Cryofialsyn cael eu defnyddio'n gyffredin ar gyfer storio cryogenig llinellau cell a deunyddiau biolegol hanfodol eraill, mewn dewars llenwi â nitrogen hylifol.

Mae sawl cam yn ymwneud â chadw celloedd mewn nitrogen hylifol yn llwyddiannus. Er mai rhewi'n araf yw'r egwyddor sylfaenol, mae'r union dechneg a ddefnyddir yn dibynnu ar y math o gell a'r cryoprotectant a ddefnyddir. Mae nifer o ystyriaethau diogelwch ac arferion gorau i'w hystyried wrth storio celloedd ar dymheredd mor isel.

Nod y swydd hon yw rhoi trosolwg o sut mae cryovials yn cael eu storio mewn nitrogen hylifol.

Beth yw Cryovials

Mae cryofialau yn ffiolau bach, wedi'u capio, sydd wedi'u cynllunio ar gyfer storio samplau hylif ar dymheredd isel iawn. Maent yn sicrhau nad yw celloedd sydd wedi'u cadw mewn cryoprotectant yn dod i gysylltiad uniongyrchol â'r nitrogen hylifol, gan leihau'r risg o doriadau cellog tra'n dal i elwa o effaith oeri eithafol nitrogen hylifol.

Mae'r ffiolau ar gael fel arfer mewn amrywiaeth o feintiau a dyluniadau - gellir eu edafu'n fewnol neu'n allanol gyda gwaelodion gwastad neu grwn. Mae fformatau di-haint a di-haint ar gael hefyd.

Pwy sy'n DefnyddioCyrovialsi Storio Celloedd mewn Nitrogen Hylif

Mae ystod o labordai GIG a phreifat, yn ogystal â sefydliadau ymchwil sy'n arbenigo mewn bancio gwaed llinyn, bioleg celloedd epithelial, imiwnoleg a bioleg bôn-gelloedd yn defnyddio cryofialau i gadw celloedd cryofial.

Mae celloedd sydd wedi'u cadw yn y modd hwn yn cynnwys Celloedd B a T, Celloedd CHO, Bôn-gelloedd Hematopoietig a Chelloedd Epilydd, Hybridomas, Celloedd Perfeddol, Macrophages, Bôn Mesenchymal a Chelloedd Epilydd, Monocytes, Myeloma, Celloedd NK a Bôn-gelloedd Lluosog.

Trosolwg o Sut i Storio Cryovials mewn Nitrogen Hylif

Mae cryo-gadwraeth yn broses sy'n cadw celloedd a lluniadau biolegol eraill trwy eu hoeri i dymheredd isel iawn. Gellir storio celloedd mewn nitrogen hylifol am flynyddoedd heb golli hyfywedd celloedd. Dyma amlinelliad o'r gweithdrefnau a ddefnyddiwyd.

Paratoi Cell

Bydd yr union ddull ar gyfer paratoi samplau yn amrywio yn dibynnu ar y math o gell, ond yn gyffredinol, mae'r celloedd yn cael eu casglu a'u centrifugio i ddatblygu pelen llawn celloedd. Yna mae'r belen hon yn cael ei hailddarlledu yn y supernatant wedi'i gymysgu â cryoprotectant neu gyfrwng cryopreservation.

Cry-gadwraeth Canolig

Defnyddir y cyfrwng hwn i gadw celloedd yn yr amgylcheddau tymheredd isel y byddant yn destun iddynt trwy atal ffurfio crisialau mewngellol ac allgellog ac felly marwolaeth celloedd. Eu rôl yw darparu amgylchedd diogel, amddiffynnol ar gyfer celloedd a meinweoedd yn ystod y prosesau rhewi, storio a dadmer.

Mae cyfrwng fel plasma ffres wedi'i rewi (FFP), hydoddiant plasmalyte heparineiddio neu doddiannau di-serwm, heb gydrannau anifeiliaid yn cael ei gymysgu â cryoprotectants fel dimethyl sylfocsid (DMSO) neu glyserol.

Mae'r belen sampl wedi'i hail-hylifo yn cael ei rhannu'n cryovialau polypropylen felCwmni Biofeddygol Suzhou Ace Ffiolau Storio Cryogenig.

Mae'n bwysig peidio â gorlenwi'r cryovialau gan y bydd hyn yn cynyddu'r risg o hollti a'r posibilrwydd o ryddhau cynnwys (1).

Cyfradd Rhewi Rheoledig

Yn gyffredinol, defnyddir cyfradd rewi a reolir yn araf ar gyfer cadw celloedd yn llwyddiannus.

Ar ôl i samplau gael eu dosrannu i ffiolau cryogenig, cânt eu gosod ar rew gwlyb neu mewn oergell 4 ℃ a chychwynnir y weithdrefn rewi o fewn 5 munud. Fel canllaw cyffredinol, mae celloedd yn cael eu hoeri ar gyfradd o -1 i -3 y funud (2). Cyflawnir hyn gan ddefnyddio oerach rhaglenadwy neu drwy osod ffiolau mewn blwch wedi'i inswleiddio wedi'i osod mewn rhewgell cyfradd reoledig –70°C i –90°C.

