Sådan pipette små mængder med håndholdte manuelle pipetter

Efterhånden som der er placeret mere fokus på reduktion af reagenser og omkostninger, er mindre volumener i høj efterspørgsel, f.eks. Til fremstilling af PCR -mastermix- eller enzymreaktioner. Men pipettering af små volumener fra 0,2 - 5 µl sæt nye udfordringer til pipetternøjagtighed og præcision. Følgende punkter er vigtige:

1. Pipette og spidsstørrelse: Vælg altid pipetten med den laveste nominelle volumen mulig og det mindste spids for at holde luftpuden så lille som muligt. Når du pipetter 1 µl EG, skal du vælge en 0,25 - 2,5 ul pipette og matchende spids snarere end en 1 - 10 µl pipette.
2. Kalibrering og vedligeholdelse: Det er vigtigt, at dine pipetter er korrekt kalibreret og vedligeholdt. Små justeringer og ødelagte dele på en pipette fører til en massiv stigning i systematiske og tilfældige fejlværdier. En kalibrering i henhold til ISO 8655 skal udføres en gang om året.
3. Positive forskydningspipetter: Kontroller, om du har en positiv forskydningspipette med et lavt volumenområde i dit laboratorium. Generelt fører brugen af ​​denne type pipette til et bedre pipetresultat med hensyn til nøjagtighed og præcision end med klassiske air-cushion-pipetter.
4. Prøv at bruge større mængder: Du kan overveje at fortynde din prøve til pipette større mængder med den samme mængde i den endelige reaktion. Dette kan reducere pipetterfejl med meget små prøvevolumener.

Ud over et godt værktøj skal forskeren have en meget god pipetteknik. Vær særlig opmærksom på følgende trin:

1. TIP -tilknytning: Stik ikke pipetten på spidsen, da dette kan skade den fine spids ende, hvis væskestrålen omdirigeres eller beskadiger åbningen. Påfør kun let tryk, når du fastgør et spids, og brug en pipette med en fjederbelastet spidskegle.
2. Holder pipetten: Hold ikke pipetten i din hånd, mens du venter på centrifugen, cykler osv. Indersiden af ​​pipetten opvarmes og fører lufthuden til at udvide, hvilket resulterer i afvigelser fra det indstillede volumen, når pipetten.
3. Forudvikling: Befugningen af ​​luften inde i spidsen og pipette forbereder spidsen til prøven og undgår fordampning, når man aspirerer overførselsvolumen.
4. Lodret aspiration: Dette er meget vigtigt, når man håndterer små mængder for at undgå den kapillære effekt, der opstår, når pipetten holdes i en vinkel.
5. Dypedybde: Indsæt spidsen så lidt som muligt for at forhindre væske, der kommer ind i spidsen på grund af kapillæreffekten. Tommelfingerregel: Jo mindre spidsen og volumen, jo lavere er nedsænkedybden. Vi anbefaler maksimalt 2 mm, når der pipetter små mængder.
6. Dispensering ved 45 ° vinkel: Optimal strømning af væsken garanteres, når pipetten holdes i en 45 ° vinkel.
7. Kontakt til fartøjsvæg eller flydende overflade: Små volumener kan kun udleveres korrekt, når spidsen holdes mod karvæggen eller nedsænkes i væske. Selv det sidste fald fra spidsen kan udleveres nøjagtigt.
8. Udblæsning: En udblæsning er obligatorisk efter at have dispenseret lavmængder for at dispensere selv den sidste dråbe væske, der er til stede i spidsen. Udblæsningen skal også udføres mod karvæggen. Vær forsigtig med ikke at bringe luftbobler ind i prøven, når du udfører en udblæsning på den flydende overflade.