Introduzione
Chì hè l'estrazione di l'acidu nucleicu?
In u più semplice di termini, estrazione di l'acidu nucleicu hè a rina di a RNA è / o DNA da una mostra è tuttu u eccessu chì ùn hè micca necessariu. U prucessu d'estrazione isolare l'acido nuclianu da un esempiu è i cede in a forma di un cornitore el'èate, liberi per affaminanti applicazioni de downstream.
Applicazioni di l'estrazione di l'acidu nucleicu
L'acidi nucleichi purificati sò usati in una pletora di sfarenti applicazioni, chì varieghja in parechje industria diverse. A salute hè forse l'area induve hè adupratu a maiò parte, cù a RNA Purificata è DNA necessaria per un ospitu di sfarente di scopi di teste differenti.
Applicazioni di l'estrazione di l'acidu nucleicu in a salute includenu:
- Scuprimentu di a Generazione Prossima (NGS)
- Oculyping basatu in Amplificazione
- Genotiping basatu in Array
- Restrizzione Enzyme digestione
- Analisi aduprendu enzimi di mudificazione (p.e. ligazione è clonazione)
Ci hè ancu un'altra campu al di là di a salute induve l'estrazzione acide nucleica, cumpresa ma micca limitata à prova di paternità è genomu è genomu
Una breve storia di l'estrazione di l'acidu nucleicu
Estrazione di l'DNAE date torna una Lungada, cù a prima isolazione shibule hè stata realizata da un duttore svizzeru chjamatu Frisedrichchi di vita di a vita rilevendu a cumpusizioni ricunniscenza Dopu avè fiascatu di linfocisi, ellu hà pussutu ottene un precipitazione crudu di l'ADN di leuccocte truvati in Pus nantu à i basi scartati. Hà fattu questu agghiuncendu l'acidu è tandu ALKali à a celletta di u cellulare, è dopu sviluppì un protocol per separà l'ADNA da l'altri proteine.
A ricerca di u Terzu à a Terza MIESS, parechji altri scientisti anu andatu à anticipu è sviluppà tecniche per isolà è purificà l'ADNA. Edwin Joseph Cohhn, Un scientist di proteina sviluppata parechje tecniche per a purificazione di prutezzione durante u WW2. Era rispunsevule di isolà u frazione d'albumin di Serum Albumina di u plasma di sangue, chì hè impurtante in mantene di a pressione essmotica in i vini di sangue. Questu era cruciale per guardà i suldati vivi.
In u 1953 Francis Crick, Nantu cù Rosalind Franklin è James Watson, determinò a struttura di e strade in quantità nucleotidi. Questa scuperta di ritruvisata rimarda a strada per Meselson è stahl, chì ponu pussede un procok di mocu di una densizzione per isolata l'esposizione semi-conservativa di a so esperimentu di 1958.
Tecniche di estrazione di l'acidu nucleicu
Chì sò i 4 tappe di l'estrazione di l'ADN?
Tutti i metudi di l'estrazione si ferma à i stessi passi fundamentali.
Interruzzione cellulare. Sta tappa hà cunnisciutu ancu cum'è Kys Cell, implica a sfondaquà u muru di a celella è / o u membraniu cellulare, in ordine per i fluidi intradiziunali nucleichi di interesse di interessi nucleichi.
Eliminazione di i detriti indesiderati. Questu include i campi di membrane, e proteine è l'altri acidi nucleichi indesiderati chì ponu interferiscenu cù l'applicazioni di downstream.
Isulamentu. Ci hè una quantità di manere differenti per isolà l'acidu nucleichi d'acti d'interessu da u liscia chì avete creatu, chì caduta trà duie catezzioni principali:
Cuncentrazione. Dopu chì l'acidi nucleichi sò stati isolati da tutti l'altri cuntaminanti è diluenti, sò presentati in un elate altamente cuncentratu.
I dui tipi di estrazzione
Ci hè dui tippi di estrazione di l'acidu nucleicu - Metodi basati in Soluzione è i metudi di Statu solidu. U metudu basatu in Soluzione hè ancu cunnisciutu cum'è metudu di l'estrazione chimica, cum'ellu cunnosce a vostra chimica per rompe u materiale nucleicu. Questu pò aduprà u cumposti organicu cum'è a fenol è u cloroform, o menu dannusu è dunque più cumposti inorganicu cum'è a ghjocapa di gel.
Esempi di sfarenti metudi di estrazione chimica per rompe una cellula include:
- Ruptura Osmotica di a membrana
- Digestione ENZimmatica di u muru di a cellula
- Solubilisazione di Membrane
- cù detergenti
- Cù trattamentu alcali
Tecniche solidi state, cunnisciute ancu i metudi meccanichi, implici i metudi meccanichi, impliche di sfruttà cumu l'abna l'interatta cù un sustratu solidu. Scegliendu un perle o a molecula chì l'hà l'ADna averà l'analisi, hè pussibule di separà i dui. Esempii di tecniche di estrazione di fase solidi cumpresi aduprendu Silica è di perle magnetiche.
L'estrazione di Bead Magnetica spiegata
U metudu di l'estrazione di benefici
U putenziale per l'estrazione usanu e so perle magnetiche hè statu prima ricunnisciuta in un patindu di i Stati Uniti archiatu da Trevor Hawkins, per l'istitutu di ricerca in bianca. Stu patenu ricunnisciutu questu era pussibule alluntanà u materiale di geteticu chjappà in un trasportatore di u sedile solidu, chì puderia esse una fiaffa magnetica. U principiu hè chì utilizate una perla magnetica altamente funziunalizatu à u materiale geneticu sarà separatu da u supernatante applicendu una forza magnetica à l'esterna à u vasu.
Perchè aduprate l'estrazione di Bead Magnetica?
A tecnulugia di astrazione di per via di magnetica hè diventata sempre più sempramente prevalente, per via di u putenziale provaà e prucedure di estrazione rapida è efficiente. In i cunsiglibichi recenti di perle magneti altamente funziunati cù sistemi bufferiche, chì anu fattu pussibuli estrazione acida nucleica è un quadru luce è un costuosu luce. Ancu i metudi di l'estrazione di l'estrazione di benefici implicanti ùn implicanu micca i passi di centrifuga chì ponu causà forze di shear chì rompenu i pezzi più longu di DNA. Questu significa chì e fili più longa di l'ADN restanu intactu, chì hè impurtante in test di genomica.
Tempu post: Nov-25-2022