L’estandardització dels processos inclou la seva optimització i posterior establiment i harmonització, permetent un rendiment òptim a llarg termini, independent de l’usuari. L’estandardització garanteix resultats d’alta qualitat, així com la seva reproductibilitat i comparabilitat.
L’objectiu de la PCR (clàssica) és la generació d’un resultat fiable i reproduïble. Per a determinades aplicacions, el rendiment delProducte PCRtambé és rellevant. Per a aquestes reaccions, cal tenir cura de garantir que les mostres no estiguin compromeses i que el flux de treball de PCR es mantingui estable. Concretament, això es tradueix en minimitzar la introducció de contaminacions que podrien provocar resultats falsos positius o falsos o fins i tot inhibir la reacció de PCR. A més, les condicions de reacció haurien de ser el més idèntiques possibles per a cada mostra individual dins d’una execució i també ser transferibles a reaccions posteriors (del mateix mètode). Es refereix a la composició de les reaccions i al tipus de control de la temperatura del ciclista. Per descomptat, s’han d’evitar els errors d’usuari.
A continuació, demostrarem els reptes que es troben durant la preparació i durant tota la PCR i els enfocaments de solucions que existeixen respecte als instruments i consumibles utilitzats per a la normalització dels fluxos de treball PCR.
Preparació de la reacció
La dispensació de components de reacció a vasos o plaques de PCR, respectivament, inclou múltiples reptes que s’han de superar:
Condicions de reacció
La dosificació exacta i precisa dels components individuals és indispensable quan s’adreça a les condicions de reacció més idèntiques possibles. A més d’una bona tècnica de canonades, és fonamental seleccionar l’eina adequada. Les mescles mestres de PCR contenen freqüentment substàncies que augmenten la viscositat o generen escuma. Durant el procés de canalització, aquests condueixen a la humectació substancial delConsells de pipeta, reduint així la precisió de la canalització. L’ús de sistemes de dispensació directa o puntes de pipeta alternatives que són menys propenses a la humectació pot millorar la precisió i la precisió del procés de canalització.
Contaminacions
Durant el procés de dispensació, es generen aerosols que, si es permeten arribar a l'interior de la pipeta, poden contaminar una altra mostra durant el següent pas de canonades. Es pot prevenir mitjançant les puntes de filtre o sistemes de desplaçament directe.
Consumibles com araconsells, els vaixells i plaques que s’utilitzen al flux de treball PCR no han de contenir substàncies que comprometin la mostra o falsifiquin el resultat. Aquests inclouen ADN, DNases, RNases i inhibidors de la PCR, així com components que podrien filtrar el material durant la reacció: substàncies conegudes com a leachables.
Error d'usuari
Com més mostres es processen, més gran és el risc d’error. Es pot produir fàcilment que una mostra es pipa al vaixell equivocat o al pou equivocat. Aquest risc es pot reduir considerablement mitjançant un marcatge fàcilment discernible dels pous. Mitjançant l’automatització de passos de dispensació, es minimitzen el “factor humà”, IE, els errors i les variacions relacionades amb l’usuari, augmentant així la reproductibilitat, especialment en el cas de petits volums de reacció. Això requereix plaques d’estabilitat dimensional suficient per emprar -se en una estació de treball. Els codis de barres adjunts proporcionen una lectura addicional de màquina, que simplifica el seguiment de mostres durant tot el procés.
Programació del termociclista
Programació d’un instrument pot resultar que consumeix temps i també propens a errors. Diferents funcions del ciclista tèrmic de PCR funcionen junts per simplificar aquest pas del procés i, el més important, per fer -lo segur:
El funcionament fàcil i la bona orientació dels usuaris són la base de la programació eficient. Basant-se en aquesta fundació, l'administració d'usuaris protegida per contrasenya evitarà que els seus propis programes siguin alterats per altres usuaris. Si s’utilitzen diversos ciclers (del mateix tipus), és beneficiós si un programa es pot transferir directament d’un instrument a un altre mitjançant USB o connectivitat. El programari informàtic permet l’administració central i segura de programes, drets d’usuari i documents en un ordinador.
PCR Run
Durant la carrera, l’ADN s’amplifica al recipient de reacció, on cada mostra ha de ser sotmesa a condicions de reacció idèntiques i consistents. Els aspectes següents són rellevants per al procés:
Control de la temperatura
L’excel·lent precisió en el control de la temperatura i l’homogeneïtat del bloc ciclista són la base per al condicionament de la temperatura de totes les mostres. L’elevada qualitat dels elements de calefacció i refrigeració (elements Peltier), així com la forma en què es connecten al bloc, són els factors decisius que determinaran el risc de discrepàncies de temperatura conegudes com a “efecte de vora”
Evaporació
Les concentracions dels components de reacció individuals no han de canviar al llarg de la reacció per evaporació. En cas contrari, és possible que molt pocProducte PCRes pot generar o cap. Per tant, és crucial minimitzar l’evaporació garantint un segell segur. En aquest cas, la tapa escalfada del termociclista i el segell del vaixell funcionen de la mà. Hi ha diferents opcions de segellat per aPlaques PCR (enllaç: article de segellat), per la qual cosa s’aconsegueix el millor segell mitjançant el segellat de calor. També poden ser adequats altres tancaments, sempre que la pressió de contacte de la tapa del ciclador es pugui ajustar al segell seleccionat.
La normalització del procés està en marxa per tal de salvaguardar els resultats precisos i reproduïbles a llarg termini. Inclou un manteniment regular de l'equip per assegurar -se que sempre està en bon estat de treball. Tots els consumibles han de tenir una qualitat constantment alta en tots els lots produïts i la seva disponibilitat fiable s’ha de garantir.
Posat Post: 29 de novembre-2022