Mga cryovialkasagarang gigamit alang sa cryogenic nga pagtipig sa mga linya sa selula ug uban pang kritikal nga biolohikal nga mga materyales, sa mga dewar nga puno sa liquid nitrogen.

Adunay pipila ka mga yugto nga nalangkit sa malampuson nga pagpreserbar sa mga selula sa liquid nitrogen. Samtang ang sukaranan nga prinsipyo usa ka hinay nga pag-freeze, ang eksaktong teknik nga gigamit nagdepende sa tipo sa cell ug cryoprotectant nga gigamit. Adunay ubay-ubay nga mga konsiderasyon sa kaluwasan ug labing maayo nga mga gawi nga konsiderahon kung magtipig sa mga selyula sa ingon ka ubos nga temperatura.

Kini nga post nagtumong sa paghatag ug usa ka kinatibuk-ang ideya kon sa unsang paagi ang mga cryovial gitipigan sa liquid nitrogen.

Unsa ang Cryovials

Ang mga cryovial gamay, gitakpan nga mga panaksan nga gidisenyo alang sa pagtipig sa mga sample sa likido sa labi ka ubos nga temperatura. Gipaneguro nila nga ang mga selula nga gipreserbar sa cryoprotectant dili direktang makontak sa liquid nitrogen, nga makapamenos sa risgo sa cellular fractures samtang nakabenepisyo gihapon sa grabeng makapabugnaw nga epekto sa liquid nitrogen.

Ang mga panaksan kasagarang anaa sa lain-laing mga volume ug mga disenyo - kini mahimo nga sulod o gawas nga hilo nga adunay patag o lingin nga ubos. Anaa usab ang sterile ug non-sterile format.

Kinsa NaggamitMga Cyrovialsa Pagtipig sa mga Cell sa Liquid Nitrogen

Usa ka lainlaing NHS ug pribadong laboratoryo, ingon man mga institusyon sa panukiduki nga espesyalista sa cord blood banking, epithelial cell biology, immunology ug stem cell biology naggamit sa mga cryovial sa cryopreserve cells.

Ang mga selula nga gipreserba niining paagiha naglakip sa B ug T Cells, CHO Cells, Hematopoietic Stem ug Progenitor Cells, Hybridomas, Intestinal Cells, Macrophage, Mesenchymal Stem ug Progenitor Cells, Monocytes, Myeloma, NK Cells ug Pluripotent Stem Cells.

Kinatibuk-ang Pagtan-aw sa Giunsa Pagtipig ang mga Cryovial sa Liquid Nitrogen

Ang cryopreservation usa ka proseso nga nagpreserbar sa mga selula ug uban pang biyolohikal nga konstruksyon pinaagi sa pagpabugnaw niini ngadto sa ubos kaayo nga temperatura. Ang mga selula mahimong tipigan sa liquid nitrogen sulod sa mga katuigan nga walay pagkawala sa cell viability. Kini usa ka outline sa mga pamaagi nga gigamit.

Pagpangandam sa Cell

Ang eksakto nga pamaagi sa pag-andam sa mga sampol magkalainlain depende sa tipo sa cell, apan sa kinatibuk-an, ang mga selyula gikolekta ug gi-centrifuged aron makahimo usa ka pellet nga puno sa cell. Kini nga pellet gisuspinde pag-usab sa supernatant nga gisagol sa cryoprotectant o usa ka medium nga cryopreservation.

Cryopreservation Medium

Kini nga medium gigamit sa pagpreserbar sa mga selula sa ubos nga temperatura nga mga palibot nga ilang ipailalom pinaagi sa pagpugong sa pagporma sa intra ug extracellular nga mga kristal ug busa cell death. Ang ilang tahas mao ang paghatag usa ka luwas, panalipod nga palibot alang sa mga selyula ug mga tisyu sa panahon sa mga proseso sa pagyelo, pagtipig, ug pagtunaw.

Ang medium sama sa fresh frozen plasma (FFP), heparinised plasmalyte solution o serum-free, animal component-free solutions gisagol sa cryoprotectants sama sa dimethyl sulphoxide (DMSO) o glycerol.

Ang re-liquified sample pellet gi-aliquote ngadto sa polypropylene cryovials sama saSuzhou Ace Biomedical nga kompanya nga Cryogenic Storage Vials.

Importante nga dili sobra ang pagpuno sa mga cryovial tungod kay kini makadugang sa risgo sa pag-crack ug ang posibleng pagpagawas sa mga sulod (1).

Gikontrol nga Freeze Rate

Sa kinatibuk-an, ang usa ka hinay nga kontrolado nga freeze rate gigamit alang sa malampuson nga cryopreservation sa mga selula.

Human ma-aliquote ang mga sample ngadto sa cryogenic vials, ibutang kini sa basa nga yelo o sa refrigerator nga 4 ℃ ug ang proseso sa pagyelo magsugod sulod sa 5 minutos. Ingong kinatibuk-ang giya, ang mga selula gipabugnaw sa gikusgon nga -1 hangtod -3 kada minuto (2). Kini makab-ot gamit ang usa ka programmable cooler o pinaagi sa pagbutang sa mga panaksan sa usa ka insulated nga kahon nga gibutang sa usa ka -70 ° C hangtod -90 ° C nga kontrolado nga rate nga freezer.

