Když objem pipety od 0,2 do 5 µl, přesnost a přesnost pipety je nanejvýš důležitá, je dobrá technika pipety nezbytná, protože chyby zacházení s malými objemy jsou zřejmá.
Vzhledem k tomu, že se více zaměřuje na snižování činidel a nákladů, jsou menší objemy velmi poptány, např. Pro přípravu PCR Mastermix nebo enzymových reakcí. Ale pipety malé objemy od 0,2 - 5 µl nastaví nové výzvy pro přesnost a přesnost pipetů. Následující body jsou nezbytné:
- Velikost Pipette a TIP: Vždy si vyberte pipetu s nejnižší nominální objem a nejmenší špičkou, abyste udrželi vzduchový polštář co nejmenší. Při pipetu 1 ul EG vyberte spíše pipetu 0,25 - 2,5 ul a shodovací špičku než 1 - 10 µl pipety.
- Kalibrace a údržba: Je nezbytné, aby byly vaše pipety správně kalibrovány a udržovány. Malé úpravy a rozbité části na pipetě vedou k masivnímu zvýšení systematických a náhodných chyb. Kalibrace podle ISO 8655 musí být provedena jednou ročně.
- Pipety pozitivního přemístění: Zkontrolujte, zda máte ve své laboratoři nízký rozsah objemu s nízkým objemovým rozsahem. Obecně platí, že použití tohoto typu pipety vede k lepšímu výsledku pipety jako přesnost a přesnost než u klasických vzduchových polštářů.
- Zkuste použít větší objemy: můžete zvážit zředění vzorku na pipetu větší objemy se stejným množstvím v konečné reakci. To může snížit chyby pipety s velmi malými objemy vzorku.
Kromě dobrého nástroje musí mít výzkumník velmi dobrou techniku pipetování. Zvláštní pozornost věnujte následujícím krokům:
- Připevnění k špičce: Nezařízněte pipetu na špičku, protože to může poškodit konec jemného špičky, což způsobí, že kapalný paprsek bude přesměrován nebo poškodí otvor. Při připevňování špičky aplikujte pouze tlak a použijte pipetu s kuželem na špičce.
- Držení pipety: Nedržte pipetu v ruce, zatímco čekáte na odstředivou, cyklir atd. Vnitřek pipety se zahřeje a povede vzduchový polštář, aby se rozšířil, což má za následek odchylky od objemu sady při pipetu.
- Předběhnutí: Zvlhčení vzduchu uvnitř špičky a pipeta připravuje špičku pro vzorek a při aspirování objemu přenosu se vyhýbá odpařování.
- Vertikální aspirace: To je velmi důležité při manipulaci s malými objemy, aby se zabránilo kapilárnímu účinku, ke kterému dochází, když je pipeta držena pod úhlem.
- Hloubka ponoření: Ponořte špičku co nejméně, aby se zabránilo vstupu kapaliny do špičky kvůli kapilárnímu účinku. Pravidlo: Čím menší je špička a objem, tím nižší je hloubka ponoření. Při pipetování malých objemu doporučujeme maximálně 2 mm.
- Výdej při úhlu 45 °: Optimální průtok kapaliny je zaručen, když je pipeta držena pod úhlem 45 °.
- Kontakt na stěnu nádoby nebo povrchu kapaliny: Malé objemy lze řádně vydávat pouze tehdy, když je špička držena proti stěně nádoby nebo ponořena do kapaliny. Dokonce i poslední pokles ze špičky lze přesně vydávat.
- Blow-out: Blow-out je povinný po vydávání nízkých objemů, aby se vydal i poslední kapku kapaliny přítomné na špičce. Blow-out by měl být také proveden proti stěně plavidla. Při provádění vyfukování na povrchu kapaliny bubliny nepřinášejí do vzorku vzduchové bubliny.
Čas příspěvku: únor 18-2021