Pasiuna
Unsa ang pagkuha sa nukleyar acid?
Sa labing yano nga mga termino, ang pagkuha sa nukleyar nga nukleyar mao ang pagtangtang sa RNA ug / o DNA gikan sa usa ka sample ug sa tanan nga labi nga dili kinahanglan. Ang proseso sa pagkuha nagpagawas sa mga nucleic acid gikan sa usa ka sample ug naghatag kanila sa porma sa usa ka concentrate nga elacate, libre gikan sa mga diluents ug mga kontaminado nga makaapekto sa bisan unsang mga aplikasyon sa danaam.
Mga aplikasyon sa pagkuha sa nucleic acid
Ang mga gihinlo nga mga nukleyar nga asido gigamit sa lainlaing mga aplikasyon, gikan sa daghang lainlaing mga industriya. Ang pag-atiman sa panglawas tingali ang lugar diin gigamit kini nga kadaghanan, nga adunay gihinlo nga RNA ug DNA nga gikinahanglan alang sa usa ka host sa lainlaing mga katuyoan sa pagsulay.
Ang mga aplikasyon sa pagkuha sa nucleic acid sa pag-atiman sa panglawas naglakip sa:
- PCR ug QPCR PIPLIFICIFICATION
- Sunod nga henerasyon nga pagsunud (NGS)
- Pag-amping-based SNP Genotyping
- Generay nga nakabase sa genotyping
- pagpugong sa pagdugmok sa enzyme
- pag-analisar gamit ang pag-usab sa mga enzyme (eg ligigation ug cloning)
Adunay usab uban pang mga uma nga labi pa sa pag-atiman sa panglawas diin gigamit ang pagkuha sa Nucleic acid, lakip ang apan dili limitado sa mga pagsulay sa amahan, mga forensics ug genomics.
Usa ka Mubo nga Kasaysayan sa Pagkuha sa Nukleyon
Pagkuha sa DNANagpadayon ang mga petsa sa layo nga paagi, uban ang una nga nahibal-an nga pag-inusara nga gihimo sa usa ka doktor sa Switzerland nga ginganlag Friedrich Miescher kaniadtong 1869. Naglaum si Miescher sa mga sukaranan nga komposisyon sa mga selyula. Pagkahuman napakyas sa mga lymphocytes, nakuha niya ang usa ka krudo nga nag-agay sa DNA gikan sa mga leucocytes nga nakit-an sa PUS sa mga gilabay nga mga bendahe. Gibuhat niya kini pinaagi sa pagdugang acid ug dayon ang alkali sa selyula nga mobiya sa cytoplasm sa cell, ug dayon nagpalambo sa usa ka protocol aron mabulag ang DNA sa ubang mga protina.
Pagkahuman sa panukiduki ni Miescher's Ground-Breaking, daghang uban pang mga siyentipiko ang nagpadayon sa pag-uswag ug pagpalambo sa mga pamaagi aron maputli ug limpyohan ang DNA. Si Edwin Joseph Cohn, usa ka siyentipiko sa protina nagpalambo sa daghang mga teknik alang sa paglimpyo sa protina sa panahon sa WW2. Siya ang responsable sa pag-ilog sa serum albumin nga bahin sa plasma sa dugo, nga hinungdanon sa pagpadayon sa osmotic pressure sa mga ugat sa dugo. Kini hinungdanon alang sa pagpadayon nga buhi sa mga sundalo.
Niadtong 1953 si Francis crick, kauban si Rosalind Franklin ug James Watson, nagtino sa istruktura sa DNA, nga gipakita nga kini gilangkuban sa duha nga mga tisa sa nucleic acid nucleotides. Kini nga pagkadiskobre sa paglapas nagpalihok sa dalan alang sa Meselson ug Stahl, nga nakalahutay sa usa ka Dayidad nga gradient centrifugation nga gikan sa Semi-Conservative nga pagtambal sa DNA sa ilang 1958 nga eksperimento.
Mga teknik sa pagkuha sa nucleic acid
Unsa ang 4 nga mga yugto sa pagkuha sa DNA?
Ang tanan nga mga pamaagi sa pagkuha pabukalan sa parehas nga sukaranan nga mga lakang.
Pagbabag sa cell. Kini nga yugto, nga nailhan usab nga lysis sa cell, naglangkit sa pagbungkag sa bungbong sa cell ug / o sa cell membrane, sa pag-order sa pag-order sa mga intra-cellular fluids nga adunay mga nucleic acid nga interes.
