Criovialisò cumunimenti usati per l'almacenamiento criogenicu di e linee cellulari è altri materiali biologichi critichi, in dewar pieni di nitrogenu liquidu.

Ci hè parechje tappe implicate in a preservazione successu di e cellule in nitrogenu liquidu. Mentre chì u principiu di basa hè una congelazione lenta, a tecnica esatta impiegata dipende da u tipu di cellula è u crioprotettore utilizatu. Ci hè parechje cunsiderazioni di sicurità è e migliori pratiche per piglià in contu quandu si almacenanu e cellule à una temperatura cusì bassa.

Stu articulu hà da scopu di dà una visione generale di cumu i crioviali sò almacenati in nitrogenu liquidu.

Chì sò i Cryovials

I crioviali sò fialetti chjuchi, tappi pensati per almacenà campioni liquidi à temperature estremamente basse. Assicuranu chì e cellule cunsirvate in crioprotettante ùn entranu in cuntattu direttu cù u nitrogenu liquidu, minimizendu u risicu di fratture cellulari mentre prufittanu ancu di l'effettu di rinfrescante estremu di u nitrogenu liquidu.

I vials sò generalmente dispunibuli in una varietà di volumi è disinni - ponu esse filati internu o esternu cù fondu flat o arrotondati. I furmati sterili è micca sterili sò ancu dispunibili.

Chi usaCyrovialsper almacenà e cellule in azotu liquidu

Una gamma di laboratori NHS è privati, è ancu istituzioni di ricerca specializate in banca di sangue di cordone, biologia di e cellule epiteliali, immunologia è biologia di cellule staminali utilizanu crioviali per criopreserve e cellule.

E cellule preservate in questu modu includenu cellule B è T, cellule CHO, cellule staminali ematopoietiche e cellule progenitrici, ibridomi, cellule intestinali, macrofagi, cellule staminali mesenchimali e cellule progenitrici, monociti, mielomi, cellule NK e cellule staminali pluripotenti.

Panoramica di Cumu Store Cryovials in Azotu Liquidu

A criopreservazione hè un prucessu chì cunserva e cellule è altre custruzzioni biologiche rinfristendu à temperature assai bassu. E cellule ponu esse guardate in nitrogenu liquidu per anni senza perdita di a viabilità cellulare. Questu hè un schema di i prucessi impiegati.

Preparazione cellulare

U metudu esatta per a preparazione di mostri variarà secondu u tipu di cellula, ma in generale, e cellule sò cullate è centrifugate per sviluppà un pellet riccu in cellula. Stu pellet hè poi risuspenditu in u supernatant mischju cù crioprotettore o un mediu di criopreservazione.

Mediu di criopreservazione

Stu mediu hè impiegatu per priservà e cellule in l'ambienti à bassa temperatura chì saranu sottumessi inibendu a furmazione di cristalli intra è extracellulari è dunque a morte cellulare. U so rolu hè di furnisce un ambiente sicuru è protettivu per e cellule è i tessuti durante i prucessi di congelazione, almacenamiento è scongelu.

Un mediu cum'è u plasma frescu congelatu (FFP), una soluzione di plasmaliti eparinizzati o soluzioni senza serum, senza cumpunenti animali hè mischju cù crioprotettori cum'è dimetilsulfossidu (DMSO) o glicerol.

U pellet di mostra re-liquified hè aliquoted in criovials di polipropilene cum'èSuzhou Ace Biomedical cumpagnia Criogenic Storage Vials.

Hè impurtante micca di sopra à i crioviali, perchè questu aumentarà u risicu di cracking è a pussibuli liberazione di cuntenutu (1).

Frequenza di congelazione cuntrullata

In generale, una freccia di congelazione lenta cuntrullata hè impiegata per a criopreservazione successu di e cellule.

Dopu chì i campioni sò aliquotati in vials criogenici, sò posti nantu à u ghjacciu umitu o in un frigorifero di 4 ℃ è a prucedura di congelazione hè iniziata in 5 minuti. Comu guida generale, i celluli sò rinfriscati à un ritmu di -1 à -3 per minutu (2). Questu hè ottenutu utilizendu un cooler programmabile o mettendu fiala in una scatula insulata posta in un congelatore à velocità cuntrullata da -70 °C à -90 °C.

