Cryovialsyn cael eu defnyddio'n gyffredin ar gyfer storio cryogenig llinellau celloedd a deunyddiau biolegol beirniadol eraill, mewn dewars wedi'u llenwi â nitrogen hylifol.

Mae sawl cam yn gysylltiedig â chadw celloedd yn llwyddiannus mewn nitrogen hylifol. Er bod yr egwyddor sylfaenol yn rhewi'n araf, mae'r union dechneg a ddefnyddir yn dibynnu ar y math o gell a'r cryoprotectant a ddefnyddir. Mae sawl ystyriaeth ddiogelwch ac arferion gorau i'w hystyried wrth storio celloedd ar dymheredd mor isel.

Nod y swydd hon yw rhoi trosolwg o sut mae cryovials yn cael eu storio mewn nitrogen hylifol.

Beth yw cryovials

Mae cryovials yn ffiolau bach, wedi'u capio wedi'u cynllunio ar gyfer storio samplau hylif ar dymheredd isel iawn. Maent yn sicrhau nad yw celloedd sydd wedi'u cadw mewn cryoprotectant yn dod i gysylltiad uniongyrchol â'r nitrogen hylif, gan leihau'r risg o doriadau cellog wrth barhau i elwa o effaith oeri eithafol nitrogen hylifol.

Mae'r ffiolau fel arfer ar gael mewn ystod o gyfrolau a dyluniadau - gallant gael eu edafu yn fewnol neu'n allanol gyda gwaelodion gwastad neu grwn. Mae fformatau di-haint a di-sterile hefyd ar gael.

Pwy sy'n defnyddioCyrofaciali storio celloedd mewn nitrogen hylifol

Mae ystod o GIG a labordai preifat, yn ogystal â sefydliadau ymchwil sy'n arbenigo mewn bancio gwaed llinyn, bioleg celloedd epithelial, imiwnoleg a bioleg bôn -gelloedd yn defnyddio cryovials i gryopreserve celloedd.

Ymhlith y celloedd sydd wedi'u cadw fel hyn mae celloedd B a T, celloedd CHO, coesau hematopoietig a chelloedd progenitor, hybridomas, celloedd berfeddol, macroffagau, coesyn mesenchymal a chelloedd progenitor, monocytau, myeloma, celloedd NK a chelloedd bôn pluripotent.

Trosolwg o sut i storio cryovials mewn nitrogen hylifol

Mae cryopreservation yn broses sy'n cadw celloedd a lluniadau biolegol eraill trwy eu hoeri i dymheredd isel iawn. Gellir storio celloedd mewn nitrogen hylifol am flynyddoedd heb golli hyfywedd celloedd. Mae hwn yn amlinelliad o'r gweithdrefnau a ddefnyddir.

Paratoi celloedd

Bydd yr union ddull ar gyfer paratoi samplau yn amrywio yn dibynnu ar y math o gell, ond yn gyffredinol, mae'r celloedd yn cael eu casglu a'u centrifugio i ddatblygu pelen sy'n llawn celloedd. Yna caiff y belen hon ei hail -wario yn yr uwchnatur wedi'i gymysgu â cryoprotectant neu gyfrwng cryopreservation.

Cyfrwng cryopreservation

Defnyddir y cyfrwng hwn i gadw celloedd yn yr amgylcheddau tymheredd isel y byddant yn destun iddynt trwy atal ffurfio crisialau intra ac allgellog ac felly marwolaeth celloedd. Eu rôl yw darparu amgylchedd diogel, amddiffynnol ar gyfer celloedd a meinweoedd yn ystod y prosesau rhewi, storio a dadmer.

Mae cyfrwng fel plasma wedi'i rewi ffres (FFP), toddiant plasmalyte heparinised neu doddiannau heb serwm, heb gydran anifeiliaid yn gymysg â cryoprotectants fel sylffocsid dimethyl (DMSO) neu glyserol.

Mae'r belen sampl wedi'i hail-hylifedig wedi'i aliquotio i mewn i cryovials polypropylen felCwmni Biofeddygol Suzhou Ace Vials Storio Cryogenig.

Mae'n bwysig peidio â gorlenwi'r cryovials gan y bydd hyn yn cynyddu'r risg o gracio a rhyddhau'r cynnwys posibl (1).

Cyfradd rhewi dan reolaeth

Yn gyffredinol, defnyddir cyfradd rewi a reolir yn araf ar gyfer cryopreservation celloedd yn llwyddiannus.

Ar ôl i samplau gael eu aliquotio i mewn i ffiolau cryogenig, fe'u gosodir ar rew gwlyb neu mewn oergell 4 ℃ a chychwynir ar y weithdrefn rewi o fewn 5 munud. Fel canllaw cyffredinol, mae celloedd yn cael eu hoeri ar gyfradd o -1 i -3 y funud (2). Cyflawnir hyn gan ddefnyddio peiriant oeri rhaglenadwy neu trwy osod ffiolau mewn blwch wedi'i inswleiddio wedi'i osod mewn rhewgell cyfradd dan reolaeth –70 ° C i –90 ° C.

