Ang standardisasyon sa mga proseso naglakip sa ilang pag-optimize ug sa sunod nga pagtukod ug harmonization, nga nagtugot sa dugay nga labing maayo nga pasundayag - nga independente sa tiggamit. Gisiguro sa standardisasyon ang taas nga kalidad nga mga sangputanan, ingon man usab sa ilang pag-usab ug pagtandi.
Ang katuyoan sa (klasiko) PCR mao ang henerasyon sa usa ka kasaligan ug mabag-o nga sangputanan. Alang sa pipila nga mga aplikasyon, ang ani saProdukto sa PCRadunay kalabutan usab. Alang sa kini nga mga reaksyon, ang pag-atiman kinahanglan kuhaon aron masiguro nga ang mga sampol dili makompromiso ug nga ang Workflow sa PCR nagpabilin nga lig-on. Partikular, kini gihubad aron mapamub-an ang pagpaila sa mga kontaminasyon nga mahimong mosangput sa sayup nga positibo o sayup nga mga sangputanan sa negatibo o makapugong sa reaksyon sa PCR. Dugang pa, ang mga kondisyon sa reaksyon kinahanglan nga parehas nga mahimo alang sa matag indibidwal nga sampol sa sulod sa usa ka dagan ug usab mabalhin sa mga sunod nga reaksyon (sa parehas nga pamaagi). Kini nagtumong sa komposisyon sa mga reaksyon ingon man sa klase sa pagkontrol sa temperatura sa Cycler. Siyempre, ang mga sayup sa gumagamit, kinahanglan likayan kutob sa mahimo.
Sa ubos, ipakita naton ang mga hagit nga nasugatan sa pag-andam ug sa tibuuk nga pagdagan sa usa ka PCR - ug ang mga pamaagi sa mga solusyon nga adunay kalabotan sa mga instrumento sa PCR Workflows.
Pagpangandam sa reaksyon
Ang dispensasyon sa mga sangkap sa reaksyon ngadto sa mga PCR-Vessels, o mga plato, sa tinuud, naglangkob sa daghang mga hagit nga kinahanglan mabuntog:
Mga kahimtang sa reaksyon
Ang eksakto ug tukma nga pagduha-duha sa mga indibidwal nga sangkap kinahanglanon kung ang katuyoan alang sa labing parehas nga kondisyon nga reaksyon nga mahimo. Dugang sa usa ka maayo nga pamaagi sa pipetting, ang pagpili sa husto nga himan kritikal. Ang PCR Master-Mixes kanunay adunay mga sangkap nga nagdugang nga viscosity o makamugna og bula. Sa panahon sa proseso sa pipetting, kini ang hinungdan sa daghang basa ngaMga Tip sa Pipette, sa ingon pagkunhod sa katukma sa pipetting. Ang paggamit sa mga direktang sistema sa dispensing o alternatibong mga tip sa pipette nga dili kaayo kadali sa pag-basa sa katukma ug katukma sa proseso sa pipetting.
Pagtakod
Atol sa proseso sa dispensing, ang mga aerosols gihimo nga, kung gitugutan nga makaabut sa sulod sa pipette, mahimo'g makugawan sa lain nga sample sa sunod nga lakang sa pag-sample. Mahimo kini mapugngan pinaagi sa paggamit sa mga tip sa filter o direkta nga mga sistema sa pagbalhin.
Mga konsumedor sama satipik, ang mga sudlanan ug mga plato nga gigamit sa Workflow sa PCR kinahanglan dili maglangkob sa mga sangkap nga nakompromiso sa sampol o paglimbong sa sangputanan. Lakip niini ang DNA, ang mga dnases, rnases ug PCR inhibitors, ingon man mga sangkap nga mahimo'g gikan sa materyal sa panahon sa reaksyon.
