Для паспяховых рэакцый ампліфікацыі неабходна, каб асобныя кампаненты рэакцыі прысутнічалі ў патрэбнай канцэнтрацыі ў кожным прэпараце. Акрамя таго, важна, каб не адбылося заражэння.
У прыватнасці, калі трэба наладзіць шмат рэакцый, было прынята рыхтаваць так званую майстар-мікс замест піпеткі кожнага рэагента асобна ў кожную ёмістасць. Папярэдне сканфігураваныя сумесі даступныя ў продажы, у якія дадаюцца толькі спецыфічныя кампаненты (праймер) і вада. Акрамя таго, майстар-мікс можна прыгатаваць самастойна. У абодвух варыянтах сумесь размяркоўваецца ў кожную пасудзіну для ПЦР без шаблону, а асобны ўзор ДНК дадаецца асобна ў канцы.
Выкарыстанне майстар-сумесі мае некалькі пераваг: Па-першае, памяншаецца колькасць этапаў піпетавання. Такім чынам, як рызыка памылак карыстальніка падчас піпетавання, так і рызыка заражэння зведзены да мінімуму і, вядома, зэканомлены час. У прынцыпе, дакладнасць піпетавання таксама вышэй, паколькі дазуюцца большыя аб'ёмы. Гэта лёгка зразумець пры праверцы тэхнічных дадзеных піпетак: чым менш дазаваны аб'ём, тым вышэй могуць быць адхіленні. Той факт, што ўсе прэпараты паступаюць з адной ёмістасці, станоўча ўплывае на аднастайнасць (пры добрым змешванні). Гэта таксама паляпшае ўзнаўляльнасць эксперыментаў.
Пры падрыхтоўцы асноўнай сумесі трэба дадаць не менш за 10% дадатковага аб'ёму (напрыклад, калі патрабуецца 10 падрыхтовак, разлічыце на аснове 11), каб нават апошняя ёмістасць запоўнілася належным чынам. Такім чынам можна кампенсаваць (нязначныя) недакладнасці піпетавання і эфект страты ўзору пры дазаванні раствораў, якія змяшчаюць мыйныя сродкі. Мыйныя сродкі ўтрымліваюцца ў растворах ферментаў, такіх як палімеразы і майстар-сумесі, выклікаючы ўтварэнне пены і рэшткаў на ўнутранай паверхні нармальныхнаканечнікі піпеткі.
У залежнасці ад прымянення і тыпу вадкасці, якая будзе дазавацца, трэба выбраць правільную тэхніку піпетавання (1) і адпаведнае абсталяванне. Для раствораў, якія змяшчаюць мыйныя сродкі, у якасці альтэрнатывы для піпетак на паветранай падушцы рэкамендуецца сістэма прамога выцяснення або так званыя наканечнікі піпетак з нізкім утрыманнем. Эфект адНаканечнік піпеткі ACEзаснавана на асабліва гідрафобнай паверхні. Вадкасці, якія змяшчаюць мыйныя сродкі, не пакідаюць плёнкі знутры і звонку, так што страта раствора можа быць зведзена да мінімуму.
Акрамя дакладнай дазоўкі ўсіх кампанентаў, таксама важна, каб не адбылося забруджвання прэпаратаў. Недастаткова выкарыстоўваць расходныя матэрыялы высокай чысціні, таму што працэс піпетавання ў піпетцы на паветранай падушцы можа вырабляць аэразолі, якія застаюцца ў піпетцы. ДНК, якая можа ўтрымлівацца ў аэразолі, можа пераносіцца з аднаго ўзору ў наступны на наступным этапе піпетавання і, такім чынам, прыводзіць да заражэння. Згаданыя вышэй сістэмы прамога перамяшчэння таксама могуць мінімізаваць гэты рызыка. Для піпетак на паветранай падушцы мае сэнс выкарыстоўваць наканечнікі фільтраў, каб абараніць конус піпеткі шляхам затрымкі пырскаў, аэразоляў і біямалекул.
Час публікацыі: 6 снежня 2022 г