Trosglwyddo i nitrogen hylif

Yna trosglwyddir y ffiolau cryogenig wedi'u rhewi i danc nitrogen hylifol am gyfnodau amhenodol ar yr amod bod tymheredd o lai na -135 ℃ yn cael ei gynnal.

Gellir cael y tymereddau ultra-isel hyn trwy drochi yn y nitrogen cam hylif neu anwedd.

Cyfnod hylif neu anwedd?

Gwyddys bod storio mewn nitrogen cyfnod hylifol yn cynnal y tymheredd oer gyda chysondeb llwyr, ond yn aml nid yw'n cael ei argymell am y rhesymau canlynol:

• Yr angen am gyfeintiau mawr (dyfnder) o nitrogen hylif sy'n berygl posibl. Mae llosgiadau neu asphyxiation oherwydd hyn yn risg wirioneddol.
• Mae asiantau heintus fel asiantau heintus fel Aspergillus, hep B a firaol wedi'u toddi trwy'r cyfrwng nitrogen hylifol (2,3) (2,3) yn lledaenu trwy'r cyfrwng nitrogen hylifol (2,3)
• Y potensial i nitrogen hylif ollwng i'r ffiolau wrth drochi. Pan gaiff ei symud o'i storio a'i gynhesu i dymheredd yr ystafell, mae'r nitrogen yn ehangu'n gyflym. O ganlyniad, gall y ffiol chwalu wrth ei dynnu o storio nitrogen hylifol, gan greu perygl o falurion hedfan ac amlygiad i'r cynnwys (1, 4).

Am y rhesymau hyn, mae storio tymheredd uwch-isel yn fwyaf cyffredin mewn nitrogen cyfnod anwedd. Pan fydd yn rhaid storio samplau yn y cyfnod hylif, dylid defnyddio tiwbiau cryoflex arbenigol.

Yr anfantais i'r cyfnod anwedd yw y gall graddiant tymheredd fertigol ddigwydd gan arwain at amrywiadau tymheredd rhwng -135 ℃ a -190 ℃. Mae hyn yn gofyn am fonitro gofalus a diwyd o'r lefelau nitrogen hylif ac amrywiadau tymheredd (5).

Mae llawer o weithgynhyrchwyr yn argymell bod cryovials yn addas i'w storio i lawr i -135 ℃ neu i'w defnyddio yn y cyfnod anwedd yn unig.

Dadmer eich celloedd cryopreserved

Mae'r weithdrefn dadmer yn straen ar gyfer diwylliant wedi'i rewi, ac mae angen trin a thechneg yn iawn i sicrhau'r hyfywedd gorau posibl, adferiad ac ymarferoldeb y celloedd. Bydd yr union brotocolau dadmer yn dibynnu ar fathau penodol o gelloedd. Fodd bynnag, mae dadmer cyflym yn cael ei ystyried yn safonol i:

• Lleihau unrhyw effaith ar adferiad cellog
• Helpu i leihau'r amser amlygiad i'r hydoddion sy'n bresennol yn y cyfryngau rhewi
• Lleihau unrhyw ddifrod trwy ail -fewnosod iâ

Defnyddir baddonau dŵr, baddonau gleiniau, neu offerynnau awtomataidd arbenigol yn gyffredin i ddadmer samplau.

Yn fwyaf aml mae 1 llinell gell yn cael ei dadmer ar y tro am 1-2 munud, trwy chwyrlïo'n ysgafn mewn baddon dŵr 37 ℃ nes bod ychydig bach o rew ar ôl yn y ffiol cyn iddynt gael eu golchi mewn cyfrwng twf wedi'i gynhesu.

Ar gyfer rhai celloedd fel embryonau mamalaidd, mae cynhesu araf yn hanfodol ar gyfer eu goroesiad.

Mae'r celloedd bellach yn barod ar gyfer diwylliant celloedd, ynysu celloedd, neu yn achos bôn -gelloedd haematopoietig - astudiaethau hyfywedd i warantu cyfanrwydd bôn -gelloedd y rhoddwr cyn therapi myeloablative.

Mae'n arfer arferol cymryd aliquotiau bach o'r sampl wedi'i golchi ymlaen llaw a ddefnyddir i berfformio cyfrif celloedd i bennu crynodiadau celloedd ar gyfer platio mewn diwylliant. Yna gallwch chi asesu canlyniadau gweithdrefnau ynysu celloedd a phenderfynu ar hyfywedd celloedd.

Arferion gorau ar gyfer storio cryovials

Mae cryopreservation llwyddiannus samplau sy'n cael eu storio mewn cryovials yn dibynnu ar lawer o elfennau yn y protocol gan gynnwys storio a chadw cofnodion yn iawn.

