτε επίσης ότι οι επιθετικές ουσίες που περιλαμβάνουν οξέα, βάσεις ή διαλύτες θα απαιτήσουν μια σφράγιση που να μπορεί να τις αντέχει, οπότε μια σφράγιση από φύλλο είναι πιθανώς πιο κατάλληλη.

Αυτοκόλλητη μεμβράνη έναντι θερμικής σφράγισης
Σφραγίδες με αυτοκόλλητη μεμβράνηείναι πολύ απλές και εφαρμόζονται εύκολα. Το μόνο που χρειάζεστε είναι ένας χρήστης να εφαρμόσει τη σφράγιση στην πλάκα και να χρησιμοποιήσει ένα απλό εργαλείο εφαρμογής για να πιέσει προς τα κάτω και να σχηματίσει μια σφιχτή σφράγιση.

Οι θερμοκολλήσεις είναι πιο προηγμένες, παρέχοντας μεγαλύτερη διάρκεια σφράγισης που έχει μειωμένους ρυθμούς εξάτμισης σε σύγκριση με μια συμβατική αυτοκόλλητη σφράγιση. Αυτή η επιλογή είναι κατάλληλη εάν θέλετε να αποθηκεύσετε δείγματα μακροπρόθεσμα, αν και αυτό συνοδεύεται από μια πρόσθετη απαίτηση για εξοπλισμό σφράγισης πλακών.

Πώς να σφραγίσετε μια πλάκα PCR

Μέθοδος Σφράγισης Πλάκας

Αυτοκόλλητο

1. Βεβαιωθείτε ότι εργάζεστε σε μια επίπεδη και σταθερή επιφάνεια εργασίας

2. Αφαιρέστε τη μεμβράνη από τη συσκευασία της και αφαιρέστε το υπόστρωμα

3. Τοποθετήστε προσεκτικά τη σφράγιση στο πιάτο, ενώ βεβαιωθείτε ότι όλα τα φρεάτια είναι καλυμμένα

4. Χρησιμοποιήστε ένα εργαλείο εφαρμογής για να ασκήσετε πίεση στην πλάκα. Ξεκινήστε από το ένα άκρο και προχωρήστε στο άλλο, πιέζοντας ομοιόμορφα

5. Επαναλάβετε αυτό πολλές φορές

6. Περάστε το απλικατέρ σας γύρω από τα εξωτερικά φρεάτια, για να βεβαιωθείτε ότι είναι επίσης σωστά σφραγισμένα.

Θερμοσφραγίδες

Οι θερμοκολλήσεις λειτουργούν λιώνοντας τη μεμβράνη στο χείλος κάθε φρεατίου, με τη βοήθεια ενός σφραγιστικού πλακών. Για τη λειτουργία ενός θερμομονωτικού, ανατρέξτε στις οδηγίες που παρέχονται από τον κατασκευαστή του εξοπλισμού. Βεβαιωθείτε ότι ο κατασκευαστής από τον οποίο προμηθεύεστε τον εξοπλισμό σας είναι αξιόπιστος, καθώς είναι πολύ σημαντικό η σφράγιση να είναι σωστή, αποτελεσματική και στεγανή.

Συμβουλές σφράγισης πιάτων

ένα. Όταν ασκείτε πίεση στη σφράγιση, πηγαίνετε τόσο σε οριζόντια όσο και σε κάθετη κατεύθυνση για να εξασφαλίσετε τη σωστή στεγανοποίηση

σι. Είναι πάντα καλή πρακτική να εκτελείτε μια δοκιμαστική λειτουργία για οτιδήποτε κάνετε, και αυτό δεν διαφέρει με τη σφράγιση πλακών. Δοκιμάστε με ένα άδειο πιάτο πριν χρησιμοποιήσετε ένα με δείγματα.

ντο. Κατά τη δοκιμή, αφαιρέστε τη σφράγιση και κοιτάξτε να δείτε ότι η κόλλα έχει κολλήσει σωστά, χωρίς κενά. Υπάρχει μια οπτική αναπαράσταση αυτού στο πρώτο έγγραφο αναφοράς. Εάν δεν έχετε σφραγίσει σωστά την πλάκα, όταν αφαιρέσετε τη σφράγιση θα υπάρχουν κενά όπου η κόλλα δεν έχει κολλήσει πλήρως στην πλάκα.

ρε. Για την αποστολή και τη μεταφορά δειγμάτων, μπορεί να σας φανεί χρήσιμο να εφαρμόσετε ένα πλαστικό σφράγισμα πάνω από τη σφράγιση του φύλλου για επιπλέον προστασία (ειδικά από τρύπημα).

μι. Να βεβαιώνεστε πάντα ότι δεν υπάρχουν χτυπήματα ή ζάρες κατά την εφαρμογή της μεμβράνης – αυτά θα προκαλέσουν διαρροές και εξάτμιση