За успешни реакции на амплификация е необходимо отделните реакционни компоненти да присъстват в правилната концентрация във всеки препарат. Освен това е важно да не се получи замърсяване.
Особено когато трябва да се настроят много реакции, е установено да се приготвя така наречената основна смес, вместо да се пипетира всеки реагент поотделно във всеки съд. В търговската мрежа се предлагат предварително конфигурирани смеси, в които се добавят само специфични за пробата компоненти (праймер) и вода. Като алтернатива, основният микс може да бъде приготвен сам. И в двата варианта сместа се разпределя във всеки PCR съд без матрица и накрая се добавя отделно отделно ДНК пробата.
Използването на основна смес има няколко предимства: Първо, броят на отделните стъпки за пипетиране е намален. По този начин както рискът от грешки на потребителя по време на пипетиране, така и рискът от замърсяване са сведени до минимум и, разбира се, се спестява време. По принцип точността на пипетиране също е по-висока, тъй като се дозират по-големи обеми. Това е лесно за разбиране при проверка на техническите данни на пипетите: колкото по-малък е дозираният обем, толкова по-големи могат да бъдат отклоненията. Фактът, че всички препарати идват от един и същи съд има положителен ефект върху хомогенността (ако са добре смесени). Това също подобрява възпроизводимостта на експериментите.
Когато приготвяте основната смес, трябва да се добавят поне 10% допълнителен обем (напр. ако са необходими 10 приготвяния, изчислете на базата на 11), така че дори и последният съд да се напълни правилно. По този начин могат да бъдат компенсирани (леки) неточности при пипетиране и ефектът от загубата на проба при дозиране на разтвори, съдържащи детергент. Детергентите се съдържат в ензимни разтвори като полимерази и основни смеси, причинявайки образуване на пяна и остатъци по вътрешната повърхност на нормалнитенакрайници за пипети.
В зависимост от приложението и вида на течността, която ще се дозира, трябва да се избере правилната техника на пипетиране (1) и да се избере подходящото оборудване. За разтвори, съдържащи детергенти, се препоръчва система за директно изместване или така наречените накрайници за пипети с „ниско задържане“ като алтернатива на пипетите с въздушна възглавница. Ефектът отНакрайник за ПИПЕТА ACEсе основава на особено хидрофобна повърхност. Течностите, съдържащи препарати, не оставят остатъчен филм отвътре и отвън, така че загубата на разтвор може да бъде сведена до минимум.
Освен точното дозиране на всички компоненти е важно и да не се получава замърсяване на препаратите. Не е достатъчно да се използват консумативи с висока чистота, тъй като процесът на пипетиране в пипета с въздушна възглавница може да произведе аерозоли, които остават в пипетата. ДНК, която може да се съдържа в аерозола, може да бъде прехвърлена от една проба в друга в следващата стъпка на пипетиране и по този начин да доведе до замърсяване. Споменатите по-горе системи за директно изместване също могат да сведат до минимум този риск. За пипети с въздушна възглавница има смисъл да се използват филтърни накрайници за защита на конуса на пипетата чрез задържане на пръски, аерозоли и биомолекули.
Време на публикуване: 6 декември 2022 г