Cryovialsসাধারণত তরল নাইট্রোজেনে ভরা ডিওয়ারে সেল লাইন এবং অন্যান্য গুরুত্বপূর্ণ জৈবিক পদার্থের ক্রায়োজেনিক স্টোরেজের জন্য ব্যবহৃত হয়।

তরল নাইট্রোজেনে কোষের সফল সংরক্ষণের সাথে জড়িত বেশ কয়েকটি ধাপ রয়েছে। যদিও মূল নীতিটি একটি ধীর ফ্রিজ, নিযুক্ত সঠিক কৌশলটি কোষের ধরন এবং ব্যবহৃত ক্রিওপ্রোটেক্ট্যান্টের উপর নির্ভর করে। এই ধরনের কম তাপমাত্রায় কোষ সংরক্ষণ করার সময় বিবেচনায় নেওয়ার জন্য বেশ কয়েকটি নিরাপত্তা বিবেচনা এবং সর্বোত্তম অনুশীলন রয়েছে।

এই পোস্টের লক্ষ্য হল তরল নাইট্রোজেনে ক্রায়োভিয়ালগুলি কীভাবে সংরক্ষণ করা হয় তার একটি সংক্ষিপ্ত বিবরণ দেওয়া।

Cryovials কি

Cryovials হল ছোট, ক্যাপড শিশি যা অত্যন্ত কম তাপমাত্রায় তরল নমুনা সংরক্ষণের জন্য ডিজাইন করা হয়েছে। তারা নিশ্চিত করে যে ক্রিওপ্রোটেক্ট্যান্টে সংরক্ষিত কোষগুলি তরল নাইট্রোজেনের সাথে সরাসরি সংস্পর্শে আসে না, সেলুলার ফ্র্যাকচারের ঝুঁকি হ্রাস করে যখন এখনও তরল নাইট্রোজেনের চরম শীতল প্রভাব থেকে উপকৃত হয়।

শিশিগুলি সাধারণত বিভিন্ন ভলিউম এবং ডিজাইনে পাওয়া যায় - এগুলি অভ্যন্তরীণ বা বাহ্যিকভাবে ফ্ল্যাট বা গোলাকার বটম দিয়ে থ্রেড করা যেতে পারে। জীবাণুমুক্ত এবং অ জীবাণুমুক্ত বিন্যাস পাওয়া যায়।

যারা ব্যবহার করেসাইরোভিয়ালসতরল নাইট্রোজেনে কোষ সংরক্ষণ করা

এনএইচএস এবং প্রাইভেট ল্যাবরেটরিগুলির একটি পরিসর, সেইসাথে কর্ড ব্লাড ব্যাঙ্কিং, এপিথেলিয়াল সেল বায়োলজি, ইমিউনোলজি এবং স্টেম সেল বায়োলজিতে বিশেষজ্ঞ গবেষণা প্রতিষ্ঠানগুলি কোষগুলিকে ক্রিওপ্রিজার করার জন্য ক্রাইওভিয়াল ব্যবহার করে।

এইভাবে সংরক্ষিত কোষগুলির মধ্যে রয়েছে বি এবং টি কোষ, সিএইচও কোষ, হেমাটোপয়েটিক স্টেম এবং প্রোজেনিটর সেল, হাইব্রিডোমাস, অন্ত্রের কোষ, ম্যাক্রোফেজ, মেসেনকাইমাল স্টেম এবং প্রোজেনিটর সেল, মনোসাইটস, মাইলোমা, এনকে সেল এবং প্লুরিপোটেন্ট স্টেম সেল।

তরল নাইট্রোজেনে ক্রায়োভিয়ালগুলি কীভাবে সংরক্ষণ করবেন তার সংক্ষিপ্ত বিবরণ

Cryopreservation হল এমন একটি প্রক্রিয়া যা কোষ এবং অন্যান্য জৈবিক গঠনকে খুব কম তাপমাত্রায় ঠান্ডা করে সংরক্ষণ করে। কোষগুলিকে তরল নাইট্রোজেনে কয়েক বছর ধরে কোষের কার্যক্ষমতা নষ্ট না করে সংরক্ষণ করা যায়। এটি নিযুক্ত পদ্ধতির একটি রূপরেখা।

