Mae safoni prosesau yn cynnwys eu hoptimeiddio a sefydlu a chysoni dilynol, gan ganiatáu perfformiad gorau posibl yn y tymor hir - yn annibynnol ar y defnyddiwr. Mae safoni yn sicrhau canlyniadau o ansawdd uchel, yn ogystal â'u hatgynhyrchu a'u cymharu.
Nod PCR (clasurol) yw cynhyrchu canlyniad dibynadwy ac atgynhyrchadwy. Ar gyfer ceisiadau penodol, mae cynnyrch ycynnyrch PCRyn berthnasol hefyd. Ar gyfer yr adweithiau hyn, rhaid cymryd gofal i sicrhau nad yw samplau'n cael eu peryglu a bod y llif gwaith PCR yn aros yn sefydlog. Yn benodol, mae hyn yn gyfystyr â lleihau cyflwyno halogiadau a allai arwain at ganlyniadau positif ffug neu negyddol ffug neu hyd yn oed atal yr adwaith PCR. At hynny, dylai amodau'r adwaith fod mor union yr un fath â phosibl ar gyfer pob sampl unigol o fewn rhediad a hefyd fod yn drosglwyddadwy i adweithiau dilynol (o'r un dull). Mae hyn yn cyfeirio at gyfansoddiad yr adweithiau yn ogystal â'r math o reolaeth tymheredd yn y beiciwr. Mae gwallau defnyddwyr, wrth gwrs, i'w hosgoi cymaint â phosibl.
Isod, byddwn yn dangos yr heriau a wynebir wrth baratoi a thrwy gydol rhediad PCR - a'r ymagweddau at atebion sy'n bodoli o ran yr offer a'r nwyddau traul a ddefnyddir i safoni llifoedd gwaith PCR.
Paratoi adwaith
Mae dosbarthu cydrannau adwaith i lestri PCR, neu blatiau, yn y drefn honno, yn cynnwys heriau lluosog y mae'n rhaid eu goresgyn:
Amodau ymateb
Mae dosio union a manwl gywir y cydrannau unigol yn anhepgor wrth anelu at yr amodau adwaith mwyaf unfath posibl. Yn ogystal â thechneg pibio dda, mae dewis yr offeryn cywir yn hollbwysig. Mae prif gymysgeddau PCR yn aml yn cynnwys sylweddau sy'n cynyddu gludedd neu'n cynhyrchu ewyn. Yn ystod y broses pibio, mae'r rhain yn arwain at wlychu sylweddol o'rawgrymiadau pibed, gan leihau cywirdeb pibio. Gall defnyddio systemau dosbarthu uniongyrchol neu awgrymiadau pibed amgen sy'n llai tueddol o wlychu wella cywirdeb a manwl gywirdeb y broses bibio.
Halogiadau
Yn ystod y broses ddosbarthu, cynhyrchir aerosolau a all, os caniateir iddynt gyrraedd y tu mewn i'r pibed, halogi sampl arall yn ystod y cam pibio nesaf. Gellir atal hyn trwy ddefnyddio awgrymiadau ffilter neu systemau dadleoli uniongyrchol.
Nwyddau traul megisawgrymiadau, rhaid i lestri a phlatiau a ddefnyddir yn y llif gwaith PCR beidio â chynnwys sylweddau sy'n peryglu'r sampl neu'n ffugio'r canlyniad. Mae’r rhain yn cynnwys atalyddion DNA, DNases, RNases ac PCR, yn ogystal â chydrannau a allai drwytholchi o’r defnydd yn ystod yr adwaith – sylweddau a elwir yn drwytholchadwy.
