Per riazzioni di amplificazione riescita, hè necessariu chì i cumpunenti di reazzione individuale sò prisenti in a cuncentrazione curretta in ogni preparazione. Inoltre, hè impurtante chì ùn ci hè micca contaminazione.
In particulare quandu parechje reazzioni anu da esse stallate, hè statu stabilitu per preparà un mischju chjamatu maestru invece di pipetting ogni reagentu separatamente in ogni recipiente. I mischi pre-configurati sò dispunibuli cummerciale, in quale solu cumpunenti specifichi di mostra (primer) è acqua sò aghjuntu. In alternativa, u mischju maestru pò esse preparatu da sè stessu. In e duie varianti, a mistura hè distribuita à ogni recipiente PCR senza un mudellu è a mostra di DNA individuale hè aghjuntu separatamente à a fine.
L'usu di un mischju maestru hà parechji vantaghji: Prima, u numeru di passi di pipetting hè ridutta. In questu modu, u risicu di l'errore di l'utilizatori durante u pipetting è u risicu di contaminazione sò minimizati è, sicuru, u tempu hè salvatu. In principiu, a precisione di pipetting hè ancu più altu, postu chì volumi più grande sò dosati. Questu hè faciule da capisce quandu si cuntrolla i dati tecnichi di pipette: u più chjucu u voluminu dosed, u più altu i deviazioni ponu esse . U fattu chì tutti i preparati venenu da u stessu vasu hà un effettu pusitivu nantu à l'homogeneità (s'ellu hè bè mischju). Questu ancu migliurà a riproducibilità di l'esperimenti.
Quandu si preparanu a mistura maestra, almenu 10% di u voluminu extra deve esse aghjuntu (per esempiu, se 10 preparazioni sò necessarii, calculate nantu à a basa di 11), perchè ancu l'ultimu vasu si riempia bè. In questu modu, l'imprecisioni di pipetting (ligeru) è l'effettu di a perdita di campionu in a dose di suluzione chì cuntenenu detergenti ponu esse compensati. I detergenti sò cuntenuti in suluzioni enzimatiche cum'è polimerasi è mischi maestri, chì causanu a furmazione di schiuma è residui nantu à a superficia interna di u normale.punte di pipette.
Sicondu l'applicazione è u tipu di liquidu per esse dispensatu, a tecnica di pipetting curretta (1) deve esse scelta è l'equipaggiu adattatu. Per suluzioni chì cuntenenu detergenti, un sistema di spustamentu direttu o i cosiddetti puntali di pipette "bassa ritenzione" cum'è alternativa per i pipette à cuscinetti d'aria sò cunsigliati. L'effettu dipunta di ACE PIPETTEsi basa su una superficie particolarmente idrofoba. I liquidi chì cuntenenu detergenti ùn lascianu micca una film residuale in l'internu è l'esternu, perchè a perdita di suluzione pò esse minimizzata.
In più di a dosa esatta di tutti i cumpunenti, hè ancu impurtante chì ùn ci hè micca contaminazione di e preparazione. Ùn hè micca abbastanza per aduprà consumabili d'alta purezza, perchè u prucessu di pipetting in una pipette à cuscinettu d'aria pò pruduce aerosols chì restanu in a pipetta. L'ADN chì pò esse cuntenutu in l'aerosol pò esse trasferitu da una mostra à l'altru in u prossimu passu di pipetting è cusì porta à a contaminazione. I sistemi di spustamentu direttu sopra citati ponu ancu minimizzà stu risicu. Per i pipette à cuscinetti d'aria, hè sensu di utilizà punte di filtru per prutege u cone di pipette mantenendu splashes, aerosols è biomolecules.
Tempu di Postu: Dec-06-2022