5 Cunsiglii simplici per prevene l'errori quandu si travaglia cù e placche PCR

A reazzione in catena di polimerasi (PCR) hè unu di i metudi largamente cunnisciuti utilizati in laboratori di scienza di a vita.

I platti di PCR sò pruduciuti da plastichi di prima classe per un trattamentu eccellente è analisi di campioni o risultati raccolti.

Hanu pareti sottili è omogenei per furnisce un trasferimentu termale precisu.

In preparazione per l'applicazioni in tempu reale, a sezione minuti di DNA o RNA sò isolati è almacenati in platti PCR.

I platti di PCR sò assai efficaci in u termosigillamentu è limitanu ancu u flussu di calore.

Tuttavia, cum'è efficaci è affidabili sò e placche PCR, l'errore è l'imprecisioni si sdrughjenu facilmente durante u processu di campioni.

Dunque, s'è vo site interessatu à ottene una qualità bona è altapiastre di PCR.Hè ideale per cuntattà un fabricatore affidabile di placche PCR. Cù questu vi assicuratevi di ottene u megliu affare.

Eccu alcune precauzioni da seguità per evità contaminazioni di reagenti o campioni è impediscenu l'imprecisioni di scaccià in i risultati.

Sterilizazione di u circondu
I pusitivi o negativi incorretti si sò per via di a prisenza di impurità, chì facenu dubbità i risultati.

L'impurità è i contaminanti si trovanu in diverse forme, cum'è DNA senza relazione o additivi chimichi chì eventualmente diminuiscenu l'efficienza è l'efficacità di a reazione.

Ci hè parechje manere di riduce assai a rata di contaminazione di a placa PCR.

L'usu di punte di filtri sterilizzati hè un altru modu utile per prevene l'impurità di intruduce in i vostri campioni attraversu e pipette.

Dedicate un inseme cumpletamente pulito di l'equipaggiu, cumpostu di pipette è rack, esclusivamente per l'usu di PCR. Questu guarantisci un trasferimentu insignificante di impurità o contaminanti intornu à u laboratoriu.

Aduprate bleaches, etanolu nantu à e pipette, rack è banche per sguassà i contaminanti.

Assegnate un spaziu riservatu per tutte e vostre reazzioni PCR per minimizzà ancu a contaminazione di particelle.

Aduprate guanti puliti à ogni passu è rimpiazzali spessu.

piastre di PCR
Inspect the Concentration and Purity of the Template.
A pulizia di u bancu è di l'equipaggiu utilizatu quandu analizà e mostre cù a PCR deve esse mantinuta. Hè essenziale per cunvalidà u gradu di purezza di i campioni prima di l'analisi è di trasfurmazioni.

In generale, l'analizzatori piglianu in considerazione a concentrazione è u livellu di purità di i campioni di DNA.

Pruvate u rapportu di assorbanza per 260nm / 280nm ùn deve esse menu di 1.8. Mentre chì e lunghezze d'onda successive trà 230 nm è 320 nm sò usate per identificà impurità.

À un esempiu, i sali caotropichi è altri composti organici sò rilevati à una rata di assorbanza di 230 nm. Mentre a turbidità in i campioni di DNA sò ancu rilevati è verificati à una rata di assorbanza di 320 nm.

Evite sovraccaricare i piatti PCR cù u pruduttu
Quantu hè vulsutu di eseguisce parechji prudutti simultaneamente, risultatu in a contaminazione incruciata di e placche PCR.

Overloading the plates PCR with different products waste è rende estremamente difficiuli di cercà i campioni.

Mantene i registri di i Reagenti PCR Aliquot
I cicli continui di congelazione / scongelu è l'usu frequente di aliquote puderanu dannà i reagenti di PCR, l'enzimi è i DNTP per via di a recristallizazione.

Pruvate sempre di monitorà a tarifa di aliquota utilizata mentre preparanu i campioni da analizà.

LIMS preferibile hè più adattatu per cuntrullà l'inventariu è a quantità di reagenti è campioni congelati o scongelati.

Sceglite a megliu temperatura di ricottura.
A scelta è l'usu di a temperatura d'annealing sbagliata hè un altru mètudu chì i risultati PCR cuntenenu errore.

Calchì volta, a reazione ùn viaghja micca cum'è previstu. Hè vulsutu riduce a temperatura di annealing per facilità una reazione successu.

Tuttavia, calà a temperatura aumenta a probabilità di falsi pusitivi è l'apparizione di dimeri di primer.

Hè significativu per cunfirmà l'analisi di a curva di fusione quandu si usanu e placche PCR, perchè hè un bon indicatore di selezzione di a temperatura di annealing curretta.

U software di cuncepimentu di l'iniziu aiuta à cuncepimentu, furnisce una temperatura di annealing ghjusta è riduce direttamente l'errore in e piastre PCR.

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Tempu di pubblicazione: 30-oct-2021