কোষ প্রস্তুতি

নমুনা প্রস্তুত করার সঠিক পদ্ধতি কোষের প্রকারের উপর নির্ভর করে পরিবর্তিত হবে, তবে সাধারণভাবে, কোষগুলিকে সংগ্রহ করা হয় এবং একটি কোষ-সমৃদ্ধ পেলেট বিকাশের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করা হয়। এই পেলেটটি তারপরে ক্রিওপ্রোটেক্ট্যান্ট বা ক্রায়োপ্রিজারভেশন মিডিয়ামের সাথে মিশ্রিত সুপারনেট্যান্টে পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়।

Cryopreservation মাধ্যম

এই মাধ্যমটি নিম্ন-তাপমাত্রার পরিবেশে কোষগুলিকে সংরক্ষণ করার জন্য নিযুক্ত করা হয় যা তারা অন্তঃকোষীয় এবং বহির্মুখী স্ফটিক গঠনে বাধা দেয় এবং তাই কোষের মৃত্যু হয়। তাদের ভূমিকা হল হিমায়িত, সংরক্ষণ এবং গলানো প্রক্রিয়ার সময় কোষ এবং টিস্যুগুলির জন্য একটি নিরাপদ, প্রতিরক্ষামূলক পরিবেশ প্রদান করা।

একটি মাধ্যম যেমন তাজা হিমায়িত প্লাজমা (FFP), হেপারিনাইজড প্লাজমালাইট দ্রবণ বা সিরাম-মুক্ত, প্রাণীর উপাদান-মুক্ত দ্রবণগুলিকে ক্রায়োপ্রোটেক্টেন্ট যেমন ডাইমিথাইল সালফক্সাইড (DMSO) বা গ্লিসারলের সাথে মিশ্রিত করা হয়।

পুনরায় তরল নমুনা পেলেট যেমন পলিপ্রোপিলিন cryovials মধ্যে aliquoted হয়Suzhou Ace বায়োমেডিকেল কোম্পানি Cryogenic স্টোরেজ শিশি.

ক্রায়োভিয়ালগুলিকে অতিরিক্ত না ভরাট করা গুরুত্বপূর্ণ কারণ এটি ক্র্যাকিংয়ের ঝুঁকি এবং বিষয়বস্তুগুলির সম্ভাব্য প্রকাশকে বাড়িয়ে তুলবে (1)।

নিয়ন্ত্রিত ফ্রিজ রেট

সাধারণভাবে, কোষের সফল ক্রাইওপ্রিজারভেশনের জন্য একটি ধীর নিয়ন্ত্রিত হিমায়িত হার নিযুক্ত করা হয়।

নমুনাগুলিকে ক্রায়োজেনিক শিশিগুলিতে আলাদা করার পরে, সেগুলিকে ভেজা বরফের উপর বা একটি 4℃ রেফ্রিজারেটরে রাখা হয় এবং 5 মিনিটের মধ্যে হিমায়িত করার প্রক্রিয়া শুরু হয়। একটি সাধারণ নির্দেশিকা হিসাবে, কোষগুলি প্রতি মিনিটে -1 থেকে -3 হারে ঠান্ডা হয় (2)। এটি একটি প্রোগ্রামেবল কুলার ব্যবহার করে বা -70°C থেকে -90°C নিয়ন্ত্রিত রেট ফ্রিজারে রাখা একটি উত্তাপযুক্ত বাক্সে শিশি রাখার মাধ্যমে অর্জন করা হয়।

তরল নাইট্রোজেনে স্থানান্তর করুন

হিমায়িত ক্রায়োজেনিক শিশিগুলি অনির্দিষ্টকালের জন্য একটি তরল নাইট্রোজেন ট্যাঙ্কে স্থানান্তরিত করা হয় যদি -135℃ এর কম তাপমাত্রা বজায় থাকে।

এই অতি-নিম্ন তাপমাত্রা তরল বা বাষ্প পর্যায়ে নাইট্রোজেনে নিমজ্জন দ্বারা প্রাপ্ত করা যেতে পারে।

তরল বা বাষ্প ফেজ?