Pagtangtang sa dili gusto nga mga basura. Naglakip kini sa mga lamad nga lamad, protina ug uban pang dili gusto nga mga nucleic acid nga mahimong makabalda sa mga aplikasyon sa pag-ulan.
Paglain. Adunay usa ka gidaghanon sa lainlaing mga paagi aron ihimulag ang mga nucleic acid nga interes gikan sa malinis nga lysate nga imong gibuhat, nga nahulog sa taliwala sa duha ka mga nag-unang mga kategorya: Solidas nga nakabase sa solusyon (tan-awa ang sunod nga seksyon).
Konsentrasyon. Pagkahuman sa mga nukleyar nga asido nga nahilayo gikan sa tanan nga uban nga mga kontaminado ug mga diluents, gipresentar sila sa usa ka labi ka hinungdan nga kasinatian.
Ang duha nga mga matang sa pagkuha
Adunay duha nga mga matang sa pagkuha sa nukleyar nga nukleyar - mga pamaagi nga gipasukad sa solusyon ug mga solidong pamaagi sa estado. Ang pamaagi nga gipasukad sa solorado nailhan usab nga pamaagi sa pagkuha sa kemikal, tungod kay naglangkit kini sa paggamit sa mga kemikal aron mabungkag ang cell ug pag-access sa nucleic nga materyal. Mahimo kini nga gamiton bisan ang mga organikong compound sama sa Phenol ug chloroform, o dili kaayo makadaot ug busa labi nga girekomenda nga mga inorganic compound sama sa proteinase k o silica gel.
Mga panig-ingnan sa lainlaing mga pamaagi sa pagkuha sa kemikal aron mabungkag ang usa ka cell nga naglakip sa:
- Osmotic rupturing sa lamad
- Enzymatic Digestion sa Cell Wall
- Solubilisasyon sa membrane
- uban ang mga Sakit
- sa pagtambal sa alkali
Ang mga solido nga pamaagi sa Estado, nga nailhan usab nga mga pamaagi sa mekanikal, naglangkit sa pagpahimulos kung giunsa ang DNA makig-uban sa usa ka lig-on nga substrate. Pinaagi sa pagpili sa usa ka bead o molekula nga ihigot sa DNA apan dili ang pag-analisar, posible nga magbulag sa duha. Mga panig-ingnan sa mga pamaagi sa pagkuha sa solid-phase lakip na ang paggamit sa silica ug magnetic kuwarta.
Gipasabut ang pagkuha sa magnetic bead
Ang pamaagi sa pagkuha sa magnetic bead
Ang potensyal alang sa pagkuha gamit ang magnetic beads una nga giila sa usa ka patent sa US nga gisang-at ni Trevor Hawkins, alang sa Institute Institution Institution. Giila kini nga patente nga posible nga makuha ang genetic nga materyal pinaagi sa paggapos niini sa usa ka solidong tagadala sa suporta, nga mahimong usa ka magnetic bead. Ang prinsipyo mao nga gigamit nimo ang usa ka labi ka maayo nga nagtrabaho nga magnetic bead diin ang genetic nga materyal nga ihigot, nga mahimo nga mahimulag sa usa ka supernatant pinaagi sa pag-aplay sa usa ka sulud sa sulud sa sulud.
Ngano nga gamiton ang pagkuha sa magnetic bead?
Ang teknolohiya sa pagkuha sa magnetic bead nahimo'g labi ka kaylap, tungod sa potensyal nga kini naghupot alang sa paspas ug episyente nga pamaagi sa pagkuha. Sa bag-ohay nga mga panahon adunay mga pag-uswag sa mga labi nga nagtrabaho nga mga magnetic beads nga adunay angay nga mga sistema sa buffer, nga naghimo sa posible nga pag-automation sa nucleic acid ug hapsay nga kapanguhaan. Usab, ang mga pamaagi sa pagkuha sa magnetic bead wala mag-apil sa mga lakang sa sentripolasyon nga mahimong hinungdan sa mga pwersa sa paggunting nga naguba ang mas taas nga piraso sa DNA. Kini nagpasabut nga ang labi ka mga strand sa DNA nagpabilin nga dili buut, nga hinungdanon sa pagsulay sa genomics.
Post Oras: Nob-25-2022