Trasferisce à l'azotu liquidu

I vials criogenichi congelati sò poi trasferiti à un tank di nitrogenu liquidu per periodi indefiniti sempre chì una temperatura di menu di -135 ℃ hè mantinuta.

Queste temperature ultra-basse ponu esse ottenute per immersione in u nitrogenu di a fase liquida o di vapore.

Fase liquida o vapore ?

L'almacenamiento in u nitrogenu di a fase liquida hè cunnisciutu per mantene a temperatura fridda cù una coherenza assoluta, ma hè spessu micca cunsigliatu per i seguenti motivi:

• A necessità di grandi volumi (prufundità) di nitrogenu liquidu chì hè un periculu potenziale. Burns o asfissia per quessa hè un veru risicu.
• Casi documentati di contaminazione incruciata da agenti infittivi cum'è l'aspergillus, l'hep B è a diffusione virali via u mediu di nitrogenu liquidu (2,3)
• U putenziale di nitrogenu liquidu per fughje in i vials durante l'immersione. Quandu si sguassate da u almacenamentu è caliu à a temperatura di l'ambienti, u nitrogenu si espansione rapidamente. In cunseguenza, u vial pò sfraccià quandu hè sguassatu da u almacenamentu di nitrogenu liquidu, creendu un periculu da i detriti volanti è l'esposizione à u cuntenutu (1, 4).

Per questi mutivi, u almacenamentu di temperatura ultra-bassa hè più comunmente in azotu in fase di vapore. Quandu i campioni devenu esse almacenati in a fase liquida, deve esse usatu tubi cryoflex specializati.

L'incontu di a fase di vapore hè chì un gradiente di temperatura verticale pò esse risultatu in fluttuazioni di temperatura trà -135 ℃ è -190 ℃. Questu hè necessariu un monitoraghju attentu è diligente di i livelli di nitrogenu liquidu è variazioni di temperatura (5).

Parechji pruduttori ricumandenu chì i crioviali sò adattati per u almacenamentu finu à -135 ℃ o per l'usu in a fase di vapore solu.

Scongelare e vostre cellule criopreservate

A prucedura di scongelu hè stressante per una cultura congelata, è a manipulazione è a tecnica curretta hè necessaria per assicurà a viabilità, a ricuperazione è a funziunalità ottimali di e cellule. I protokolli di scongelamento esatti dependeranu di tipi di cellule specifichi. Tuttavia, u scongelu rapidu hè cunsideratu standard per:

• Diminuisce ogni impattu nantu à a ricuperazione cellulare
• Aiutate à riduce u tempu di esposizione à i soluti prisenti in i media di congelazione
• Minimizà ogni dannu da a recristallizazione di ghiaccio

Bagni d'acqua, bagni di perle, o strumenti automatizati specializati sò cumunimenti usati per scongelà e mostre.

A maiò spessu, 1 linea di cellula hè scongelata à volta per 1-2 minuti, girando delicatamente in un bagnu d'acqua di 37 ℃ finu à chì ci hè solu un pocu di ghiaccio lasciatu in a fiala prima di esse lavati in un mediu di crescita preriscaldatu.

Per alcune cellule, cum'è l'embrioni di mammiferi, u riscaldamentu lento hè essenziale per a so sopravvivenza.

E cellule sò avà pronte per a cultura di e cellule, l'isolamentu di e cellule, o in u casu di e cellule staminali ematopoietiche - studii di viabilità per guarantiscenu l'integrità di e cellule staminali di donatori prima di a terapia mieloablativa.

Hè pratica normale di piglià picculi aliquote di a mostra prelavata utilizata per fà un conte di cellule per determinà a concentrazione di e cellule per u plating in cultura. Puderete poi valutà i risultati di e prucedure di isolamentu di e cellule è determinà a viabilità di e cellule.

Best Practices per l'Almacenamiento di Cryovials

A criopreservazione riescita di i campioni almacenati in crioviali dipende da parechji elementi in u protocolu, cumpresu l'almacenamiento propiu è a conservazione di registri.

