প্রক্রিয়াগুলির মানককরণের মধ্যে রয়েছে তাদের অপ্টিমাইজেশন এবং পরবর্তী স্থাপনা এবং সুরেলাকরণ, যা দীর্ঘমেয়াদী সর্বোত্তম কর্মক্ষমতাকে অনুমতি দেয় – ব্যবহারকারীর থেকে স্বাধীন। মানককরণ উচ্চ-মানের ফলাফল নিশ্চিত করে, সেইসাথে তাদের প্রজননযোগ্যতা এবং তুলনাযোগ্যতা।
(ক্লাসিক) পিসিআর-এর লক্ষ্য হল একটি নির্ভরযোগ্য এবং পুনরুত্পাদনযোগ্য ফলাফল তৈরি করা। নির্দিষ্ট অ্যাপ্লিকেশনের জন্য, এর ফলনপিসিআর পণ্যএছাড়াও প্রাসঙ্গিক। এই প্রতিক্রিয়াগুলির জন্য, নমুনাগুলি যাতে আপস করা না হয় এবং PCR কার্যপ্রবাহ স্থিতিশীল থাকে তা নিশ্চিত করার জন্য যত্ন নেওয়া আবশ্যক। বিশেষত, এটি দূষণের প্রবর্তন কমিয়ে আনতে অনুবাদ করে যা মিথ্যা ইতিবাচক বা মিথ্যা নেতিবাচক ফলাফলের দিকে নিয়ে যেতে পারে বা এমনকি পিসিআর প্রতিক্রিয়াকেও বাধা দিতে পারে। তদ্ব্যতীত, প্রতিক্রিয়া শর্তগুলি একটি দৌড়ের মধ্যে প্রতিটি পৃথক নমুনার জন্য যতটা সম্ভব অভিন্ন হওয়া উচিত এবং পরবর্তী প্রতিক্রিয়াগুলিতে (একই পদ্ধতির) স্থানান্তরযোগ্য হতে হবে। এটি প্রতিক্রিয়াগুলির গঠনের পাশাপাশি সাইক্লারে তাপমাত্রা নিয়ন্ত্রণের ধরণকে বোঝায়। ব্যবহারকারীর ত্রুটি, অবশ্যই, যতটা সম্ভব এড়ানো উচিত।
নীচে, আমরা একটি পিসিআর-এর প্রস্তুতির সময় এবং চলাকালীন সময়ে সম্মুখীন হওয়া চ্যালেঞ্জগুলি প্রদর্শন করব - এবং PCR কর্মপ্রবাহের প্রমিতকরণের জন্য ব্যবহৃত যন্ত্র এবং ভোগ্যপণ্যের ক্ষেত্রে বিদ্যমান সমাধানগুলির পদ্ধতিগুলি।
প্রতিক্রিয়া প্রস্তুতি
পিসিআর-পাত্রে বা প্লেটগুলিতে প্রতিক্রিয়ার উপাদানগুলি যথাক্রমে বিতরণে একাধিক চ্যালেঞ্জ রয়েছে যা অবশ্যই অতিক্রম করতে হবে:
প্রতিক্রিয়া শর্ত
সম্ভাব্য সবচেয়ে অভিন্ন প্রতিক্রিয়া অবস্থার জন্য লক্ষ্য করার সময় পৃথক উপাদানগুলির সঠিক এবং সুনির্দিষ্ট ডোজ অপরিহার্য। একটি ভাল পাইপটিং কৌশল ছাড়াও, সঠিক টুল নির্বাচন করা গুরুত্বপূর্ণ। পিসিআর মাস্টার-মিক্সে প্রায়শই এমন পদার্থ থাকে যা সান্দ্রতা বাড়ায় বা ফেনা তৈরি করে। Pipetting প্রক্রিয়া চলাকালীন, এই সারাংশ ভিজা হয়পাইপেট টিপস, এইভাবে পাইপটিং নির্ভুলতা হ্রাস. ডাইরেক্ট ডিসপেনসিং সিস্টেম বা বিকল্প পাইপেট টিপস ব্যবহার করা যা ভিজানোর প্রবণতা কম, পাইপেটিং প্রক্রিয়ার নির্ভুলতা এবং নির্ভুলতা উন্নত করতে পারে।
