Mae safoni prosesau yn cynnwys eu optimeiddio a'u sefydlu a'u cysoni dilynol, gan ganiatáu perfformiad gorau posibl tymor hir-yn annibynnol ar y defnyddiwr. Mae safoni yn sicrhau canlyniadau o ansawdd uchel, yn ogystal â'u atgynyrchioldeb a'u cymaroldeb.
Nod PCR (clasurol) yw cynhyrchu canlyniad dibynadwy ac atgynyrchiol. Ar gyfer rhai ceisiadau, cynnyrch yCynnyrch PCRhefyd yn berthnasol. Ar gyfer yr ymatebion hyn, rhaid cymryd gofal i sicrhau nad yw samplau yn cael eu peryglu a bod llif gwaith PCR yn parhau i fod yn sefydlog. Yn benodol, mae hyn yn cyfieithu i leihau cyflwyno halogiadau a allai arwain at ganlyniadau ffug positif neu ffug negyddol neu hyd yn oed atal yr adwaith PCR. At hynny, dylai'r amodau adweithio fod mor union yr un fath â phosibl ar gyfer pob sampl unigol o fewn rhediad a hefyd yn drosglwyddadwy i adweithiau dilynol (o'r un dull). Mae hyn yn cyfeirio at gyfansoddiad yr adweithiau yn ogystal ag at y math o reolaeth tymheredd yn y beiciwr. Mae gwallau defnyddwyr, wrth gwrs, i'w hosgoi cymaint â phosibl.
Isod, byddwn yn dangos yr heriau y deuir ar eu traws wrth baratoi a thrwy gydol rhediad PCR - a'r dulliau o atebion sy'n bodoli mewn perthynas ag offerynnau a nwyddau traul a ddefnyddir i safoni llifoedd gwaith PCR.
Paratoi ymateb
Mae dosbarthu cydrannau adweithio i mewn i PCR-longs, neu blatiau, yn y drefn honno, yn cynnwys sawl her y mae'n rhaid eu goresgyn:
Amodau ymateb
Mae dosio union a manwl gywir y cydrannau unigol yn anhepgor wrth anelu at yr amodau ymateb mwyaf union yr un fath bosibl. Yn ogystal â thechneg pibetio dda, mae'n hollbwysig dewis yr offeryn cywir. Mae cymysgeddau meistr PCR yn aml yn cynnwys sylweddau sy'n cynyddu gludedd neu'n cynhyrchu ewyn. Yn ystod y broses bibetio, mae'r rhain yn arwain at wlychu'rAwgrymiadau pibed, a thrwy hynny leihau cywirdeb pibetio. Gall defnyddio systemau dosbarthu uniongyrchol neu awgrymiadau pibed amgen sy'n llai tueddol o wlychu wella cywirdeb a manwl gywirdeb y broses bibetio.
Halogiadau
Yn ystod y broses ddosbarthu, cynhyrchir erosolau a all, os caniateir iddynt gyrraedd y tu mewn i'r pibed, halogi sampl arall yn ystod y cam pibetio nesaf. Gellir atal hyn trwy ddefnyddio awgrymiadau hidlo neu systemau dadleoli uniongyrchol.
Nwyddau traul felawgrymiadau, rhaid i gychod a phlatiau a ddefnyddir yn y llif gwaith PCR gynnwys sylweddau sy'n peryglu'r sampl neu'n ffugio'r canlyniad. Mae'r rhain yn cynnwys DNA, DNases, RNases ac atalyddion PCR, yn ogystal â chydrannau a allai o bosibl drwytholchi o'r deunydd yn ystod yr adwaith - sylweddau a elwir yn drwytholchion.
