Com segellar una placa PCR

Introducció

Plaques de PCR, un element bàsic del laboratori durant molts anys, s'estan fent encara més freqüents en l'entorn modern a mesura que els laboratoris augmenten el seu rendiment i utilitzen cada cop més l'automatització dins dels seus fluxos de treball. Assolir aquests objectius tot preservant la precisió i la integritat dels experiments pot ser difícil. Una de les àrees comunes on es poden introduir errors és amb el segellatPlaques de PCR, amb una tècnica deficient que permet l'evaporació de les mostres, alterant el pH i, per tant, alterant les funcions enzimàtiques, i convidant a la contaminació. Aprendre a segellar aPlaca de PCRelimina correctament aquests riscos i garanteix resultats reproductibles.

Trobeu el segell adequat per a la vostra placa PCR

Tapes de plaques vs. segells de pel·lícula vs. tapes
Gorressón una bona manera de segellar el vostre plat amb un segell hermètic, alhora que us ofereix la flexibilitat de desenganxar i tornar a segellar el plat amb molta facilitat sense cap residu. Tanmateix, les gorres tenen un parell d'inconvenients clau.

En primer lloc, haureu de comprar la tapa específica que sigui compatible, la qual cosa fa que no siguin versàtils. Haureu d'assegurar-vos que la tapa que trieu s'ajusti a la placa, que depèn del seu fabricant, i triar una cúpula o una plana en funció del termociclador que utilitzeu.

En segon lloc, aplicar els taps a la placa pot ser molt repetitiu i tediós, amb el risc de contaminació creuada si poses el tap equivocat al pou equivocat.

Tot i que els segells de pel·lícula són menys flexibles pel que fa a l'eliminació i la substitució, són molt versàtils, ja que s'adaptaran a qualsevol tipus de placa de PCR, sense tenir en compte qui sigui el fabricant. Simplement es poden tallar a mida, fent-los molt efectius.

Una altra opció és una tapa de plat. Aquests ofereixen menys protecció que els taps i els segells, i només s'utilitzen principalment per a cobertures a curt termini per evitar la contaminació.

Segells de pel·lícula òptica vs

Tant si necessiteu un segell òptic, transparent o unpel·lícula de paper d'aluminisegellar el vostre plat es decideix pel vostre format experimental.Pel·lícules de segellat òpticsón transparents per permetre observar les mostres, tot protegint-les i evitant l'evaporació. També són especialment útils en experiments de qPCR que impliquen fer mesures de fluorescència molt precises directament des de la placa, en aquest cas necessitareu una pel·lícula de segellat que filtri la menor fluorescència possible. És important assegurar-se que el segell o la tapa que utilitzeu tingui un nivell de claredat òptica prou alt per garantir que les lectures siguin precises.

Les pel·lícules d'alumini són adequades per a qualsevol mostra que sigui sensible a la llum o que s'hagi d'emmagatzemar a una temperatura inferior a 80 °C. Per aquest motiu, la majoria de mostres destinades a l'emmagatzematge a llarg termini requeriran una pel·lícula d'alumini. Les pel·lícules d'alumini també són perforables, cosa que és útil per examinar pous individuals o per transferir mostres mitjançant agulles. Això pot passar manualment o com a part d'una plataforma robòtica.

Tingueu en compte també que les substàncies agressives que inclouen àcids, bases o dissolvents requeriran un segell que els pugui suportar, en aquest cas és probable que sigui més adequat un segell de làmina.

Adhesiu vs. Pel·lícula de segellat tèrmic
Segell de pel·lícula adhesivasón molt senzills i fàcils d'aplicar. Tot el que necessiteu és que un usuari apliqui el segell a la placa i utilitzeu una eina d'aplicació senzilla per pressionar i formar un segell hermètic.

Els segellats tèrmics són més avançats, proporcionant un segell més durador que ha reduït les taxes d'evaporació en comparació amb un segell adhesiu convencional. Aquesta opció és adequada si voleu emmagatzemar mostres a llarg termini, tot i que això inclou un requisit addicional per a l'equip de segellat de plaques.

Com segellar una placa PCR

Mètode de segellat de plaques

Autoadhesiu

1. Assegureu-vos que esteu treballant en una superfície de treball plana i estable

2. Traieu la pel·lícula del seu embalatge i traieu el suport

3. Col·loqueu amb cura el segell a la placa, mentre assegureu-vos que tots els pous estiguin tapats.

4. Utilitzeu una eina aplicadora per aplicar pressió a través de la placa. Comenceu des d'un extrem i aneu cap a l'altre, pressionant uniformement

5. Repetiu-ho moltes vegades

6. Executeu l'aplicador al voltant dels pous exteriors, per assegurar-vos que també estiguin ben tancats.

Segells tèrmics

Els segellats tèrmics funcionen fonent la pel·lícula a la vora de cada pou, amb l'ajuda d'un segellador de plaques. Per utilitzar un termosegellador, consulteu les instruccions proporcionades pel fabricant de l'equip. Assegureu-vos que el fabricant del qual proveïu el vostre equip sigui de bona reputació, ja que és molt important que el segell sigui adequat, efectiu i estanc.

Consells superiors de segellat de plaques

a. Quan apliqueu pressió al segell, aneu en direccions horitzontals i verticals per garantir un segellat adequat

b. Sempre és una bona pràctica fer una prova de tot el que esteu fent, i això no és diferent amb el segellat de plaques. Prova amb una placa buida abans d'utilitzar-ne una amb mostres.

c. Quan feu la prova, traieu el segell i comproveu que l'adhesiu s'ha enganxat correctament, sense buits. Hi ha una representació visual d'això al primer document de referència. Si no heu segellat la placa correctament, quan traieu el segell hi haurà espais on l'adhesiu no s'hagi unit completament a la placa.

d. Per a l'enviament i el transport de mostres, és possible que us sigui útil aplicar un segell de plàstic a la part superior del segell d'alumini per a una protecció addicional (especialment contra les perforacions).

e. Assegureu-vos sempre que no hi hagi cops ni arrugues quan apliqueu la pel·lícula, ja que provocaran fuites i evaporació.