দূষণ
বিতরণ প্রক্রিয়া চলাকালীন, অ্যারোসোলগুলি তৈরি হয় যা, যদি পাইপেটের অভ্যন্তরে পৌঁছতে দেওয়া হয়, পরবর্তী পাইপেটিং ধাপে সম্ভাব্যভাবে অন্য নমুনাকে দূষিত করতে পারে। ফিল্টার টিপস বা সরাসরি স্থানচ্যুতি সিস্টেম ব্যবহার করে এটি প্রতিরোধ করা যেতে পারে।
ভোগ্য দ্রব্য যেমনটিপস, PCR ওয়ার্কফ্লোতে ব্যবহৃত পাত্র এবং প্লেটগুলিতে এমন পদার্থ থাকা উচিত নয় যা নমুনাকে আপস করে বা ফলাফলকে মিথ্যা করে। এর মধ্যে রয়েছে DNA, DNases, RNases এবং PCR ইনহিবিটর, সেইসাথে এমন উপাদান যা প্রতিক্রিয়ার সময় উপাদান থেকে সম্ভাব্যভাবে লিচ হতে পারে - পদার্থ যা লিচেবল নামে পরিচিত।
ব্যবহারকারীর ত্রুটি
যত বেশি নমুনা প্রক্রিয়া করা হয়, ত্রুটির ঝুঁকি তত বেশি। এটি সহজেই ঘটতে পারে যে একটি নমুনা ভুল পাত্রে বা ভুল কূপে ঢোকানো হয়েছে। কূপগুলির সহজে স্পষ্ট চিহ্নিতকরণের মাধ্যমে এই ঝুঁকিটি উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করা যেতে পারে। বিতরণের পদক্ষেপগুলির স্বয়ংক্রিয়তার মাধ্যমে, "মানব উপাদান", অর্থাৎ, ত্রুটি এবং ব্যবহারকারী-সম্পর্কিত বৈচিত্রগুলি হ্রাস করা হয়, এইভাবে প্রজননযোগ্যতা বৃদ্ধি পায়, বিশেষত ছোট প্রতিক্রিয়া ভলিউমের ক্ষেত্রে। এর জন্য একটি ওয়ার্কস্টেশনে নিযুক্ত করার জন্য পর্যাপ্ত মাত্রিক স্থিতিশীলতার প্লেট প্রয়োজন। সংযুক্ত বারকোডগুলি অতিরিক্ত মেশিন-পঠনযোগ্যতা প্রদান করে, যা পুরো প্রক্রিয়া জুড়ে নমুনা ট্র্যাকিংকে সহজ করে।
থার্মোসাইক্লারের প্রোগ্রামিং
একটি যন্ত্র প্রোগ্রামিং সময়সাপেক্ষ পাশাপাশি ত্রুটি-প্রবণ হতে পারে। বিভিন্ন পিসিআর থার্মাল সাইক্লার বৈশিষ্ট্যগুলি এই প্রক্রিয়ার ধাপকে সহজ করতে এবং সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণভাবে এটিকে নিরাপদ করতে একসাথে কাজ করে:
সহজ অপারেশন এবং ভাল ব্যবহারকারী নির্দেশিকা দক্ষ প্রোগ্রামিং এর ভিত্তি। এই ভিত্তির উপর ভিত্তি করে, পাসওয়ার্ড-সুরক্ষিত ব্যবহারকারী প্রশাসন অন্য ব্যবহারকারীদের দ্বারা নিজের প্রোগ্রামগুলিকে পরিবর্তন করা থেকে বাধা দেবে। যদি একাধিক সাইক্লার (একই প্রকারের) ব্যবহার করা হয়, তাহলে এটি উপকারী যদি একটি প্রোগ্রাম সরাসরি USB বা সংযোগের মাধ্যমে একটি যন্ত্র থেকে অন্য যন্ত্রে স্থানান্তর করা যায়। কম্পিউটার সফ্টওয়্যার একটি কম্পিউটারে প্রোগ্রাম, ব্যবহারকারীর অধিকার এবং নথিগুলির কেন্দ্রীয় এবং সুরক্ষিত প্রশাসনকে সক্ষম করে।
পিসিআর চালান
দৌড়ের সময়, প্রতিক্রিয়া জাহাজে ডিএনএ প্রশস্ত করা হয়, যেখানে প্রতিটি নমুনা অভিন্ন, সামঞ্জস্যপূর্ণ প্রতিক্রিয়া অবস্থার অধীন হওয়া উচিত। নিম্নলিখিত দিকগুলি প্রক্রিয়াটির জন্য প্রাসঙ্গিক:
তাপমাত্রা নিয়ন্ত্রণ
তাপমাত্রা নিয়ন্ত্রণে চমৎকার নির্ভুলতা এবং সাইক্লার ব্লকের একজাতীয়তা হল সমস্ত নমুনার সমান তাপমাত্রার কন্ডিশনিংয়ের ভিত্তি। হিটিং এবং কুলিং এলিমেন্টের উচ্চ মানের (পেল্টিয়ার এলিমেন্ট), সেইসাথে যেভাবে এগুলি ব্লকের সাথে সংযুক্ত করা হয়েছে, তা হল সিদ্ধান্তকারী কারণ যা "এজ ইফেক্ট" নামে পরিচিত তাপমাত্রার অসঙ্গতির ঝুঁকি নির্ধারণ করবে।
বাষ্পীভবন
বাষ্পীভবনের কারণে প্রতিক্রিয়া চলাকালীন সময়ে পৃথক প্রতিক্রিয়ার উপাদানগুলির ঘনত্ব পরিবর্তন হওয়া উচিত নয়। অন্যথায়, এটি খুব কমই সম্ভবপিসিআর পণ্যউৎপন্ন হতে পারে, বা কোনোটিই নয়। তাই একটি নিরাপদ সীলমোহর নিশ্চিত করে বাষ্পীভবন কমিয়ে আনা অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ। এই ক্ষেত্রে, থার্মোসাইক্লারের উত্তপ্ত ঢাকনা এবং জাহাজের সিল হাতে হাতে কাজ করে। বিভিন্ন sealing বিকল্প জন্য উপলব্ধপিসিআর প্লেট (লিঙ্ক: সিল নিবন্ধ), যার মাধ্যমে তাপ সিলিংয়ের মাধ্যমে সেরা সীলমোহর অর্জন করা হয়। অন্যান্য বন্ধগুলিও উপযুক্ত হতে পারে, যতক্ষণ না সাইক্লার ঢাকনার যোগাযোগের চাপ নির্বাচিত সিলের সাথে সামঞ্জস্য করা যায়।
দীর্ঘমেয়াদে সঠিক এবং পুনরুত্পাদনযোগ্য ফলাফলগুলিকে সুরক্ষিত করার জন্য প্রক্রিয়া মানককরণ করা হয়েছে। এটি সর্বদা ভাল কাজের অবস্থায় রয়েছে তা নিশ্চিত করার জন্য এটির নিয়মিত রক্ষণাবেক্ষণ অন্তর্ভুক্ত। সমস্ত ভোগ্য সামগ্রী উত্পাদিত সমস্ত লট জুড়ে ধারাবাহিকভাবে উচ্চ মানের হওয়া উচিত এবং তাদের নির্ভরযোগ্য প্রাপ্যতার নিশ্চয়তা দিতে হবে।
পোস্টের সময়: নভেম্বর-২৯-২০২২