Πώς να σφραγίσετε μια πλάκα PCR

Εισαγωγή

Πλάκες PCR, ένα βασικό στοιχείο του εργαστηρίου για πολλά χρόνια, καθίσταται ακόμη πιο διαδεδομένη στο σύγχρονο περιβάλλον, καθώς τα εργαστήρια αυξάνουν την απόδοση τους και χρησιμοποιούν όλο και περισσότερο τον αυτοματισμό στις ροές εργασίας τους. Η επίτευξη αυτών των στόχων διατηρώντας παράλληλα την ακρίβεια και την ακεραιότητα των πειραμάτων μπορεί να είναι δύσκολη. Ένας από τους κοινόχρηστους χώρους όπου τα σφάλματα μπορούν να εισέλθουν είναι με τη σφράγισηΠλάκες PCR, με κακή τεχνική που επιτρέπει την εξάτμιση των δειγμάτων, μεταβάλλοντας το ρΗ και επομένως διαταράσσοντας τις ενζυματικές λειτουργίες και προσκαλώντας μόλυνση. Μαθαίνοντας πώς να σφραγίσετε έναΠινακίδα PCRΕξαλείφει σωστά αυτούς τους κινδύνους και εξασφαλίζει αναπαραγώγιμα αποτελέσματα.

Βρείτε τη σωστή σφραγίδα για την πλάκα PCR σας

Πλαίσια καπάκια εναντίον φώκια φιλμ έναντι καπάκια
Καλύμματαείναι ένας καλός τρόπος για να σφραγίσετε το πιάτο σας με μια σφιχτή σφραγίδα, ενώ παράλληλα σας δίνει την ευελιξία να αποσυμπιέστε πολύ εύκολα και να επαναλάβετε την πλάκα όπως χρειάζεστε χωρίς αποβλήτο. Ωστόσο, τα Caps έχουν μερικά βασικά μειονεκτήματα.

Πρώτον, θα πρέπει να αγοράσετε το συγκεκριμένο ανώτατο όριο που είναι συμβατό, γεγονός που δεν τους καθιστά ευέλικτο. Θα πρέπει να βεβαιωθείτε ότι το καπάκι που επιλέγετε ταιριάζει με την πλάκα, η οποία εξαρτάται από τον κατασκευαστή του, και επιλέγετε είτε θολωτό είτε επίπεδη με βάση τον θερμοκυκλιστή που χρησιμοποιείτε.

Δεύτερον, η εφαρμογή των καπακιών στην πλάκα μπορεί να είναι πολύ επαναλαμβανόμενη και κουραστική, με τον κίνδυνο διασταυρούμενης μόλυνσης εάν βάζετε το λάθος καπάκι σε λάθος πηγάδι.

Ενώ οι φώκιες ταινιών είναι λιγότερο ευέλικτες όσον αφορά την αφαίρεση και την αντικατάσταση, είναι πολύ ευέλικτες καθώς θα ταιριάζουν σε κάθε τύπο πλάκας PCR, χωρίς να λαμβάνονται υπόψη ποιος είναι ο κατασκευαστής. Μπορούν απλά να κοπούν σε μέγεθος, καθιστώντας τους πολύ αποτελεσματικά.

Μια άλλη επιλογή είναι ένα καπάκι πλάκας. Αυτά προσφέρουν λιγότερη προστασία που καλύπτουν και σφραγίδες και χρησιμοποιούνται κυρίως μόνο για βραχυπρόθεσμη κάλυψη για να αποφευχθεί η μόλυνση.

Οπτικά έναντι φώκια φιλμ με φύλλα

Είτε χρειάζεστε μια οπτική, καθαρή σφραγίδα ή έναμεμβράνη αλουμινίουΓια να σφραγίσετε το πιάτο σας αποφασίζεται από την πειραματική σας μορφή.Οπτικές μεμβράνες σφράγισηςείναι διαφανείς για να σας επιτρέψουν να παρατηρήσετε δείγματα, ενώ εξακολουθείτε να τα προστατεύετε και να αποτρέψετε την εξάτμιση. Είναι επίσης ιδιαίτερα χρήσιμα σε πειράματα qPCR που περιλαμβάνουν την πραγματοποίηση εξαιρετικά ακριβών μετρήσεων φθορισμού απευθείας από την πλάκα, οπότε θα χρειαστείτε μια μεμβράνη σφράγισης που φιλτράρει όσο το δυνατόν λιγότερο φθορισμό. Είναι σημαντικό να βεβαιωθείτε ότι η σφραγίδα ή το καπάκι που χρησιμοποιείτε έχει ένα αρκετά υψηλό επίπεδο οπτικής σαφήνειας για να διασφαλιστεί ότι οι αναγνώσεις είναι ακριβείς.

Οι μεμβράνες αλουμινίου είναι κατάλληλες για τα δείγματα που είναι ευαίσθητα στο φως ή πρέπει να αποθηκεύονται κάτω από τους 80 ° C. Για το λόγο αυτό, τα περισσότερα δείγματα που προορίζονται για μακροπρόθεσμη αποθήκευση θα απαιτήσουν φιλμ αλουμινίου. Οι μεμβράνες αλουμινίου είναι επίσης διαπερασμένες, οι οποίες είναι χρήσιμες είτε για την εξέταση μεμονωμένων πηγαδιών είτε για τη μεταφορά δειγμάτων με βελόνες. Αυτό μπορεί να συμβεί με το χέρι ή ως μέρος μιας ρομποτικής πλατφόρμας.