Trosglwyddo i Nitrogen Hylif

Yna trosglwyddir y ffiolau cryogenig wedi'u rhewi i danc nitrogen hylifol am gyfnodau amhenodol ar yr amod bod tymheredd o lai na -135 ℃ yn cael ei gynnal.

Gellir cael y tymereddau hynod isel hyn trwy drochi yn y nitrogen cyfnod hylif neu anwedd.

Cyfnod Hylif neu Anwedd?

Mae'n hysbys bod storio nitrogen cyfnod hylif yn cynnal y tymheredd oer gyda chysondeb llwyr, ond yn aml ni chaiff ei argymell am y rhesymau canlynol:

• Yr angen am symiau mawr (dyfnder) o nitrogen hylifol sy'n berygl posibl. Mae llosgiadau neu fygu oherwydd hyn yn risg wirioneddol.
• Achosion wedi'u dogfennu o groeshalogi gan gyfryngau heintus fel aspergillus, hep B a lledaeniad firaol trwy gyfrwng hylif nitrogen (2,3)
• Y potensial i nitrogen hylifol ollwng i'r ffiolau yn ystod trochi. Pan gaiff ei dynnu o'r storfa a'i gynhesu i dymheredd yr ystafell, mae'r nitrogen yn ehangu'n gyflym. O ganlyniad, gall y ffiol chwalu pan gaiff ei symud o storfa nitrogen hylifol, gan greu perygl o falurion hedfan ac amlygiad i'r cynnwys (1, 4).

Am y rhesymau hyn, mae storio tymheredd uwch-isel yn fwyaf cyffredin mewn nitrogen cyfnod anwedd. Pan fydd yn rhaid storio samplau yn y cyfnod hylif, dylid defnyddio tiwbiau cryoflex arbenigol.

Yr anfantais i'r cyfnod anwedd yw y gall graddiant tymheredd fertigol ddigwydd gan arwain at amrywiadau tymheredd rhwng -135 ℃ a -190 ℃. Mae hyn yn golygu bod angen monitro lefelau nitrogen hylifol ac amrywiadau tymheredd yn ofalus a diwyd (5).

Mae llawer o weithgynhyrchwyr yn argymell bod cryovials yn addas i'w storio hyd at -135 ℃ neu i'w defnyddio yn y cyfnod anwedd yn unig.

Dadmer Eich Celloedd Cryoprededig

Mae'r weithdrefn dadmer yn straen ar ddiwylliant wedi'i rewi, ac mae angen trin a thechneg briodol i sicrhau'r hyfywedd, adferiad ac ymarferoldeb gorau posibl y celloedd. Bydd yr union brotocolau dadmer yn dibynnu ar fathau penodol o gelloedd. Fodd bynnag, ystyrir bod dadmer cyflym yn safonol i:

• Lleihau unrhyw effaith ar adferiad cellog
• Helpwch i leihau'r amser amlygiad i'r hydoddion sy'n bresennol yn y cyfrwng rhewi
• Lleihau unrhyw ddifrod drwy ailgrisialu iâ

Defnyddir baddonau dŵr, baddonau gleiniau, neu offer awtomataidd arbenigol yn gyffredin i ddadmer samplau.

Yn fwyaf aml mae 1 llinell gell yn cael ei dadmer ar y tro am 1-2 funud, trwy chwyrlïo'n ysgafn mewn baddon dŵr 37 ℃ nes bod ychydig bach o iâ ar ôl yn y ffiol cyn iddynt gael eu golchi mewn cyfrwng twf wedi'i gynhesu ymlaen llaw.

Ar gyfer rhai celloedd fel embryonau mamalaidd, mae cynhesu araf yn hanfodol er mwyn iddynt oroesi.

Mae'r celloedd bellach yn barod ar gyfer meithriniad celloedd, ynysu celloedd, neu yn achos bôn-gelloedd hematopoietig - astudiaethau hyfywedd i warantu cyfanrwydd bôn-gelloedd y rhoddwr cyn therapi myeloablative.

Mae'n arferol cymryd symiau bach o'r sampl wedi'i olchi ymlaen llaw a ddefnyddir i wneud cyfrif celloedd i bennu crynodiadau celloedd ar gyfer platio mewn meithriniad. Yna gallwch chi asesu canlyniadau gweithdrefnau ynysu celloedd a phennu hyfywedd celloedd.

Arferion Gorau ar gyfer Storio Cryovials

Mae'r gallu i gadw samplau sy'n cael eu cadw mewn cryofialau yn llwyddiannus yn dibynnu ar lawer o elfennau yn y protocol gan gynnwys storio cywir a chadw cofnodion.

