Οι αλυσιδωτές αντιδράσεις πολυμεράσης (PCR) είναι μια από τις ευρέως γνωστές μεθόδους που χρησιμοποιούνται σε εργαστήρια βιοεπιστημών.
Οι πλάκες PCR παράγονται από πλαστικά πρώτης κατηγορίας για εξαιρετική επεξεργασία και ανάλυση δειγμάτων ή αποτελεσμάτων που συλλέγονται.
Έχουν λεπτά και ομοιογενή τοιχώματα για να παρέχουν ακριβή θερμική μεταφορά.
Κατά την προετοιμασία για εφαρμογές σε πραγματικό χρόνο, το λεπτό τμήμα DNA ή RNA απομονώνεται και αποθηκεύεται σε πλάκες PCR.
Οι πλάκες PCR είναι εξαιρετικά αποτελεσματικές στη θερμοσφράγιση και περιορίζουν επίσης τη ροή της θερμότητας.
Ωστόσο, όσο αποτελεσματικές και αξιόπιστες είναι οι πλάκες PCR, τα σφάλματα και οι ανακρίβειες παραμερίζονται εύκολα κατά την επεξεργασία των δειγμάτων.
Επομένως, εάν ενδιαφέρεστε να αποκτήσετε ένα καλό και υψηλής ποιότηταςΠλάκες PCR.Είναι ιδανικό να επικοινωνήσετε με έναν αξιόπιστο κατασκευαστή πλακών PCR. Με αυτό είστε σίγουροι ότι θα έχετε την καλύτερη προσφορά.
Ακολουθούν ορισμένες προφυλάξεις που πρέπει να ακολουθήσετε για να αποφύγετε τη μόλυνση των αντιδραστηρίων ή των δειγμάτων και να αποτρέψετε την εμφάνιση ανακρίβειων στα αποτελέσματα.
Αποστείρωση του περιβάλλοντος χώρου
Λανθασμένα θετικά ή αρνητικά εμφανίζονται λόγω της παρουσίας ακαθαρσιών, γεγονός που σας κάνει να αμφιβάλλετε για τα αποτελέσματα.
Οι ακαθαρσίες και οι προσμείξεις εμφανίζονται σε διάφορες μορφές όπως άσχετο DNA ή χημικά πρόσθετα που τελικά μειώνουν την αποτελεσματικότητα και την αποτελεσματικότητα της αντίδρασης.
Υπάρχουν πολλοί τρόποι για να μειωθεί σημαντικά ο ρυθμός μόλυνσης της πλάκας PCR.
Η χρήση αποστειρωμένων άκρων φίλτρου είναι ένας άλλος χρήσιμος τρόπος για να αποτρέψετε τις ακαθαρσίες από το να εισχωρήσουν στα δείγματά σας μέσω των πιπέτων.
Αφιερώστε ένα εντελώς καθαρό σετ εξοπλισμού, που αποτελείται από πιπέτες και σχάρες, αποκλειστικά για τη χρήση PCR. Αυτό θα εγγυηθεί αμελητέα μεταφορά ακαθαρσιών ή ρύπων γύρω από το εργαστήριο.
Χρησιμοποιήστε λευκαντικά, αιθανόλη στις πιπέτες, στα ράφια και στους πάγκους για να σκουπίσετε τους ρύπους.
Διαθέστε έναν δεσμευμένο χώρο για όλες τις αντιδράσεις σας PCR για να ελαχιστοποιήσετε περαιτέρω τη μόλυνση από σωματίδια.
Χρησιμοποιήστε καθαρά γάντια σε κάθε βήμα και αντικαταστήστε τα συχνά.
Πλάκες PCR
Επιθεωρήστε τη συγκέντρωση και την καθαρότητα του προτύπου.
Η καθαριότητα του πάγκου και του εξοπλισμού που χρησιμοποιείται κατά την ανάλυση δειγμάτων με την PCR θα πρέπει να διατηρείται. Είναι απαραίτητο να επικυρωθεί ο βαθμός καθαρότητας των δειγμάτων πριν από την ανάλυση και την επεξεργασία.
