Cryovialsse obično koriste za kriogeno skladištenje ćelijskih linija i drugih kritičnih bioloških materijala, u rosima ispunjenim tečnim azotom.

Postoji nekoliko faza uključenih u uspješno očuvanje ćelija u tečnom azotu. Iako je osnovni princip sporo zamrzavanje, tačna tehnika korištena ovisi o vrsti ćelije i krioprotektanta koji se koriste. Postoji nekoliko sigurnosnih razmatranja i najboljih praksi koje treba uzeti u obzir pri skladištenju ćelija na tako niskim temperaturama.

Ovaj post ima za cilj dati pregled kako se kriovini skladište u tečnom azotu.

Šta su kriovialsi

Cryovials su male, zatvorene bočice dizajnirane za pohranu uzoraka tekućine na izuzetno niskim temperaturama. Osiguravaju da se ćelije sačuvane u krioprotektantima ne dođu u direktan kontakt sa tečnim azotom, minimiziraju rizik od preloma za stanične preloge dok još uvijek ima koristi od ekstremnog efekta hlađenja tečnog dušika.

Boljine su obično dostupne u nizu volumena i dizajna - mogu biti interno ili izvana navojni ravnim ili zaobljenim dnima. Dostupni su i sterilni i nesterilni formati.

Ko koristiJrovialcida pohranjuju ćelije u tečni azot

Asortiman NHS i privatnih laboratorija, kao i istraživačke institucije specijalizirane za bankiranje krvi, epitelne ćelije biologije, imunologije i matične ćelije za biologiju koriste krio knjiženje do ćelija kriopresa.

Stanice sačuvane na ovaj način uključuju B i T ćelije, Cho ćelije, ćelije za hematopoetniju stabljike i predloga, hibridome, crijevne ćelije, makrofage, mesenšimalne stanice, monocite, minocite, monocite, monocite, monocite, monocite, monocite, minocite, monocite, monocite, minomike i pluripotentne matične stanice.

Pregled kako pohraniti kriovialce u tečnom azotu

Cryoberservacija je proces koji čuva ćelije i druge biološke konstrukcije hlađenjem ih na vrlo niske temperature. Stanice se mogu pohraniti u tečni azot godinama bez gubitka održivosti ćelije. Ovo je prikaz zaposlenih procedura.

Priprema ćelije

Točna metoda za pripremu uzoraka varirat će ovisno o vrsti ćelije, ali općenito, ćelije se sakupljaju i centrifugiraju za razvoj peleta bogatog ćelija. Ovaj se pelet tada resuspendiran u supernatantnom pomiješanom sa krioprotektatom ili krio konzervatorskom medijima.

CryoberSvaling Medium

Ovaj je medij zaposlen za očuvanje ćelija u okruženjima sa niskim temperaturama, oni će biti izloženi inhibicijom formiranja unutarnjih i vanselularnih kristala i otuda ćeliju ćeliju. Njihova uloga je osigurati sigurno, zaštitno okruženje za ćelije i tkive tokom procesa smrzavanja, skladištenja i odmrzavanja.

Medijum poput svježe smrznute plazme (FFP), hepariniziran plasmaly rješenje ili serum, besplatna rješenja za životinje pomiješana su sa krioprotektama kao što su dimetil sulphoksid (DMSO) ili glicerol.

Ponovno likvidan uzorak pelet je alihotiran u polipropilenski kriovials kao što suSuzhou Ace Biomedicinska kompanija Cryogeni bočice za pohranu.

Važno je da ne prepuštaju kriovialce jer će to povećati rizik od pucanja i moguće oslobađanje sadržaja (1).

Kontrolirana stopa zamrzavanja

Općenito, za uspješan krio konzervaciju ćelija zaposlen je spor kontrolirani brzina smrzavanja.

Nakon što su uzorci uništeni u kriogene bočice, postavljeni su na mokri led ili u hladnjaku od 4 ℃, a postupak smrzavanja se pokreće u roku od 5 minuta. Kao opći vodič ćelije se ohlade po stopi od -1 do -3 u minuti (2). To se postiže korištenjem programiranog hladnjaka ili postavljanjem bočica u izolirano kutiju postavljenu u -70 ° C do -90 ° C kontrolira zamrzivač.