Sayup sa Gumagamit
Ang labi nga mga sample giproseso, mas taas ang peligro sa sayup. Kini dali nga mahitabo nga ang usa ka sampol gipangulohan sa sayup nga sudlanan o sa sayup nga maayo. Kini nga peligro mahimong labi nga pagkunhod sa dali nga mahibal-an nga pagmarka sa mga atabay. Pinaagi sa awtomatiko nga mga lakang sa dispensado, ang "tawhanon nga hinungdan", ie, mga sayup nga adunay kalabutan sa gumagamit, labi na sa pag-usab sa gamay nga reaksyon. Nanginahanglan kini mga plato nga igo nga sukod sa kalig-on nga magamit sa usa ka workstation. Ang mga gilakip nga barcode naghatag dugang nga makina - mabasa, nga nagpadali sa sample pagsubay sa tibuuk nga proseso.
Pagprograma sa Thermocycler
Ang pagprograma sa usa ka instrumento mahimong mapamatud-an nga pag-usik sa oras ingon usab sa sayup nga sayup. Ang lainlaing mga thermal cycler sa thermal nga magtinabangay aron pasimplehon kini nga proseso sa lakang ug, labing hinungdanon, aron kini luwas:
Sayon nga operasyon ug maayo nga giya sa gumagamit ang sukaranan sa episyente nga programming. Ang pagtukod sa kini nga pundasyon, ang administrasyon nga gipanalipdan sa password nga mapugngan ang kaugalingon nga mga programa gikan sa pag-usab sa ubang mga tiggamit. Kung daghang mga siklista (sa parehas nga tipo) ang gigamit, mapuslanon kini kung ang usa ka programa mahimong ibalhin direkta gikan sa usa ka instrumento sa lain pinaagi sa Usb o koneksyon. Ang software sa kompyuter nagtugot sa sentral ug luwas nga pagdumala sa mga programa, mga katungod sa gumagamit ug dokumento sa usa ka computer.
PCR RUN
Atol sa dagan, ang DNA gipadako sa reaksyon nga sudlanan, diin ang matag sample kinahanglan nga ipailalom sa managsama, makanunayon nga mga kahimtang sa reaksyon. Ang mga mosunod nga aspeto may kalabutan sa proseso:
Kontrol sa temperatura
Maayo kaayo nga katukma sa pagkontrol sa temperatura ug homogeneity sa Cycler Block ang basehan alang sa pag-ayo sa temperatura sa tanan nga mga sample. Ang taas nga kalidad sa pagpainit ug pagpabugnaw sa mga elemento (mga elemento sa pelolibo), ingon man ang paagi nga kini konektado sa block, mao ang mga pagdesisyon nga ang risgo sa mga discraceppancies sa temperatura nga nailhan nga "Epekto nga Epekto"
Aliwas
Ang mga konsentrasyon sa indibidwal nga mga sangkap sa reaksyon kinahanglan dili magbag-o sa dagan sa reaksyon tungod sa pagsabwag. Kung dili, posible nga gamay ra kaayoProdukto sa PCRmahimong makamugna, o wala bisan kinsa. Tungod niini hinungdanon nga maminusan ang pagsubli pinaagi sa pagsiguro sa usa ka luwas nga patik. Sa kini nga kaso, ang nainit nga takup sa thermocycler ug ang timbre sa barko nga nagtrabaho sa kamot. Ang lainlaing mga kapilian sa pagbugkos magamit alang saPCR Plate (Link: Artikulo sa Sealing), diin ang labing kaayo nga timbre nakab-ot pinaagi sa pagbugkos sa kainit. Ang uban nga mga pagsira mahimo usab nga angay, basta ang pagpit-os sa kontak sa Cycler Tid mahimong i-adjust sa pinili nga timbre.
Ang pag-standard sa proseso naa sa lugar aron mapanalipdan ang tukma ug mabag-o nga mga sangputanan sa taas nga panahon. Naglakip kini sa kanunay nga pagmentinar sa mga ekipo aron masiguro nga kini kanunay sa maayong kahimtang sa pagtrabaho. Ang tanan nga mga konsumedable kinahanglan nga kanunay nga taas nga kalidad sa tanan nga mga nahimo, ug ang ilang kasaligan nga magamit kinahanglan nga garantiya.
Pag-post sa Oras: Nob-29-2022