• Split cells trà i lochi di almacenamento- Se i volumi permettenu, divide e cellule trà i vials è almacenà in locu separati per riduce u risicu di perdita di mostra per fallimenti di l'equipaggiu.
• Impedisce a contaminazione incruciata- Optate per vial criogenici sterili monouso o autoclave prima di l'usu sussegwenti
• Aduprate vials di dimensioni adatte per e vostre cellule- i vials sò in una gamma di volumi trà 1 è 5 ml. Evite di riempimentu eccessivu di vials per riduce u risicu di cracking.
• Selezziunà vials criogenichi interni o esterni filettati- I vials filettati internamente sò cunsigliati da alcune università per e misure di sicurezza - ponu ancu impedisce a contaminazione durante u riempimentu o quandu si almacenanu in u nitrogenu liquidu.
• Impedisce a fuga- Aduprate sigilli bi-injectati stampati in u tappo a vite o l'O-rings per prevene perdite è contaminazioni.
• Aduprate codici a barre 2D è vials di etichette– per assicurà a tracciabilità, fialetti cù grandi superfici di scrittura permettenu à ogni fiala di esse etichettata adatta. I codici a barre 2D ponu aiutà cù a gestione di l'almacenamiento è a tenuta di registri. I tappi codificati in culori sò utili per l'identificazione più faciule.
• Mantenimentu di almacenamentu adattatu- Per assicurà chì e cellule ùn sò micca persu, i vasi di almacenamentu duveranu monitorà constantemente a temperatura è i livelli di nitrogenu liquidu. L'allarmi deve esse adattati per avvisà l'utilizatori di errori.

Precauzioni di sicurità

U nitrogenu liquidu hè diventatu una pratica cumuna in a ricerca muderna, ma porta u risicu di ferite seriu s'ellu hè utilizatu in modu incorrectu.

L'equipaggiu di prutezzione persunale (PPE) deve esse purtatu per minimizzà u risicu di frostbite, burns è altri incidenti avversi durante a manipulazione di nitrogenu liquidu. Indossà

• Guanti criogenici
• Capu di laboratoriu
• Scudo facciale resistente à l'impattu chì copre ancu u collu
• Scarpi chjusi
• Grembiule in plastica antispruzzo

I frigorifici di nitrogenu liquidu deve esse posti in spazii ben ventilati per minimizzà u risicu di l'asfixia - u nitrogenu scappatu vaporizes è displaces l'ossigenu atmosfericu. I grandi magazzini di volumi duveranu avè sistemi d'alarma d'ossigenu bassu.

U travagliu in coppie quandu manipule nitrogenu liquidu hè ideale è u so usu fora di l'ore di travagliu normale deve esse pruibitu.

Crioviali per sustene u vostru flussu di travagliu

Suzhou Ace Biomedical Company offre una larga selezzione di prudutti chì risponde à i vostri bisogni di criopreservazione per diversi tipi di cellule. A cartera include una gamma di tubi è una gamma di crioviali sterili.

I nostri crioviali sò:

• Tappo a vite da laboratorio 0,5 ml 1,5 ml 2,0 ml fiale criogeniche criogeniche Criotubo a fondo conico con guarnizione

  ● 0.5ml, 1.5ml, 2.0ml specificazione, cù falda o senza falda
  ● Disegnu cunicu o self standing, sterile o non-sterile sò tramindui dispunibili
  ● I tubi di tappi a vite sò fatti di polipropilene di qualità medica
  ● PP Cryotube Vials pò esse ripetutamente congelatu è scongelu
  ●The design cap esterni pò riduce a prubabilità di contaminazione durante u trattamentu di mostra.
  ● Tubi criogenici tappi a vite Filetti universali per l'usu
  ● I tubi si adattanu à i rotori più cumuni
  ● I tubi o-ring di tubi criogenici si adattanu à scatuli di congelatore standard da 1-inch è 2-inch, 48well, 81well, 96well è 100well.
  ● Autoclavable à 121 ° C è freezable à -86 ° C

  PART NO	MATERIALE	VOLUME	CAPCOLORE	PCS/SACCA	BORSE/CASA
  ACT05-BL-N	PP	0,5 ml	Neru, Giallu, Blu, Rossu, Viola, biancu	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1,5 ml	Neru, Giallu, Blu, Rossu, Viola, biancu	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1,5 ml	Neru, Giallu, Blu, Rossu, Viola, biancu	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2,0 ml	Neru, Giallu, Blu, Rossu, Viola, biancu	500	10