Transfer do tečnog azota

Zamrznuti kriogene bočice se zatim prebacuju u tekućin tenk za dušik za neodređene periode koji imaju temperaturu manje od -135 ℃ se održava.

Ove ultra niske temperature mogu se dobiti uranjanjem u azotu tečnosti ili pare.

Faza tečne ili pare?

Poznato je skladištenje u tekućih faznog dušika za održavanje hladne temperature sa apsolutnom konzistencijom, ali se često ne preporučuje iz sljedećih razloga:

• Potreba za velikim količinama (dubina) tečnog azota koji je potencijalni rizik. Burns ili Asfiksija zbog toga je pravi rizik.
• Dokumentirani slučajevi unakrsne kontaminacije infektivnim agentima kao što su Aspergillus, HEP B i virusni namaz preko tečnog dušičnog medija (2,3)
• Potencijal za tečni azot koji će procuriti u bočice tokom uranjanja. Kada se ukloni iz skladišta i zagrijava se na sobnu temperaturu, azot se brzo širi. Slijedom toga, bočica se može slomiti kada se ukloni iz pohrane tečnog dušika, stvarajući opasnost od letećih krhotina i izloženosti sadržaju (1, 4).

Iz tih razloga, ultra-nisko skladištenje temperature najčešće je u fazi pare. Kada se uzorci moraju pohraniti u tekuću fazu, treba koristiti specijalizirani krifleksirani cijevi.

FAZA PAPORA u paru je da se može pojaviti gradijent vertikalne temperature što rezultira temperaturnim fluktuacijama između -135 ℃ i -190 ℃. To zahtijeva pažljivo i marljivo nadgledanje nivoa tečnog dušika i temperaturne varijacije (5).

Mnogi proizvođači preporučuju da kriovialsi su pogodni za pohranu do -135 ℃ ili za upotrebu samo u fazi pare.

Otapanje vaših krivoobersorenih ćelija

Postupak odmrzavanja je stresan za smrznutu kulturu, a potrebna je pravilno rukovanje i tehnika kako bi se osigurala optimalna održivost, oporavak i funkcionalnost ćelija. Točni protokoli odmrzavanja ovisit će o određenim tipovima ćelija. Međutim, brzo odmrzavanje smatra se standardnim za:

• Smanjite bilo kakav uticaj na ćelijski oporavak
• Pomoći u smanjenju vremena izlaganja rješavanjima prisutnim u zamrzavajućim medijima
• Smanjite bilo kakvu štetu od rekristalizacije leda

Vodene kupelji, kupelji za kupelji ili specijalizirani automatizirani instrumenti obično se koriste za uzorke odmrzavanja.

Najčešće je 1 ćelijska linija odmrzavala 1-2 minute, laganim vlasnim kupatilom u 37 ℃ dok se u bočici ne ostane samo mali dio leda u bočici prije nego što se opraju u presjednom mediju za rast.

Za neke ćelije poput sisara embriona, sporo zagrijavanje je neophodno za njihov opstanak.

Stanice su sada spremne za kulturu ćelije, izolaciju ćelije ili u slučaju hematopoetskih matičnih ćelija - studija održivosti za garantovanje integriteta donatorskih matičnih ćelija prije mijeloablitivne terapije.

Normalna je praksa za snimanje malih alikvota preplavljenog uzorka koji se koriste za izvedbu broja ćelije kako bi se utvrdila koncentracije ćelije za oblaganje u kulturi. Zatim možete procijeniti rezultate postupka izolacije ćelijskih izolacija i odrediti ćelijsku održivost.

Najbolje prakse za skladištenje kriovialsa

Uspješan krio konzervacija uzoraka pohranjenih u kriokialsima ovisi o mnogim elementima u protokolu, uključujući odgovarajuće skladište i vođenje evidencije.

