Kako pipetirati male količine s ručnim ručnim pipetama

Kako se više fokusira stavlja na smanjenje reagensa i troškova, manji sveski su u velikoj potražnji, npr. Za pripremu PCR MasterMix-a ili enzimskih reakcija. Ali pipetiranje malih količina od 0,2 - 5 μl postavlja nove izazove za tačnost i preciznost pipetiranja. Sljedeće tačke su bitne:

1. Pipette i tip vrhunci: Uvijek odaberite pipetu s najnižim mogućim nominalnim glasnoćima i najmanjim vrhom da bi se zračni jastuk zadržao što je moguće manje moguće. Kada pipetiranje 1 μl, odaberite pipetu od 0,25 - 2,5 μl i odgovarajući vrh, a ne 1 - 10 μl pipette.
2. Kalibracija i održavanje: Bitno je da su vaši pipeti pravilno kalibrirani i održavani. Mala podešavanja i slomljeni dijelovi na pipetu vode do masovnog povećanja sistemskih i nasumičnih vrijednosti grešaka. Kalibracija prema ISO 8655 mora se izvesti jednom godišnje.
3. Pipeti pozitivnih pomaka: Provjerite imate li pozitivnu pipetu za pomak sa niskim opsegom zapremine u vašoj laboratorija. Općenito, koristeći ovu vrstu pipete dovodi do boljeg cijene rezultata u pogledu tačnosti i preciznosti nego sa klasičnim pipetama za vazduh.
4. Pokušajte koristiti veće sveske: Možete razmišljati o razrjeđivanju vašeg uzorka da pipete veće sveske s iste količine u konačnoj reakciji. Ovo može smanjiti greške u pipetiranju s vrlo malim količinama uzorka.

Pored dobrog alata, istraživač mora imati vrlo dobru tehniku ​​pipetiranja. Posebnu pažnju obratite sledećim koracima:

1. Pričvršćivanje sa vrhom: Ne zaglavite pipetu na vrh, jer to može oštetiti kraj sitnog vrha, uzrokuje preusmjeravanje ili oštećenje tečnog vrha. Priložite samo lagani pritisak prilikom pričvršćivanja vrha i koristite pipetu sa opružnim konusnim vrhom.
2. Držeći pipette: Ne držite pipete u ruci dok čekate centrifugu, bicikliste itd. Unutrašnjost pipete zagrijat će se i voditi zračni jastuk da proširi odstupanja od postavljenog zapremine kada pipeting.
3. Unaprijed vlaženje: vlaženje zraka unutar vrha i pipete Priprema savjet za uzorak i izbjegava isparavanje prilikom težnje za jačinu zvuka prijenosa.
4. Vertikalna aspiracija: Ovo je vrlo važno pri rukovanju malim količinama kako bi se izbjegao kapilarni učinak koji se događa kada se pipeta drži pod uglom.
5. Dubina uranjanja: Pomaknite savjet što je manje moguće kako biste spriječili da tečnost unese u vrh zbog kapilarnog efekta. Pravilo palca: manji vrh i jačinu, niža dubina uranjanja. Preporučujemo maksimalno 2 mm prilikom pipetiranja malih količina.
6. Doziranje na uglu 45 °: optimalni protok tečnosti zagarantiran je kada se pipeta održava na uglu od 45 °.
7. Kontakt na zid plovila ili tekućinu površine: Mali volumeni mogu se pravilno izdati samo kada se vrh drži u zidu plovila ili uronjen u tečnost. Čak se i posljednji pad sa vrha može precizno dodijeliti.
8. Udaranje: puhanje je obavezno nakon doziranja niskih količina da biste oslobodili čak i posljednju kap tekućine prisutne u savjetu. Izvajanje bi trebalo izvesti i na zid plovila. Budite oprezni da ne dovodite mjehuriće zraka u uzorak prilikom izvođenja puhanja na tečnoj površini.