• Hollti celloedd rhwng lleoliadau storio- Os yw cyfeintiau'n caniatáu, hollti celloedd rhwng ffiolau a'u storio mewn lleoliadau ar wahân i leihau'r risg o golli sampl oherwydd methiannau offer.
• Atal croeshalogi-Dewiswch ffiolau cryogenig di-haint un defnydd neu awtoclaf cyn eu defnyddio wedi hynny
• Defnyddiwch ffiolau maint priodol ar gyfer eich celloedd- Mae ffiolau yn dod mewn ystod o gyfrolau rhwng 1 a 5mls. Osgoi gorlenwi ffiolau i leihau'r risg o gracio.
• Dewiswch ffiolau cryogenig mewnol neu allanol- Mae ffiolau wedi'u edafu'n fewnol yn cael eu hargymell gan rai prifysgolion ar gyfer mesurau diogelwch - gallant hefyd atal halogiad wrth eu llenwi neu wrth eu storio yn y nitrogen hylifol.
• Atal gollyngiadau-Defnyddiwch forloi bi-chwistrelliad wedi'u mowldio i'r cap sgriw neu'r modrwyau O i atal gollwng a halogi.
• Defnyddiwch godau bar 2D a ffiolau labelu- Er mwyn sicrhau olrhain, mae ffiolau ag ardaloedd ysgrifennu mawr yn galluogi pob ffiol i gael ei labelu'n ddigonol. Gall codau bar 2D helpu gyda rheoli storio a chadw cofnodion. Mae capiau wedi'u codio â lliw yn ddefnyddiol ar gyfer adnabod yn haws.
• Cynnal a chadw storio digonol- Er mwyn sicrhau na chollir celloedd, dylai llongau storio fonitro'r tymheredd a'r lefelau nitrogen hylif yn gyson. Dylid gosod larymau i rybuddio defnyddwyr gwallau.

Rhagofalon diogelwch

Mae nitrogen hylif wedi dod yn arfer cyffredin mewn ymchwil fodern ond mae ganddo'r risg o anaf difrifol os caiff ei ddefnyddio'n anghywir.

Dylid gwisgo offer amddiffynnol personol cywir (PPE) i leihau'r risg o frostbite, llosgiadau a digwyddiadau niweidiol eraill wrth drin nitrogen hylifol. Threuliasant

• Menig Cryogenig
• Labordy
• Tarian wyneb llawn sy'n gwrthsefyll effaith sydd hefyd yn gorchuddio'r gwddf
• Esgidiau toe caeedig
• Ffedog blastig gwrth -sblash

Dylid gosod oergelloedd nitrogen hylifol mewn ardaloedd sydd wedi'u hawyru'n dda i leihau'r risg o asphyxiation-mae nitrogen yn dianc yn anweddu ac yn dadleoli ocsigen atmosfferig. Dylai fod gan siopau cyfaint mawr systemau larwm ocsigen isel.

Mae gweithio mewn parau wrth drin nitrogen hylifol yn ddelfrydol a dylid gwahardd ei ddefnydd y tu allan i oriau gwaith arferol.

Cryovials i gefnogi'ch llif gwaith

Mae Cwmni Biofeddygol Suzhou Ace yn cynnig dewis eang o gynhyrchion sy'n diwallu'ch anghenion cryopreservation ar gyfer gwahanol fathau o gelloedd. Mae'r portffolio yn cynnwys ystod o diwbiau yn ogystal ag ystod o gryovials di -haint.

Ein cryovials yw:

• Cap sgriw labordy 0.5ml 1.5ml 2.0ml ffiolau cryogenig cryogenig cryotube gwaelod conigol gyda gasged

  ● 0.5ml, 1.5ml, manyleb 2.0ml, gyda sgert neu heb sgert
  ● Mae dyluniad conigol neu hunan-sefyll, di-haint neu ddi-sterile ar gael
  ● Gwneir tiwbiau cap sgriw o polypropylen gradd feddygol
  ● Gellir rhewi a dadmer ffiolau cryotube pp dro ar ôl tro
  ● Gall dyluniad y cap allanol leihau'r tebygolrwydd halogi yn ystod triniaeth sampl.
  ● Tiwbiau cryogenig cap sgriw edafedd sgriw cyffredinol i'w defnyddio
  ● Tiwbiau sy'n ffitio rotorau mwyaf cyffredin
  ● Tiwb O-Ring Tiwb Cryogenig Ffit Safon 1 fodfedd a 2 fodfedd, 48well, 81well ， 96well a blychau rhewgell 100well
  ● Autoclavable i 121 ° C a rhewadwy i -86 ° C.

  Rhan Na	Materol	Nghyfrol	CapioLliwiff	Pcs/Fagia ’	Bagiau/Achos
  Act05-bl-n	PP	0.5ml	Du, melyn, glas, coch, porffor, gwyn	500	10
  Act15-bl-n	PP	1.5ml	Du, melyn, glas, coch, porffor, gwyn	500	10
  Act15-bl-NW	PP	1.5ml	Du, melyn, glas, coch, porffor, gwyn	500	10
  Act20-bl-n	PP	2.0ml	Du, melyn, glas, coch, porffor, gwyn	500	10