• Split ćelije između lokacija za pohranu- Ako volumene dozvole, podijelite ćelije između bočica i pohranite ih na odvojene lokacije kako biste smanjili rizik od gubitka uzorka zbog kvarova opreme.
• Sprečiti unakrsnu kontaminaciju- Odlučite se za pojedinačne sterilne kriogene bočice ili autoklave prije naknadne upotrebe
• Za svoje ćelije koristite odgovarajuće veličine za svoje ćelije- bočice dolaze u rasponu količina između 1 i 5 ml. Izbjegavajte da se vija za prepuštanje smanjenja rizika od pucanja.
• Odaberite unutarnje ili eksterno navojene kriogene bočice- Interno navojne bočice preporučuju neki univerziteti za mjere sigurnosti - mogu spriječiti i zagađenje tokom punjenja ili kada se pohranjuju u tečni azot.
• Sprečiti curenje- Koristite bi-ubrizgane brtve oblikovane u vijku ili O-prstenove kako biste spriječili curenje i kontaminaciju.
• Koristite 2D barkode i vile za naljepnice- Da bi se osigurala sljedivost, bočice s velikim područjima pisanja omogućavaju svaku bočicu da bude adekvatan označen. 2D barkodovi mogu pomoći u upravljanju skladištenjem i vođenjem evidencije. Boja kodirane kapice su korisne za lakšu identifikaciju.
• Adekvatno održavanje skladištenja- Da bi se osiguralo da ćelije ne budu izgubljene, spremište bi trebale stalno pratiti temperaturu i nivo tekućine dušika. Alarmi trebaju biti opremljeni korisnicima grešaka.

Sigurnosne mjere opreza

Tečni azot postao je uobičajena praksa u modernom istraživanju, ali nosi rizik od ozbiljnih ozljeda ako se ne koristi pogrešno.

Pravilna lična zaštitna oprema (OZO) treba nositi da bi se smanjio rizik od smrzavanja, opekotina i drugih štetnih incidenata prilikom rukovanja tekućim azotom. Nositi

• Kriogene rukavice
• Laboratorijski kaput
• Potpuno zaštitni štit otporan na udar koji takođe pokriva vrat
• Cipele za zatvorene noge
• Pljuskova pregača od plastike

Tekući dušični hladnjaci trebaju biti stavljeni u dobro prozračene površine kako bi se smanjio rizik od asfiksija - izbjegli su isparivanje dušika i premještao atmosferski kisik. Velike pohrane volumena trebaju imati niske alarmne sisteme kisika.

Radeći u parovima prilikom rukovanja tekućim azotom idealan je i njena upotreba izvan normalnog radnog vremena treba biti zabranjena.

Kriovialsi za podršku vašem tijeku rada

BIOMEDIČKA TVRTKA SUZHOU ACE nudi širok izbor proizvoda koji zadovoljavaju vaše krioberzarsportne potrebe za različite vrste ćelija. Portfelj uključuje niz cevi kao i niz sterilnih kriovialsa.

Naši kriovialsi su:

• Laboratorijska kapa za vijku 0,5ml 1.5ml 2.0ml krioktial kriogene bočice konični donji kriotube sa brtvom

  ● 0,5ml, 1,5ml, 2.0ml specifikacije, sa suknjom ili bez suknje
  ● Konični ili samostojeći dizajn, sterilni ili nesterilni su dostupni
  ● Cijevi za vijke izrađene su od polipropilena medicinske klase
  ● PP kriotube bočice mogu se više puta zamrznuti i otapati
  ● Dizajn vanjskih kapa može smanjiti vjerojatnost kontaminacije tokom tretmana uzorka.
  ● Kriogene cijevi za vijke univerzalne vijke za upotrebu
  ● Cijevi odgovaraju najčešjim rotorima
  ● Cryogene cijevi za cijevi O-prstene odgovaraju standardnim 1 inčnim i 2-inčnim, 48well, 81well, 96well i 100well kutije za zamrzivač
  ● Autoklabilan na 121 ° C i zamrzavanje do -86 ° C

  Neop ne	Materijal	Zapremina	PoklopacBoja	Kom /Torba	Torbe / futrola
  ACT05-BL-N	PP	0,5ml	Crna, žuta, plava, crvena, ljubičasta, bijela	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ml	Crna, žuta, plava, crvena, ljubičasta, bijela	500	10
  Act15-BL-NW	PP	1.5ml	Crna, žuta, plava, crvena, ljubičasta, bijela	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ml	Crna, žuta, plava, crvena, ljubičasta, bijela	500	10