তরল পর্যায়ে নাইট্রোজেনের সঞ্চয় পরম সামঞ্জস্যের সাথে ঠান্ডা তাপমাত্রা বজায় রাখার জন্য পরিচিত, তবে নিম্নলিখিত কারণে প্রায়শই সুপারিশ করা হয় না:

• তরল নাইট্রোজেনের বড় আয়তনের (গভীরতা) প্রয়োজন যা একটি সম্ভাব্য বিপদ। এই কারণে পোড়া বা শ্বাসরোধ করা একটি বাস্তব ঝুঁকি।
• সংক্রামক এজেন্ট যেমন অ্যাসপারগিলাস, হেপ বি এবং তরল নাইট্রোজেন মাধ্যমে ভাইরাল ছড়ানোর মাধ্যমে ক্রস-দূষণের নথিভুক্ত ঘটনাগুলি (2,3)
• নিমজ্জনের সময় শিশিতে তরল নাইট্রোজেন লিক হওয়ার সম্ভাবনা। যখন স্টোরেজ থেকে সরানো হয় এবং ঘরের তাপমাত্রায় উষ্ণ করা হয়, তখন নাইট্রোজেন দ্রুত প্রসারিত হয়। ফলস্বরূপ, তরল নাইট্রোজেন সঞ্চয়স্থান থেকে সরানো হলে শিশিটি ভেঙে যেতে পারে, উড়ন্ত ধ্বংসাবশেষ এবং বিষয়বস্তুর এক্সপোজার উভয় থেকে বিপত্তি তৈরি করে (1, 4)।

এই কারণে, অতি-নিম্ন তাপমাত্রার সঞ্চয়স্থান সাধারণত বাষ্প পর্যায়ে নাইট্রোজেনে থাকে। যখন নমুনাগুলি তরল পর্যায়ে সংরক্ষণ করতে হবে, বিশেষায়িত ক্রাইফ্লেক্স টিউবিং ব্যবহার করা উচিত।

বাষ্প পর্যায়ের নেতিবাচক দিক হল যে একটি উল্লম্ব তাপমাত্রা গ্রেডিয়েন্ট ঘটতে পারে যার ফলে -135℃ এবং -190℃ এর মধ্যে তাপমাত্রার ওঠানামা হয়। এর জন্য তরল নাইট্রোজেনের মাত্রা এবং তাপমাত্রার বৈচিত্র্যের সতর্ক ও পরিশ্রমী পর্যবেক্ষণ প্রয়োজন (5)।

অনেক নির্মাতারা সুপারিশ করেন যে ক্রায়োভিয়ালগুলি -135℃ পর্যন্ত স্টোরেজ বা শুধুমাত্র বাষ্প পর্যায়ে ব্যবহারের জন্য উপযুক্ত।

আপনার Cryopreserved কোষ thawing

গলানোর পদ্ধতিটি হিমায়িত সংস্কৃতির জন্য চাপযুক্ত, এবং কোষগুলির সর্বোত্তম কার্যকারিতা, পুনরুদ্ধার এবং কার্যকারিতা নিশ্চিত করার জন্য সঠিক পরিচালনা এবং কৌশল প্রয়োজন। সঠিক গলানোর প্রোটোকল নির্দিষ্ট কোষের প্রকারের উপর নির্ভর করবে। যাইহোক, দ্রুত গলানোর মান হিসাবে বিবেচিত হয়:

• সেলুলার পুনরুদ্ধারের উপর কোন প্রভাব হ্রাস
• হিমায়িত মিডিয়াতে উপস্থিত দ্রবণগুলির এক্সপোজার সময় কমাতে সহায়তা করুন
• বরফ পুনঃক্রিস্টালাইজেশন দ্বারা কোন ক্ষতি কমিয়ে

জল স্নান, পুঁতি স্নান, বা বিশেষ স্বয়ংক্রিয় যন্ত্রগুলি সাধারণত নমুনা গলাতে ব্যবহৃত হয়।

প্রায়শই 1টি সেল লাইন একবারে 1-2 মিনিটের জন্য গলানো হয়, একটি 37 ℃ জলের স্নানে আলতোভাবে ঘোরাফেরা করে যতক্ষণ না শিশিতে সামান্য বরফ অবশিষ্ট থাকে যতক্ষণ না পূর্বে উষ্ণ বৃদ্ধির মাধ্যমে ধুয়ে ফেলা হয়।

কিছু কোষের জন্য যেমন স্তন্যপায়ী ভ্রূণ, তাদের বেঁচে থাকার জন্য ধীর উষ্ণতা অপরিহার্য।