Γενικά, οι αναλυτές λαμβάνουν υπόψη τη συγκέντρωση και το επίπεδο καθαρότητας των δειγμάτων DNA.
Προσπαθήστε η αναλογία απορρόφησης για 260nm/280nm δεν πρέπει να είναι μικρότερη από 1,8. Ενώ το επόμενο μήκος κύματος μεταξύ 230nm και 320nm χρησιμοποιούνται για τον εντοπισμό ακαθαρσιών.
Σε μια περίπτωση, χαοτροπικά άλατα και άλλες οργανικές ενώσεις ανιχνεύονται σε ρυθμό απορρόφησης 230 nm. Ενώ η θολότητα στα δείγματα DNA ανιχνεύεται και επαληθεύεται επίσης με ρυθμό απορρόφησης 320 nm.
Αποφύγετε την υπερφόρτωση των πλακών PCR με το προϊόν
Όσο και αν είναι επιθυμητό να τρέχουν πολλά προϊόντα ταυτόχρονα, έχει ως αποτέλεσμα τη διασταυρούμενη μόλυνση των πλακών PCR.
Η υπερφόρτωση των πλακών PCR με διάφορα απόβλητα προϊόντων καθιστά εξαιρετικά δύσκολη την εξακρίβωση των δειγμάτων.
Διατηρήστε αρχεία για τα αντιδραστήρια PCR
Οι συνεχείς κύκλοι κατάψυξης/απόψυξης και η συχνή χρήση του δείγματος ενδέχεται να βλάψουν τα αντιδραστήρια PCR, τα ένζυμα και τα DNTP μέσω της ανακρυστάλλωσης.
Προσπαθείτε πάντα να παρακολουθείτε τον ρυθμό της χρησιμοποιούμενης ποσότητας κατά την προετοιμασία των δειγμάτων προς ανάλυση.
Το προτιμώμενο LIMS είναι πιο κατάλληλο για τον έλεγχο του αποθέματος και της ποσότητας των αντιδραστηρίων και των δειγμάτων που έχουν παγώσει ή αποψυχθεί.
Επιλέξτε την καλύτερη θερμοκρασία ανόπτησης.
Η επιλογή και η χρήση της λανθασμένης θερμοκρασίας ανόπτησης είναι μια άλλη μέθοδος που τα αποτελέσματα της PCR περιέχουν σφάλματα.
Μερικές φορές, η αντίδραση δεν πηγαίνει όπως είχε προγραμματιστεί. Είναι επιθυμητό να μειωθεί η θερμοκρασία ανόπτησης για να διευκολυνθεί μια επιτυχής αντίδραση.
Ωστόσο, η μείωση της θερμοκρασίας αυξάνει τις πιθανότητες εμφάνισης ψευδώς θετικών και διμερών ασταριού.
Είναι σημαντικό να επιβεβαιωθεί η ανάλυση της καμπύλης τήξης κατά τη χρήση των πλακών PCR, καθώς είναι ένας καλός δείκτης για την επιλογή της σωστής θερμοκρασίας ανόπτησης.
Το λογισμικό σχεδίασης Primer βοηθά στο σχεδιασμό, την παροχή σωστής θερμοκρασίας ανόπτησης με άμεση μείωση του σφάλματος στις πλάκες PCR.
Χρειάζεστε μια πλάκα PCR υψηλής ποιότητας;
Σε περίπτωση που έχετε σκεφτεί πού να βρείτε έναν αξιόπιστο κατασκευαστήΠλάκες PCR. Μην ψάχνετε άλλο γιατί βρίσκεστε στο σωστό μέρος.
Ευγενώςκάντε κλικ εδώ για να επικοινωνήσετε μαζί μαςγια προϊόντα και υπηρεσίες υψηλής ποιότητας σε τιμή που δεν θα σπάσει τα χρήματα.
Ώρα δημοσίευσης: Οκτ-30-2021