Quan es pipetegen volums de 0,2 a 5 µL, la precisió i la precisió del pipet són de la màxima importància, una bona tècnica de pipeteig és essencial perquè els errors de manipulació són més evidents amb volums petits.
A mesura que s'està centrant més en la reducció de reactius i costos, hi ha una gran demanda de volums més petits, per exemple, per a la preparació de PCR Mastermix o reaccions enzimàtiques. Però pipetar volums petits de 0,2 a 5 µL planteja nous reptes per a la precisió i la precisió del pipeteig. Els punts següents són essencials:
- Mida de la pipeta i la punta: trieu sempre la pipeta amb el volum nominal més baix possible i la punta més petita per mantenir el coixí d'aire el més petit possible. Quan pipeteu 1 µL, per exemple, trieu una pipeta de 0,25-2,5 µL i una punta que coincideixi en lloc d'una pipeta d'1-10 µL.
- Calibratge i manteniment: és essencial que les vostres pipetes estiguin correctament calibrades i mantingudes. Els petits ajustos i les peces trencades en una pipeta provoquen un augment massiu dels valors d'error sistemàtics i aleatoris. Un calibratge segons la norma ISO 8655 s'ha de fer un cop l'any.
- Pipetes de desplaçament positiu: comproveu si teniu una pipeta de desplaçament positiu amb un rang de volum baix al vostre laboratori. En general, l'ús d'aquest tipus de pipeta condueix a un millor resultat de pipeta en termes d'exactitud i precisió que amb les pipetes clàssiques de coixí d'aire.
- Intenteu utilitzar volums més grans: podeu considerar diluir la vostra mostra per pipetar volums més grans amb la mateixa quantitat a la reacció final. Això pot reduir els errors de pipeteig amb volums de mostra molt petits.
A més d'una bona eina, l'investigador ha de tenir una molt bona tècnica de pipeteig. Presteu especial atenció als passos següents:
- Enganxament de la punta: no encaixeu la pipeta a la punta, ja que això pot danyar l'extrem de la punta fina i provocar que el feix de líquid es redirigeixi o danyar l'orifici. Només apliqueu una lleugera pressió quan connecteu una punta i utilitzeu una pipeta amb un con de punta amb molla.
- Sostenint la pipeta: No agafeu la pipeta a la mà mentre espereu la centrífuga, el ciclador, etc. L'interior de la pipeta s'escalfarà i farà que el coixí d'aire s'expandeixi, provocant desviacions del volum establert en pipetejar.
- Pre-humectació: La humidificació de l'aire a l'interior de la punta i la pipeta prepara la punta per a la mostra i evita l'evaporació en aspirar el volum de transferència.
- Aspiració vertical: Això és molt important quan es manipulen petits volums per evitar l'efecte capil·lar que es produeix quan la pipeta es manté en angle.
- Profunditat d'immersió: Submergeix la punta el menys possible per evitar que el líquid entri a la punta a causa de l'efecte capil·lar. Regla general: com més petit sigui la punta i el volum, menor serà la profunditat d'immersió. Recomanem un màxim de 2 mm per pipetejar volums petits.
- Dispensació amb un angle de 45°: es garanteix un flux òptim del líquid quan la pipeta es manté en un angle de 45°.
- Contacte amb la paret del recipient o la superfície del líquid: només es poden dispensar correctament volums petits quan la punta es subjecta contra la paret del recipient o submergida en líquid. Fins i tot l'última gota de la punta es pot dispensar amb precisió.
- Bufat: és obligatori un bufat després de dispensar volums baixos per dispensar fins i tot l'última gota de líquid present a la punta. L'explosió també s'ha de dur a terme contra la paret del vaixell. Aneu amb compte de no introduir bombolles d'aire a la mostra quan feu un bufat a la superfície del líquid.
Hora de publicació: 18-feb-2021