Pagbalhin ngadto sa Liquid Nitrogen

Ang nagyelo nga cryogenic vials dayon ibalhin sa usa ka liquid nitrogen tank alang sa walay tino nga mga panahon basta ang temperatura nga ubos pa sa -135 ℃ mamentinar.

Kini nga mga ultra-ubos nga temperatura makuha pinaagi sa pagpaunlod sa liquid o vapor phase nitrogen.

Liquid o Vapor Phase?

Ang pagtipig sa liquid phase nitrogen nahibal-an sa pagpadayon sa bugnaw nga temperatura nga adunay hingpit nga pagkamakanunayon, apan kasagaran dili girekomenda alang sa mosunod nga mga rason:

• Ang panginahanglan alang sa dagkong mga volume (kalalom) sa liquid nitrogen nga usa ka potensyal nga peligro. Ang mga paso o asphyxiation tungod niini usa ka tinuod nga risgo.
• Dokumentado nga mga kaso sa cross-contamination sa makatakod nga mga ahente sama sa aspergillus, hep B ug viral spread pinaagi sa liquid nitrogen medium (2,3)
• Ang potensyal alang sa likido nga nitroheno nga motulo sa mga panaksan sa panahon sa pagpaunlod. Kung gikuha gikan sa pagtipig ug gipainit sa temperatura sa kwarto, ang nitroheno kusog nga molapad. Tungod niini, ang vial mahimong mabuak kon kuhaon gikan sa liquid nitrogen storage, makamugna og peligro gikan sa naglupad nga mga tinumpag ug pagkaladlad sa sulod (1, 4).

Tungod niini nga mga hinungdan, ang ultra-ubos nga temperatura nga pagtipig kasagaran sa vapor phase nitrogen. Kung ang mga sample kinahanglan nga tipigan sa liquid phase, ang espesyal nga cryoflex tubing kinahanglan gamiton.

Ang downside sa alisngaw nga hugna mao nga ang usa ka bertikal temperatura gradient mahimong mahitabo nga moresulta sa temperatura pag-usab-usab tali sa -135 ℃ ug -190 ℃. Nagkinahanglan kini og mainampingon ug makugihong pagmonitor sa lebel sa liquid nitrogen ug mga kausaban sa temperatura (5).

Daghang mga tiggama ang nagrekomenda nga ang mga cryovial angay alang sa pagtipig hangtod sa -135 ℃ o para magamit sa yugto sa singaw lamang.

Pagtunaw sa Imong Cryopreserved nga mga Selyula

Ang pamaagi sa pagtunaw makapabug-at alang sa usa ka nagyelo nga kultura, ug ang husto nga pagdumala ug teknik gikinahanglan aron masiguro ang labing maayo nga pagkaayo, pagkaayo, ug pagpaandar sa mga selula. Ang eksakto nga mga protocol sa pagtunaw magdepende sa piho nga mga tipo sa cell. Bisan pa, ang paspas nga pagtunaw giisip nga sukaranan sa:

• Pakunhuran ang bisan unsang epekto sa pagkaayo sa cellular
• Tabang sa pagpakunhod sa oras sa pagkaladlad sa mga solute nga anaa sa nagyelo nga media
• Pagmenos sa bisan unsang kadaot pinaagi sa pag-rekristal sa yelo

Ang mga kaligoanan sa tubig, mga bead bath, o mga espesyal nga automated nga mga instrumento kasagarang gigamit sa pagtunaw sa mga sample.

Kasagarang 1 ka cell line ang matunaw sa usa ka higayon sulod sa 1-2 ka minuto, pinaagi sa hinay nga pagtuyok sa 37 ℃ nga kaligoanan sa tubig hangtod nga adunay gamay na lang nga yelo nga nahibilin sa panaksan sa dili pa kini mahugasan sa prewarmed growth medium.

Alang sa pipila ka mga selula sama sa mammalian embryo, ang hinay nga pag-init kinahanglanon alang sa ilang pagkaluwas.

Andam na ang mga selula para sa cell culture, cell isolation, o sa kaso sa haematopoietic stem cells – viability studies aron magarantiya ang integridad sa donor stem cell sa dili pa ang myeloablative therapy.

Normal nga praktis ang pagkuha og gagmay nga mga aliquot sa prewashed nga sample nga gigamit sa paghimo og cell count aron matino ang cell concentration para sa plating sa kultura. Mahimo nimong susihon ang mga resulta sa mga pamaagi sa pag-inusara sa cell ug mahibal-an ang pagkaayo sa cell.

Labing Maayo nga Mga Praktis alang sa Pagtipig sa mga Cryovial

Ang malampuson nga cryopreservation sa mga sample nga gitipigan sa cryovials nagdepende sa daghang mga elemento sa protocol lakip na ang husto nga pagtipig ug pagtipig sa rekord.

