Как да пипетирате малки обеми с ръчни ръчни пипети

Тъй като се набляга повече на намаляването на реагентите и разходите, по-малките обеми са в голямо търсене, например за приготвянето на PCR Mastermix или ензимни реакции. Но пипетирането на малки обеми от 0,2 – 5 µL поставя нови предизвикателства за точността и прецизността на пипетирането. Следните точки са от съществено значение:

1. Размер на пипетата и накрайника: Винаги избирайте пипетата с възможно най-ниския номинален обем и най-малкия накрайник, за да запазите въздушната възглавница възможно най-малка. Когато пипетирате например 1 µL, изберете пипета от 0,25 – 2,5 µL и съответстващ накрайник вместо пипета от 1 – 10 µL.
2. Калибриране и поддръжка: Важно е вашите пипети да са правилно калибрирани и поддържани. Малките корекции и счупените части на пипетата водят до огромно увеличение на системните и случайни стойности на грешки. Веднъж годишно трябва да се извършва калибриране съгласно ISO 8655.
3. Обемни пипети: Проверете дали във вашата лаборатория имате обемна пипета с нисък обем. Като цяло използването на този тип пипета води до по-добър резултат от пипетиране по отношение на точност и прецизност, отколкото при класическите пипети с въздушна възглавница.
4. Опитайте се да използвате по-големи обеми: Може да обмислите разреждане на вашата проба, за да пипетирате по-големи обеми със същото количество в крайната реакция. Това може да намали грешките при пипетиране с много малки обеми на пробите.

Освен добър инструмент, изследователят трябва да притежава много добра техника на пипетиране. Обърнете специално внимание на следните стъпки:

1. Прикрепване на върха: Не забивайте пипетата върху върха, тъй като това може да повреди финия край на върха, което да доведе до пренасочване на лъча течност или да повреди отвора. Прилагайте само лек натиск, когато прикрепяте накрайника, и използвайте пипета с пружинен конус на върха.
2. Държане на пипетата: Не дръжте пипетата в ръката си, докато чакате центрофугата, цикъла и т.н. Вътрешността на пипетата ще се нагрее и ще доведе до разширяване на въздушната възглавница, което ще доведе до отклонения от зададения обем при пипетиране.
3. Предварително намокряне: Овлажняването на въздуха вътре в върха и пипетата подготвя върха за пробата и избягва изпарението при аспириране на трансферния обем.
4. Вертикална аспирация: Това е много важно, когато се работи с малки обеми, за да се избегне капилярният ефект, който възниква, когато пипетата се държи под ъгъл.
5. Дълбочина на потапяне: Потопете върха възможно най-малко, за да предотвратите навлизането на течност в него поради капилярния ефект. Основно правило: Колкото по-малък е върхът и обемът, толкова по-малка е дълбочината на потапяне. Препоръчваме максимум 2 mm при пипетиране на малки обеми.
6. Дозиране под ъгъл от 45°: Оптималното изтичане на течността е гарантирано, когато пипетата се държи под ъгъл от 45°.
7. Контакт със стената на съда или повърхността на течността: Малки обеми могат да се дозират правилно само когато върхът се държи срещу стената на съда или се потопи в течност. Дори и последната капка от върха може да се дозира точно.
8. Издухване: Издухването е задължително след дозиране на малки обеми, за да се разпръсне дори последната капка течност в накрайника. Издухването също трябва да се извърши срещу стената на съда. Внимавайте да не вкарате въздушни мехурчета в пробата, когато извършвате издухване на повърхността на течността.