Επίσης, θεωρήστε ότι οι επιθετικές ουσίες που περιλαμβάνουν οξέα, βάσεις ή διαλύτες θα απαιτήσουν σφραγίδα που μπορεί να αντέξει τα, οπότε μια σφραγίδα αλουμινίου είναι πιθανότατα πιο κατάλληλη.

Συγκολλητική έναντι φιλμ σφράγισης θερμότητας
Σφραγίδες συγκολλητικής μεμβράνηςείναι πολύ ευθεία προς τα εμπρός και εύκολα εφαρμόστε. Το μόνο που χρειάζεστε είναι για έναν χρήστη να εφαρμόσει τη σφραγίδα στην πλάκα και να χρησιμοποιήσει ένα απλό εργαλείο εφαρμογής για να πιέσει προς τα κάτω και να σχηματίσει μια σφιχτή σφραγίδα.

Οι σφραγίδες θερμότητας είναι πιο προχωρημένες, παρέχοντας μια πιο μακροχρόνια σφραγίδα που έχει μειωθεί τα ποσοστά εξάτμισης σε σύγκριση με μια συμβατική κολλητική σφράγιση. Αυτή η επιλογή είναι κατάλληλη αν θέλετε να αποθηκεύσετε δείγματα μακροπρόθεσμα, αν και αυτό έρχεται με μια πρόσθετη απαίτηση για εξοπλισμό σφράγισης πλάκας.

Πώς να σφραγίσετε μια πλάκα PCR

Μέθοδος σφράγισης πλάκας

Αυτοκόλλητος

1. Βεβαιωθείτε ότι εργάζεστε σε μια επίπεδη και σταθερή επιφάνεια εργασίας

2. Αφαιρέστε την μεμβράνη από τη συσκευασία του και αφαιρέστε την υποστήριξη

3. Τοποθετήστε προσεκτικά τη σφραγίδα πάνω στην πλάκα, διασφαλίστε ότι καλύπτονται όλα τα πηγάδια

4. Χρησιμοποιήστε ένα εργαλείο εφαρμογής για να εφαρμόσετε πίεση σε όλη την πλάκα. Ξεκινήστε από το ένα άκρο και εργάζεστε στο άλλο, πιέζοντας ομοιόμορφα

5. Επαναλάβετε αυτό πολλές φορές

6. Εκτελέστε το εφαρμοστή σας γύρω από τα εξωτερικά πηγάδια, για να βεβαιωθείτε ότι αυτά είναι επίσης σωστά σφραγισμένα.

Σφραγίδες θερμότητας

Οι σφραγίδες θερμότητας λειτουργούν με την τήξη της μεμβράνης στο χείλος κάθε πηγαδιού, με τη βοήθεια ενός στεγανοποιητή πλάκας. Για να λειτουργήσετε ένα σφραγιστικό θερμότητας, ανατρέξτε στις οδηγίες που παρέχονται από τον κατασκευαστή του εξοπλισμού. Βεβαιωθείτε ότι ο κατασκευαστής που πηγαίνετε από τον εξοπλισμό σας είναι αξιόπιστο, καθώς είναι πολύ σημαντικό η σφραγίδα να είναι σωστή, αποτελεσματική και στεγανή.

Συμβουλές κορυφής στεγανοποίησης πλάκας

ένα. Όταν εφαρμόζετε πίεση στη σφραγίδα, πηγαίνετε τόσο σε οριζόντιες όσο και σε κάθετες κατευθύνσεις για να εξασφαλίσετε μια σωστή σφραγίδα

σι. Είναι πάντα καλή πρακτική να τρέχετε μια δοκιμαστική διαδρομή ό, τι κάνετε, και αυτό δεν διαφέρει από τη σφράγιση της πλάκας. Δοκιμάστε με μια κενή πλάκα πριν χρησιμοποιήσετε ένα με δείγματα.

ντο. Κατά τη δοκιμή, βγάλτε τη σφραγίδα και κοιτάξτε για να δείτε ότι η κόλλα κολλήσει σωστά, χωρίς κενά. Υπάρχει μια οπτική αναπαράσταση αυτού στο πρώτο έγγραφο αναφοράς. Εάν δεν έχετε σφραγίσει σωστά την πλάκα, όταν αφαιρείτε τη σφραγίδα, θα υπάρχουν κενά όπου η κόλλα δεν έχει κάνει πλήρως δεσμούς με την πλάκα.

ρε. Για τη ναυτιλία και τη μεταφορά δειγμάτων, μπορεί να διαπιστώσετε ότι είναι χρήσιμο να εφαρμόσετε μια πλαστική σφράγιση στην κορυφή της σφραγίδας αλουμινίου για επιπλέον προστασία (ειδικά από τη διάτρηση).

μι. Πάντα βεβαιωθείτε ότι δεν υπάρχουν προσκρούσεις ή ρυτίδες κατά την εφαρμογή της ταινίας - αυτά θα προκαλέσουν διαρροές και εξάτμιση