Com canalitzar els volums petits amb pipetes manuals de mà

A mesura que s’està centrant més en la reducció de reactius i costos, els volums menors tenen una gran demanda, per exemple, per a la preparació de les reaccions de PCR Mastermix o enzimàtics. Però la canalització de petits volums de 0,2 a 5 µL estableix nous reptes per a la precisió i la precisió de la canalització. Els punts següents són essencials:

1. Pipeta i mida de la punta: Trieu sempre la pipeta amb el volum nominal més baix possible i la punta més petita per mantenir el coixí d’aire el més petit possible. Quan es pipa 1 µL, per exemple, trieu una pipeta de 0,25 - 2,5 µL i una punta que coincideixi en lloc d'una pipeta d'1 - 10 µL.
2. Calibració i manteniment: és fonamental que les pipetes siguin calibrades i mantingudes correctament. Els petits ajustaments i les parts trencades en una pipeta condueixen a un augment massiu dels valors d’error sistemàtics i aleatoris. Una calibració segons ISO 8655 s’ha de realitzar un cop a l’any.
3. Pipetes de desplaçament positives: comproveu si teniu una pipeta de desplaçament positiva amb un rang de volum baix al vostre laboratori. En general, l'ús d'aquest tipus de pipetes condueix a un millor resultat de canonades en termes de precisió i precisió que amb les canonades clàssiques de chushion d'aire.
4. Proveu d’utilitzar volums més grans: podeu considerar diluir la mostra a la canalització de volums més grans amb la mateixa quantitat en la reacció final. Això pot reduir els errors de canalització amb volums de mostra molt reduïts.

A més d’una bona eina, l’investigador ha de tenir una molt bona tècnica de canonades. Presta especial atenció als passos següents:

1. Fixació de la punta: no emboliqueu la pipeta a la punta, ja que pot danyar l'extrem de la punta fina que fa que es redirigeixi el feix líquid o danyi l'orifici. Apliqueu només la pressió de la llum quan enganxeu una punta i utilitzeu una pipeta amb un con de punta carregada amb molla.
2. Solgant la pipeta: no subjeteu la pipeta a la mà mentre espereu la centrífuga, el ciclista, etc. L’interior de la pipeta s’escalfarà i conduirà el coixí d’aire per expandir -se amb les desviacions del volum establert quan es canalitzi.
3. Pre-Wetting: La humidificació de l’aire dins de la punta i la pipeta prepara la punta per a la mostra i evita l’evaporació quan s’aspira el volum de transferència.
4. Aspiració vertical: això és molt important a l’hora de manejar volums petits per evitar l’efecte capil·lar que es produeix quan la pipeta es manté en un angle.
5. Profunditat d’immersió: submergiu la punta el mínim possible per evitar que l’entrada de líquid entri a la punta a causa de l’efecte capil·lar. Regla general: Com més petita sigui la punta i el volum, més baixa és la profunditat d’immersió. Recomanem un màxim de 2 mm quan es pipilin volums petits.
6. Dispensació a 45 ° Angle: el flux òptim del líquid es garanteix quan la pipeta es manté a un angle de 45 °.
7. Poseu -vos en contacte amb la paret del vaixell o la superfície líquida: els volums petits només es poden distribuir correctament quan la punta es manté contra la paret del vas o immers en líquid. Fins i tot la darrera gota de la punta es pot distribuir amb precisió.
8. Blow-out: un cop de sortida és obligatori després de dispensar volums baixos per dispensar fins i tot la darrera gota de líquid present a la punta. El cop d’ull també s’ha de dur a terme contra la paret del vaixell. Tingueu cura de no portar bombolles d’aire a la mostra quan realitzeu un cop d’ull a la superfície del líquid.