Gwall defnyddiwr
Po fwyaf o samplau sy'n cael eu prosesu, yr uchaf yw'r risg o gamgymeriadau. Gall ddigwydd yn hawdd bod sampl yn cael ei bibedu i'r llestr anghywir neu'r ffynnon anghywir. Gellir lleihau'r risg hon yn sylweddol trwy farcio'r ffynhonnau yn hawdd. Trwy awtomeiddio'r camau dosbarthu, mae'r “ffactor dynol”, hy gwallau ac amrywiadau sy'n gysylltiedig â defnyddwyr, yn cael eu lleihau, gan gynyddu atgynhyrchu, yn enwedig yn achos cyfeintiau adwaith bach. Mae hyn yn gofyn am blatiau o sefydlogrwydd dimensiwn digonol i'w defnyddio mewn gweithfan. Mae codau bar atodedig yn darparu darllenadwyedd peiriant ychwanegol, sy'n symleiddio olrhain sampl trwy gydol y broses gyfan.
Rhaglennu'r thermocycler
Gall rhaglennu offeryn gymryd llawer o amser yn ogystal â chamgymeriadau. Mae gwahanol nodweddion seiclwyr thermol PCR yn gweithio gyda'i gilydd i symleiddio'r cam proses hwn ac, yn bwysicaf oll, i'w wneud yn ddiogel:
Gweithrediad hawdd ac arweiniad da i ddefnyddwyr yw sail rhaglennu effeithlon. Gan adeiladu ar y sylfaen hon, bydd gweinyddiaeth defnyddwyr a ddiogelir gan gyfrinair yn atal eich rhaglenni eich hun rhag cael eu newid gan ddefnyddwyr eraill. Os defnyddir beicwyr lluosog (o'r un math), mae'n fuddiol os gellir trosglwyddo rhaglen yn uniongyrchol o un offeryn i'r llall trwy USB neu gysylltedd. Mae meddalwedd cyfrifiadurol yn galluogi gweinyddiaeth ganolog a diogel o raglenni, hawliau defnyddwyr a dogfennau ar gyfrifiadur.
rhediad PCR
Yn ystod y rhediad, caiff DNA ei chwyddo yn y llestr adwaith, lle dylai pob sampl fod yn destun amodau adwaith unfath, gyson. Mae’r agweddau canlynol yn berthnasol i’r broses:
Rheoli tymheredd
Cywirdeb rhagorol mewn rheoli tymheredd a homogenedd y bloc beiciwr yw'r sail ar gyfer cyflyru tymheredd cyfartal pob sampl. Ansawdd uchel yr elfennau gwresogi ac oeri (elfennau peltier), yn ogystal â'r ffordd y mae'r rhain wedi'u cysylltu â'r bloc, yw'r ffactorau penderfynu a fydd yn pennu'r risg o anghysondebau tymheredd a elwir yn "effaith ymyl"
Anweddiad
Ni ddylai crynodiadau cydrannau unigol yr adwaith newid yn ystod yr adwaith oherwydd anweddiad. Fel arall, mae'n bosibl mai ychydig iawncynnyrch PCRgellir ei gynhyrchu, neu ddim o gwbl. Felly mae'n hanfodol lleihau anweddiad trwy sicrhau sêl ddiogel. Yn yr achos hwn, mae caead gwresog y thermocwlydd a sêl y llong yn gweithio law yn llaw. Mae gwahanol opsiynau selio ar gael ar gyferPlatiau PCR (dolen: Erthygl selio), lle cyflawnir y sêl orau trwy selio gwres. Gall cau eraill fod yn addas hefyd, cyn belled ag y gellir addasu pwysau cyswllt caead y beiciwr i'r sêl a ddewiswyd.
Mae safoni prosesau ar waith er mwyn diogelu canlyniadau cywir ac atgynhyrchadwy yn y tymor hir. Mae hyn yn cynnwys cynnal a chadw'r offer yn rheolaidd i sicrhau ei fod bob amser mewn cyflwr gweithio da. Dylai’r holl nwyddau traul fod o ansawdd cyson uchel ar draws yr holl lotiau a gynhyrchir, a rhaid gwarantu eu bod ar gael yn ddibynadwy.
Amser postio: Tachwedd-29-2022