• Rhannu celloedd rhwng lleoliadau storio– Os yw cyfeintiau'n caniatáu, holltwch gelloedd rhwng ffiolau a'u storio mewn lleoliadau ar wahân i leihau'r risg o golli sampl oherwydd methiannau offer.
• Atal croeshalogi– Dewiswch ffiolau cryogenig di-haint untro neu awtoclaf cyn eu defnyddio wedyn
• Defnyddiwch ffiolau o faint priodol ar gyfer eich celloedd– mae ffiolau yn dod mewn ystod o gyfeintiau rhwng 1 a 5ml. Osgoi gorlenwi ffiolau i leihau'r risg o gracio.
• Dewiswch ffiolau cryogenig mewnol neu allanol- Mae ffiolau wedi'u edafu'n fewnol yn cael eu hargymell gan rai prifysgolion ar gyfer mesurau diogelwch - gallant hefyd atal halogiad wrth eu llenwi neu wrth eu storio yn y nitrogen hylifol.
• Atal Gollyngiadau- Defnyddiwch seliau deu-chwistrellu wedi'u mowldio i'r cap sgriw neu'r modrwyau O i atal gollwng a halogi.
• Defnyddiwch godau bar 2D a label vials– er mwyn sicrhau olrheinedd, mae ffiolau ag ardaloedd ysgrifennu mawr yn galluogi pob ffiol i gael ei labelu'n ddigonol. Gall codau bar 2D helpu gyda rheoli storio a chadw cofnodion. Mae capiau â chodau lliw yn ddefnyddiol er mwyn eu hadnabod yn haws.
• Cynnal a chadw storio digonol- Er mwyn sicrhau nad yw celloedd yn cael eu colli, dylai llongau storio fonitro'r tymheredd a'r lefelau nitrogen hylif yn gyson. Dylid gosod larymau i rybuddio defnyddwyr am gamgymeriadau.

Rhagofalon Diogelwch

Mae nitrogen hylifol wedi dod yn arfer cyffredin mewn ymchwil fodern ond mae perygl iddo gael anaf difrifol os caiff ei ddefnyddio'n anghywir.

Dylid gwisgo offer amddiffynnol personol priodol (PPE) i leihau'r risg o ewinrhew, llosgiadau a digwyddiadau andwyol eraill wrth drin nitrogen hylifol. Gwisgwch

• Menig cryogenig
• Côt labordy
• Tarian wyneb llawn gwrthsefyll effaith sydd hefyd yn gorchuddio'r gwddf
• Esgidiau bysedd caeedig
• Ffedog blastig gwrth-sblash

Dylid gosod oergelloedd nitrogen hylifol mewn mannau sydd wedi'u hawyru'n dda i leihau'r risg o fygu - mae nitrogen sydd wedi dianc yn anweddu ac yn dadleoli ocsigen atmosfferig. Dylai fod gan storfeydd cyfaint mawr systemau larwm ocsigen isel.

Mae gweithio mewn parau wrth drin nitrogen hylifol yn ddelfrydol a dylid gwahardd ei ddefnyddio y tu allan i oriau gwaith arferol.

Cryovials i Gefnogi Eich Llif Gwaith

Mae cwmni Suzhou Ace Biomedical yn cynnig dewis eang o gynhyrchion sy'n cwrdd â'ch anghenion cryopreservation ar gyfer gwahanol fathau o gelloedd. Mae'r portffolio'n cynnwys ystod o diwbiau yn ogystal ag amrywiaeth o griofials di-haint.

Ein cryovials yw:

• Cap Sgriw Lab 0.5mL 1.5mL 2.0mL Ffiolau Cryogenig Cryofaidd Cryotiwb Gwaelod Conigol gyda Gasged

  ● Manyleb 0.5ml, 1.5ml, 2.0ml, gyda sgert neu heb sgert
  ● Mae dyluniad conigol neu hunan-sefyll, di-haint neu ddi-haint ar gael
  ● Mae tiwbiau cap sgriw wedi'u gwneud o polypropylen gradd feddygol
  ● Gellir rhewi a dadmer Vials PP Cryotube dro ar ôl tro
  ● Gall dyluniad y cap allanol leihau'r tebygolrwydd o halogiad yn ystod triniaeth sampl.
  ● Tiwbiau cryogenig cap sgriwio Edau sgriw cyffredinol i'w defnyddio
  ● Mae tiwbiau'n ffitio'r rotorau mwyaf cyffredin
  ● Mae tiwbiau o-ring tiwb cryogenig yn ffitio blychau rhewgell safonol 1-modfedd a 2-modfedd, 48well, 81well，96well a 100well
  ● Gellir ei awtoclafu i 121°C a'i rewi i -86°C

  RHAN RHIF	DEUNYDD	CYFROL	CAPLLIWIAU	PCS/BAG	BAGIAU/ACHOS
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	Du, Melyn, Glas, Coch, Porffor, Gwyn	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	Du, Melyn, Glas, Coch, Porffor, Gwyn	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	Du, Melyn, Glas, Coch, Porffor, Gwyn	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	Du, Melyn, Glas, Coch, Porffor, Gwyn	500	10