Alang sa malampuson nga mga reaksyon sa pagpadako, kinahanglan nga ang indibidwal nga mga sangkap sa reaksyon naa sa husto nga konsentrasyon sa matag pagpangandam. Dugang pa, importante nga walay kontaminasyon nga mahitabo.
Ilabi na kung daghang mga reaksyon ang kinahanglan i-set-up, kini gitukod aron mag-andam sa usa ka gitawag nga master mix imbes nga i-pipet ang matag reagent nga gilain sa matag sudlanan. Ang mga pre-configured nga sagol kay anaa sa komersyo, diin ang sample-specific nga mga sangkap lamang (primer) ug tubig ang idugang. Sa laing bahin, ang master mix mahimong mag-andam sa imong kaugalingon. Sa duha nga mga variant, ang sagol nga giapod-apod sa matag PCR nga sudlanan nga wala’y template ug ang indibidwal nga sample sa DNA gidugang nga gilain sa katapusan.
Ang paggamit sa usa ka master mix adunay daghang mga bentaha: Una, ang gidaghanon sa mga single pipetting nga mga lakang gipakunhod. Niining paagiha, ang peligro sa mga sayup sa tiggamit sa panahon sa pipetting ug ang peligro sa kontaminasyon maminusan ug, siyempre, maluwas ang oras. Sa prinsipyo, ang pagkasibu sa pipetting mas taas usab, tungod kay mas dako nga volume ang dosed. Sayon kining sabton sa pagsusi sa teknikal nga datos sa mga pipette: Ang mas gamay nga dosed volume, mas taas ang mga deviation mahimong . Ang kamatuoran nga ang tanan nga mga pagpangandam gikan sa parehas nga sudlanan adunay positibo nga epekto sa homogeneity (kung maayo ang pagkasagol). Gipauswag usab niini ang pag-reproducibility sa mga eksperimento.
Kung nag-andam sa master mix, labing menos 10% nga dugang nga volume ang kinahanglan idugang (pananglitan kung 10 nga mga pagpangandam ang gikinahanglan, kuwentaha base sa 11), aron bisan ang katapusan nga sudlanan mapuno sa husto. Niining paagiha, ang (gamay) nga mga pagkadili tukma sa pipetting, ug ang epekto sa pagkawala sa sample kung ang pag-dosis sa mga solusyon nga adunay detergent mahimong mabayran. Ang mga detergent naa sa mga solusyon sa enzyme sama sa polymerases ug master mixes, hinungdan sa pagporma sa bula ug mga nahabilin sa sulud sa sulud sa normal.mga tip sa pipette.
Depende sa aplikasyon ug sa matang sa likido nga igahatag, ang hustong teknik sa pagpipet (1) kinahanglang pilion ug pilion ang angay nga kagamitan. Para sa mga solusyon nga adunay mga detergent, girekomendar ang usa ka direct displacement system o ang gitawag nga "low retention" pipette tips isip alternatibo sa air-cushion pipettes. Ang epekto saACE PIPETTE tipgibase sa usa ka partikular nga hydrophobic nga nawong. Ang mga likido nga adunay mga detergent dili magbilin ug nahabilin nga pelikula sa sulod ug sa gawas, aron ang pagkawala sa solusyon mahimong maminusan.
Gawas sa eksaktong dosis sa tanan nga mga sangkap, importante usab nga walay kontaminasyon sa mga pagpangandam nga mahitabo. Dili igo ang paggamit sa mga consumable nga adunay taas nga kaputli, tungod kay ang proseso sa pipetting sa usa ka air cushion pipette makahimo og mga aerosol nga magpabilin sa pipette. Ang DNA nga mahimong anaa sa aerosol mahimong ibalhin gikan sa usa ka sample ngadto sa sunod sa mosunod nga pipetting nga lakang ug sa ingon mosangpot sa kontaminasyon. Ang direkta nga mga sistema sa pagbalhin nga gihisgutan sa ibabaw mahimo usab nga makunhuran kini nga peligro. Para sa air-cushion pipettes makatarunganon nga gamiton ang mga tip sa filter aron mapanalipdan ang pipette cone pinaagi sa pagpabilin sa mga splashes, aerosol, ug biomolecules.
Oras sa pag-post: Dis-06-2022