Gwall defnyddiwr
Po fwyaf o samplau sy'n cael eu prosesu, yr uchaf yw'r risg gwall. Gall ddigwydd yn hawdd bod sampl yn cael ei phibedio i'r llong anghywir neu'r ffynnon anghywir. Gellir lleihau'r risg hon yn sylweddol trwy farcio'r ffynhonnau yn hawdd. Trwy awtomeiddio camau dosbarthu, mae'r “ffactor dynol”, hy, gwallau ac amrywiadau sy'n gysylltiedig â defnyddwyr, yn cael eu lleihau i'r eithaf, gan gynyddu atgynyrchioldeb, yn enwedig yn achos cyfeintiau adweithio bach. Mae hyn yn ei gwneud yn ofynnol i blatiau o sefydlogrwydd dimensiwn digonol gael ei ddefnyddio mewn gweithfan. Mae codau bar ynghlwm yn darparu darllenadwyedd peiriant ychwanegol, sy'n symleiddio olrhain sampl trwy gydol y broses gyfan.
Rhaglennu'r thermocycler
Gall rhaglennu offeryn fod yn cymryd llawer o amser yn ogystal â bod yn dueddol o gamgymeriad. Mae gwahanol nodweddion beiciwr thermol PCR yn gweithio gyda'i gilydd i symleiddio'r cam proses hwn ac, yn bwysicaf oll, i'w gwneud yn ddiogel:
Mae gweithrediad hawdd ac arweiniad defnyddwyr da yn sail i raglennu effeithlon. Gan adeiladu ar y sylfaen hon, bydd gweinyddiaeth defnyddwyr a ddiogelir gan gyfrinair yn atal eich rhaglenni eich hun rhag cael eu newid gan ddefnyddwyr eraill. Os yw sawl beiciwr (o'r un math) yn cael eu defnyddio, mae'n fuddiol os gellir trosglwyddo rhaglen yn uniongyrchol o un offeryn i un arall trwy USB neu gysylltedd. Mae meddalwedd gyfrifiadurol yn galluogi gweinyddu rhaglenni, hawliau defnyddwyr a dogfennau yn ganolog a diogel ar gyfrifiadur.
Rhedeg PCR
Yn ystod y rhediad, mae DNA yn cael ei chwyddo yn y llong adweithio, lle dylai pob sampl fod yn destun amodau ymateb union yr un fath, gyson. Mae'r agweddau canlynol yn berthnasol ar gyfer y broses:
Rheolaeth tymheredd
Cywirdeb rhagorol wrth reoli tymheredd a homogenedd y bloc beiciwr yw'r sylfaen ar gyfer cyflyru tymheredd hyd yn oed yr holl samplau. Ansawdd uchel yr elfennau gwresogi ac oeri (elfennau peltier), yn ogystal â'r ffordd y mae'r rhain wedi'u cysylltu â'r bloc, yw'r ffactorau penderfynu a fydd yn pennu'r risg o anghysondebau tymheredd a elwir yn “effaith ymyl”
Anweddiad
Ni ddylai crynodiadau'r cydrannau adweithio unigol newid yn ystod yr adwaith oherwydd anweddiad. Fel arall, mae'n bosibl ychydig iawnCynnyrch PCRgellir ei gynhyrchu, neu ddim o gwbl. Felly mae'n hanfodol lleihau anweddiad trwy sicrhau sêl ddiogel. Yn yr achos hwn, mae caead gwresog y thermocycler a sêl y llong yn gweithio law yn llaw. Mae gwahanol opsiynau selio ar gael ar gyferPlatiau PCR (Dolen: Erthygl Selio), lle cyflawnir y sêl orau trwy selio gwres. Gall cau eraill hefyd fod yn addas, cyhyd â bod pwysau cyswllt caead y beiciwr yn cael ei addasu i'r sêl a ddewiswyd.
Mae safoni prosesau ar waith er mwyn diogelu canlyniadau cywir ac atgynyrchiol yn y tymor hir. Mae hyn yn cynnwys cynnal a chadw'r offer yn rheolaidd i sicrhau ei fod bob amser mewn cyflwr gweithio da. Dylai pob nwyddau traul fod o ansawdd uchel yn gyson ar draws yr holl lotiau a gynhyrchir, a rhaid gwarantu eu hargaeledd dibynadwy.
Amser Post: Tach-29-2022