Per a reaccions d'amplificació reeixides, és necessari que els components de la reacció individuals estiguin presents a la concentració correcta en cada preparació. A més, és important que no es produeixi cap contaminació.
Especialment quan s'han de configurar moltes reaccions, s'ha establert per preparar una anomenada mescla mestra en lloc de pipetar cada reactiu per separat a cada recipient. Hi ha mescles preconfigurades disponibles comercialment, en les quals només s'afegeixen components específics de la mostra (imprimació) i aigua. Alternativament, la mescla magistral la podeu preparar vosaltres mateixos. En ambdues variants, la barreja es distribueix a cada recipient de PCR sense plantilla i la mostra d'ADN individual s'afegeix per separat al final.
L'ús d'una mescla mestra té diversos avantatges: en primer lloc, es redueix el nombre de passos de pipeta individual. D'aquesta manera, tant el risc d'errors de l'usuari durant el pipeteig com el risc de contaminació es minimitzen i, per descomptat, s'estalvia temps. En principi, la precisió del pipeteig també és més alta, ja que es dosifiquen volums més grans. Això és fàcil d'entendre quan es comproven les dades tècniques de les pipetes: com més petit sigui el volum dosificat, més grans poden ser les desviacions. El fet que tots els preparats provinguin del mateix recipient té un efecte positiu en l'homogeneïtat (si es barregen bé). Això també millora la reproductibilitat dels experiments.
Quan es prepara la mescla mestra, s'ha d'afegir almenys un 10% de volum addicional (per exemple, si es necessiten 10 preparacions, calculeu-les a partir d'11), de manera que fins i tot l'últim recipient s'ompli correctament. D'aquesta manera, es poden compensar les (lleus) imprecisions de pipeta i l'efecte de la pèrdua de mostra en dosificar solucions que contenen detergent. Els detergents estan continguts en solucions enzimàtiques, com ara polimerases i mescles mestres, provocant la formació d'escuma i residus a la superfície interior de la superfície normal.puntes de pipeta.
Segons l'aplicació i el tipus de líquid a dispensar, s'ha d'escollir la tècnica de pipeteig correcta (1) i seleccionar l'equip adequat. Per a solucions que contenen detergents, es recomana un sistema de desplaçament directe o les puntes de pipeta anomenades de "baixa retenció" com a alternativa a les pipetes amb coixí d'aire. L'efecte dePunta de PIPETA ACEes basa en una superfície especialment hidròfoba. Els líquids que contenen detergents no deixen una pel·lícula de residus a l'interior i a l'exterior, de manera que es pot minimitzar la pèrdua de solució.
A més de la dosificació exacta de tots els components, també és important que no es produeixi contaminació dels preparats. No n'hi ha prou amb utilitzar consumibles d'alta puresa, perquè el procés de pipeteig en una pipeta de coixí d'aire pot produir aerosols que romanen a la pipeta. L'ADN que pot contenir l'aerosol es pot transferir d'una mostra a una altra en el següent pas de pipeta i, per tant, conduir a la contaminació. Els sistemes de desplaçament directe esmentats anteriorment també poden minimitzar aquest risc. Per a les pipetes amb coixí d'aire, té sentit utilitzar puntes de filtre per protegir el con de la pipeta retenint esquitxades, aerosols i biomolècules.
Hora de publicació: 06-12-2022