Ved pipettering af volumener fra 0,2 til 5 µL, er pipetteringsnøjagtighed og præcision af yderste vigtighed, en god pipeteringsteknik er essentiel, fordi håndteringsfejl er mere indlysende med små volumener.
Da der lægges mere fokus på at reducere reagenser og omkostninger, er der stor efterspørgsel efter mindre volumener, f.eks. til fremstilling af PCR Mastermix eller enzymreaktioner. Men pipettering af små volumener fra 0,2 – 5 µL sætter nye udfordringer for pipetteringsnøjagtighed og præcision. Følgende punkter er væsentlige:
- Pipette- og spidsstørrelse: Vælg altid pipetten med det lavest mulige nominelle volumen og den mindste spids for at holde luftpuden så lille som muligt. Når du pipetterer f.eks. 1 µL, skal du vælge en 0,25 – 2,5 µL pipette og matchende spids i stedet for en 1 – 10 µL pipette.
- Kalibrering og vedligeholdelse: Det er vigtigt, at dine pipetter er korrekt kalibreret og vedligeholdt. Små justeringer og ødelagte dele på en pipette fører til en massiv stigning i systematiske og tilfældige fejlværdier. En kalibrering i henhold til ISO 8655 skal udføres en gang om året.
- Positive forskydningspipetter: Tjek, om du har en positiv forskydningspipette med et lavt volumenområde i dit laboratorium. Generelt fører brugen af denne type pipette til et bedre pipetteringsresultat med hensyn til nøjagtighed og præcision end med klassiske luftpudepipetter.
- Prøv at bruge større volumener: Du kan overveje at fortynde din prøve for at pipettere større volumener med den samme mængde i den endelige reaktion. Dette kan reducere pipetteringsfejl med meget små prøvevolumener.
Forskeren skal udover et godt værktøj have en rigtig god pipeteringsteknik. Vær særlig opmærksom på følgende trin:
- Spidsfastgørelse: Undlad at sætte pipetten fast på spidsen, da dette kan beskadige den fine spidsende medføre, at væskestrålen omdirigeres eller beskadige åbningen. Anvend kun et let tryk, når du sætter en spids på, og brug en pipette med en fjederbelastet spidskegle.
- Holde pipetten: Hold ikke pipetten i hånden, mens du venter på centrifugen, cyklus, osv. Indersiden af pipetten vil varme op og få luftpuden til at udvide sig, hvilket resulterer i afvigelser fra det indstillede volumen ved pipettering.
- Forbefugtning: Befugtningen af luften inde i spidsen og pipetten forbereder spidsen til prøven og undgår fordampning ved aspiration af overføringsvolumenet.
- Vertikal aspiration: Dette er meget vigtigt ved håndtering af små volumener for at undgå den kapillære effekt, der opstår, når pipetten holdes i en vinkel.
- Nedsænkningsdybde: Nedsænk spidsen så lidt som muligt for at forhindre, at væske trænger ind i spidsen på grund af kapillæreffekten. Tommelfingerregel: Jo mindre spids og volumen, jo lavere nedsænkningsdybde. Vi anbefaler maksimalt 2 mm ved pipettering af små volumener.
- Dispensering ved 45° vinkel: Optimal udstrømning af væsken er garanteret, når pipetten holdes i en 45° vinkel.
- Kontakt med karvæggen eller væskeoverfladen: Små volumener kan kun dispenseres korrekt, når spidsen holdes mod karvæggen eller nedsænkes i væske. Selv den sidste dråbe fra spidsen kan dispenseres nøjagtigt.
- Udblæsning: En udblæsning er obligatorisk efter dispensering af små mængder for at dispensere selv den sidste dråbe væske i spidsen. Udblæsningen skal også udføres mod karvæggen. Vær forsigtig med ikke at bringe luftbobler ind i prøven, når du udfører en udblæsning på væskeoverfladen.
Indlægstid: 18. februar 2021