কোষগুলি এখন কোষ সংস্কৃতি, কোষ বিচ্ছিন্নতা বা হেমাটোপয়েটিক স্টেম কোষের ক্ষেত্রে প্রস্তুত - মায়লোঅ্যাব্লেটিভ থেরাপির আগে দাতা স্টেম কোষের অখণ্ডতার গ্যারান্টি দেওয়ার জন্য কার্যকারিতা অধ্যয়ন।

সংস্কৃতিতে প্রলেপ দেওয়ার জন্য কোষের ঘনত্ব নির্ধারণের জন্য কোষ গণনা সম্পাদন করতে ব্যবহৃত প্রিওয়াশড নমুনার ছোট অ্যালিকোট নেওয়া স্বাভাবিক অভ্যাস। তারপরে আপনি কোষ বিচ্ছিন্নকরণ পদ্ধতির ফলাফলগুলি মূল্যায়ন করতে পারেন এবং কোষের কার্যকারিতা নির্ধারণ করতে পারেন।

Cryovials সংরক্ষণের জন্য সর্বোত্তম অভ্যাস

ক্রায়োভিয়ালগুলিতে সঞ্চিত নমুনার সফল ক্রায়োপ্রিজারভেশন প্রোটোকলের অনেক উপাদানের উপর নির্ভর করে যার মধ্যে সঠিক স্টোরেজ এবং রেকর্ড রাখা রয়েছে।

• স্টোরেজ অবস্থানের মধ্যে সেল বিভক্ত করুন- ভলিউম অনুমতি দিলে, শিশিগুলির মধ্যে কোষগুলিকে বিভক্ত করুন এবং সরঞ্জামগুলির ব্যর্থতার কারণে নমুনা ক্ষতির ঝুঁকি কমাতে আলাদা জায়গায় সংরক্ষণ করুন।
• ক্রস-দূষণ প্রতিরোধ করুন- পরবর্তী ব্যবহারের আগে একক-ব্যবহারের জীবাণুমুক্ত ক্রায়োজেনিক শিশি বা অটোক্লেভ বেছে নিন
• আপনার কোষের জন্য উপযুক্ত আকারের শিশি ব্যবহার করুন- শিশিগুলি 1 থেকে 5mls এর মধ্যে ভলিউমের একটি পরিসরে আসে। ফাটল হওয়ার ঝুঁকি কমাতে শিশি অতিরিক্ত ভরাট করা এড়িয়ে চলুন।
• অভ্যন্তরীণ বা বাহ্যিকভাবে থ্রেডেড ক্রায়োজেনিক শিশি নির্বাচন করুন- নিরাপত্তা ব্যবস্থার জন্য কিছু বিশ্ববিদ্যালয় দ্বারা অভ্যন্তরীণভাবে থ্রেডেড শিশিগুলি সুপারিশ করা হয় - তারা ভরাট করার সময় বা তরল নাইট্রোজেনে সংরক্ষণ করার সময় দূষণ প্রতিরোধ করতে পারে।
• ফুটো প্রতিরোধ- ফুটো এবং দূষণ রোধ করতে স্ক্রু-ক্যাপ বা ও-রিংগুলিতে ঢালাই করা দ্বি-ইঞ্জেকশনযুক্ত সিল ব্যবহার করুন।
• 2D বারকোড এবং লেবেল শিশি ব্যবহার করুন- ট্রেসেবিলিটি নিশ্চিত করতে, বড় লেখার জায়গা সহ শিশি প্রতিটি শিশিকে পর্যাপ্ত লেবেলযুক্ত করতে সক্ষম করে। 2D বারকোড স্টোরেজ ম্যানেজমেন্ট এবং রেকর্ড রাখার ক্ষেত্রে সাহায্য করতে পারে। কালার কোডেড ক্যাপ সহজে শনাক্তকরণের জন্য উপযোগী।
• পর্যাপ্ত স্টোরেজ রক্ষণাবেক্ষণ- কোষগুলি হারিয়ে না যায় তা নিশ্চিত করার জন্য, স্টোরেজ জাহাজগুলিকে ক্রমাগত তাপমাত্রা এবং তরল নাইট্রোজেনের মাত্রা নিরীক্ষণ করা উচিত। ব্যবহারকারীদের ত্রুটি সম্পর্কে সতর্ক করার জন্য অ্যালার্ম লাগানো উচিত।