• Pagbahin sa mga cell tali sa mga lokasyon sa pagtipig– Kung tugotan ang mga volume, bahina ang mga cell tali sa mga panaksan ug ibutang kini sa lainlaing mga lokasyon aron makunhuran ang peligro sa pagkawala sa sample tungod sa mga pagkapakyas sa kagamitan.
• Paglikay sa cross-contamination– Pagpili alang sa usa ka gamit nga sterile cryogenic vial o autoclave sa dili pa gamiton
• Gamita ang hustong gidak-on nga mga panaksan alang sa imong mga selula- Ang mga panaksan moabut sa lainlaing mga volume tali sa 1 ug 5mls. Likayi ang sobra nga pagpuno sa mga panaksan aron mamenosan ang risgo sa pagliki.
• Pilia ang internal o externally threaded cryogenic vials- Ang mga internal nga sinulid nga mga panaksan girekomenda sa pipila nga mga unibersidad alang sa mga lakang sa kaluwasan - mahimo usab nila mapugngan ang kontaminasyon sa panahon sa pagpuno o kung gitipigan sa likido nga nitroheno.
• Paglikay sa Leakage- Paggamit og bi-injected seal nga gihulma sa screw-cap o O-rings aron malikayan ang pagtulo ug kontaminasyon.
• Gamit ug 2D barcodes ug label vials– aron masiguro ang pagkasubay, ang mga panaksan nga adunay dagkong mga lugar sa pagsulat makahimo sa matag panaksan nga adunay igo nga label. Ang 2D barcodes makatabang sa pagdumala sa pagtipig ug pagtipig sa rekord. Ang mga takup nga adunay code sa kolor mapuslanon alang sa dali nga pag-ila.
• Igong pagtipig sa pagtipig- Aron masiguro nga ang mga cell dili mawala, ang mga sudlanan sa pagtipig kinahanglan kanunay nga magmonitor sa temperatura ug lebel sa likido nga nitrogen. Ang mga alarma kinahanglan nga ibutang aron maalerto ang mga tiggamit sa mga sayup.

Mga Panagana sa Kaluwasan

Ang nitroheno nga likido nahimong komon nga praktis sa modernong panukiduki apan nagdala sa risgo sa seryoso nga kadaot kon gamiton sa sayop.

Ang saktong personal nga kagamitan sa pagpanalipod (PPE) kinahanglan nga isul-ob aron mamenosan ang risgo sa frostbite, paso ug uban pang dili maayong mga insidente sa pagdumala sa liquid nitrogen. Pagsul-ob

• Mga gwantis nga cryogenic
• Laboratory coat
• Impact resistant full face shield nga nagtabon usab sa liog
• Sirado nga sapatos
• Splashproof nga plastik nga apron

Ang mga refrigerator nga nitroheno nga likido kinahanglan ibutang sa maayo nga bentilasyon nga mga lugar aron mamenosan ang peligro sa asphyxiation - ang na-eskapo nga nitrogen moalisngaw ug mobalhin sa atmospera nga oxygen. Ang dagkong mga tindahan sa volume kinahanglan adunay ubos nga sistema sa alarma sa oxygen.

Ang pagtrabaho nga magkapares kung ang pagdumala sa likido nga nitrogen mao ang sulundon ug ang paggamit niini gawas sa normal nga oras sa pagtrabaho kinahanglan nga gidili.

Mga Cryovial aron Suporta sa Imong Trabaho

Ang kompanya nga Suzhou Ace Biomedical nagtanyag usa ka halapad nga pagpili sa mga produkto nga makatubag sa imong mga kinahanglanon sa cryopreservation alang sa lainlaing mga lahi sa mga selula. Ang portfolio naglakip sa usa ka lain-laing mga tubesa ingon man usab sa usa ka lain-laing mga sterile cryovials.

Ang among mga cryovial mao ang:

• Lab Screw Cap 0.5mL 1.5mL 2.0mL Cryovial Cryogenic Vials Conical Bottom Cryotube nga adunay Gasket

  ● 0.5ml,1.5ml,2.0ml espesipikasyon,adunay sayal o walay sayal
  ● Conical o self standing nga disenyo, sterile o non-sterile pareho nga anaa
  ● Ang mga tubo sa screw cap ginama sa medical grade polypropylene
  ● PP Cryotube Vials mahimong balik-balik nga frozen ug lasaw
  ●Ang disenyo sa gawas nga takup makapakunhod sa posibilidad sa kontaminasyon sa panahon sa sample nga pagtambal.
  ● Screw cap cryogenic tubes Universal screw thread para gamiton
  ● Ang mga tubo mohaum sa kasagarang mga rotor
  ● Ang cryogenic tube o-ring nga mga tubo mohaum sa standard nga 1-inch ug 2-inch, 48well, 81well，96well ug 100well freezer boxes
  ● Autoclavable sa 121°C ug freezable sa -86°C

  BAHIN NO	MATERYAL	TOMO	CAPKOLOR	PCS/BAG	BAG/KASO
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	Itom, Dilaw, Asul, Pula, Purple, Puti	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	Itom, Dilaw, Asul, Pula, Purple, Puti	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	Itom, Dilaw, Asul, Pula, Purple, Puti	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	Itom, Dilaw, Asul, Pula, Purple, Puti	500	10