নিরাপত্তা সতর্কতা

তরল নাইট্রোজেন আধুনিক গবেষণায় সাধারণ অভ্যাস হয়ে উঠেছে কিন্তু ভুলভাবে ব্যবহার করলে গুরুতর আঘাতের ঝুঁকি বহন করে।

তরল নাইট্রোজেন পরিচালনা করার সময় তুষারপাত, পোড়া এবং অন্যান্য প্রতিকূল ঘটনার ঝুঁকি কমাতে যথাযথ ব্যক্তিগত সুরক্ষামূলক সরঞ্জাম (পিপিই) পরিধান করা উচিত। পরিধান

• ক্রায়োজেনিক গ্লাভস
• ল্যাবরেটরি কোট
• প্রভাব প্রতিরোধী সম্পূর্ণ মুখ ঢাল যা ঘাড় ঢেকে রাখে
• বন্ধ পায়ের জুতা
• স্প্ল্যাশপ্রুফ প্লাস্টিকের এপ্রোন

শ্বাসরোধের ঝুঁকি কমাতে তরল নাইট্রোজেন রেফ্রিজারেটরগুলিকে ভাল বায়ুচলাচল এলাকায় স্থাপন করা উচিত - এড়িয়ে যাওয়া নাইট্রোজেন বায়ুমণ্ডলীয় অক্সিজেনকে বাষ্পীভূত করে এবং স্থানচ্যুত করে। বড় ভলিউম স্টোরে কম অক্সিজেন অ্যালার্ম সিস্টেম থাকা উচিত।

তরল নাইট্রোজেন পরিচালনা করার সময় জোড়ায় কাজ করা আদর্শ এবং স্বাভাবিক কাজের সময়ের বাইরে এর ব্যবহার নিষিদ্ধ করা উচিত।

আপনার কর্মপ্রবাহ সমর্থন করার জন্য Cryovials

Suzhou Ace বায়োমেডিকেল কোম্পানি বিভিন্ন ধরনের কোষের জন্য আপনার ক্রিওপ্রিজারভেশনের চাহিদা মেটাতে এমন পণ্যের বিস্তৃত নির্বাচন অফার করে। পোর্টফোলিওতে টিউব এবং জীবাণুমুক্ত ক্রায়োভিয়ালের একটি পরিসর অন্তর্ভুক্ত রয়েছে।

আমাদের cryovials হল:

• ল্যাব স্ক্রু ক্যাপ 0.5mL 1.5mL 2.0mL Cryovial Cryogenic Vials Conical Botom Cryotube with Gasket

  ● 0.5ml,1.5ml,2.0ml স্পেসিফিকেশন, স্কার্ট সহ বা স্কার্ট ছাড়া
  ● শঙ্কুযুক্ত বা স্ব-স্থায়ী নকশা, জীবাণুমুক্ত বা অ জীবাণুমুক্ত উভয়ই উপলব্ধ
  ● স্ক্রু ক্যাপ টিউবগুলি মেডিকেল গ্রেড পলিপ্রোপিলিন দিয়ে তৈরি
  ● PP Cryotube শিশি বারবার হিমায়িত এবং গলানো যায়
  ● বাহ্যিক ক্যাপ ডিজাইন নমুনা চিকিত্সার সময় দূষণের সম্ভাবনা কমাতে পারে।
  ● স্ক্রু ক্যাপ ক্রায়োজেনিক টিউব ইউনিভার্সাল স্ক্রু থ্রেড ব্যবহারের জন্য
  ● টিউবগুলি সবচেয়ে সাধারণ রোটারগুলির সাথে ফিট করে৷
  ● ক্রায়োজেনিক টিউব ও-রিং টিউব মান 1-ইঞ্চি এবং 2-ইঞ্চি, 48ওয়েল, 81ওয়েল，96ওয়েল এবং 100ওয়েল ফ্রিজার বাক্সে মানানসই
  ● 121°C থেকে অটোক্লেভেবল এবং -86°C থেকে ফ্রিজেবল

  পার্ট নং	উপাদান	ভলিউম	ক্যাপরঙ	পিসিএস/ব্যাগ	ব্যাগ/কেস
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	কালো, হলুদ, নীল, লাল, বেগুনি, সাদা	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	কালো, হলুদ, নীল, লাল, বেগুনি, সাদা	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	কালো, হলুদ, নীল, লাল, বেগুনি, সাদা	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	কালো, হলুদ, নীল, লাল, বেগুনি, সাদা	500	10