КриовіалыЗвычайна выкарыстоўваюцца для криогенного захоўвання клеткавых ліній і іншых крытычных біялагічных матэрыялаў, у Dewars, напоўненых вадкім азотам.

У паспяховым захаванні клетак у вадкім азоце ўдзельнічае некалькі этапаў. У той час як асноўным прынцыпам з'яўляецца павольная замарожванне, дакладная тэхніка, якая выкарыстоўваецца, залежыць ад тыпу клетак і выкарыстанага криопротекторов. Пры захоўванні клетак пры такіх нізкіх тэмпературах ёсць некалькі меркаванняў бяспекі і лепшыя практыкі.

Гэты пост накіраваны на тое, каб даць агляд таго, як криовіалы захоўваюцца ў вадкім азоце.

Што такое криовіалы

Cryovials - гэта невялікія, закрытыя флаконы, прызначаныя для захоўвання проб вадкасці пры вельмі нізкіх тэмпературах. Яны гарантуюць, што клеткі, якія захоўваюцца ў криопротекторов, не ўступаюць у непасрэдны кантакт з вадкім азотам, мінімізуючы рызыку клеткавых пераломаў, пры гэтым усё яшчэ карыстаючыся экстрэмальным астуджальным эфектам вадкага азоту.

Флаконы звычайна даступныя ў розных аб'ёмах і канструкцыях - яны могуць быць унутрана або звонку з разьбай з плоскімі або круглявымі дномі. Таксама даступныя стэрыльныя і нестэрыльныя фарматы.

Хто выкарыстоўваеКіровіалызахоўваць клеткі ў вадкім азоце

Шэраг NHS і прыватных лабараторый, а таксама навукова -даследчыя ўстановы, якія спецыялізуюцца на банкінгу шнура, эпітэліяльнай клеткавай біялогіі, імуналогіі і біялогіі ствалавых клетак, выкарыстоўваюць криовіалы для криоконсерверв.

Клеткі, якія захаваліся такім чынам, ўключаюць у сябе B і Т -клеткі, CHO -клеткі, гематапаэтычныя ствалавыя клеткі і папярэднія клеткі, гібрыдомы, кішачныя клеткі, макрафагі, мезенхімальныя ствалавыя клеткі і папярэднія клеткі, манацыты, міелому, клеткі NK і плюрипотентныя ствалавыя клеткі.

Агляд таго, як захоўваць криовіалы ў вадкім азоце

КРЫПЕЗАВАННЕ - гэта працэс, які захоўвае клеткі і іншыя біялагічныя канструкцыі, астуджаючы іх да вельмі нізкіх тэмператур. Клеткі могуць захоўвацца ў вадкім азоце на працягу многіх гадоў без страты жыццяздольнасці клетак. Гэта накід працэдур, якія выкарыстоўваюцца.

Падрыхтоўка клетак

Дакладны метад падрыхтоўкі ўзораў будзе вар'іравацца ў залежнасці ад тыпу клетак, але ў цэлым клеткі збіраюць і центрифугируют, каб распрацаваць багатую клеткамі гранул. Затым гэты гранул рэсуспендуецца ў супернатантах, змешаным з криопротекторов або з криоконсервации.

КРЫПЕЗАЦЫЯЛЬНАЯ СМІ

Гэтая серада выкарыстоўваецца для захавання клетак у нізкатэмпературных умовах, якія яны будуць падвяргацца, інгібіраваўшы адукацыю ўнутры і пазаклеткавых крышталяў, а значыць, і гібель клетак. Іх роля заключаецца ў забеспячэнні бяспечнай, ахоўнай асяроддзя для клетак і тканін падчас працэсаў замарожвання, захоўвання і адтавання.

Такая серада, як свежая замарожаная плазма (FFP), растворы гепарынізаванага плазмалітычнага раствора або без сыроваткі, без жывёльных кампанентаў, змешваюцца з криопротекторов, такімі як диметилсульфоксид (DMSO) або гліцэрына.

Паўторны ўзор гранул аликвотируют у поліпрапіленавыя криовіалы, такія якСючжоу туза біямедыцынскай кампаніі Cryogenic Storage Forives.

Важна не перасылаць криовіалы, бо гэта павялічыць рызыку ўзлому і магчымага выкіду змесціва (1).

Кіраваная хуткасць замарожвання

Увогуле, для паспяховай криоконсервации клетак выкарыстоўваецца павольная хуткасць замарожвання.

Пасля таго, як узоры аликвотируются ў криогенныя флаконы, яны размяшчаюцца на вільготным лёдзе альбо ў халадзільніку 4 ℃, і працэдура замарожвання запускаецца на працягу 5 хвілін. У якасці агульнага кіраўніцтва клеткі астуджаюцца з хуткасцю ад -1 да -3 у хвіліну (2). Гэта дасягаецца пры дапамозе праграмуему ахаладжальніку альбо размяшчэння флаконаў у ізаляванай скрынцы, размешчанай у -70 ° С да –90 ° C, які кантралюецца маразільнай камерай.

Перадача ў вадкі азот

Затым замарожаныя крыягенныя флаконы пераносяцца ў вадкі азотны бак на нявызначаны перыяд, пры ўмове, што тэмпература менш за -135 ℃ захоўваецца.

Гэтыя ультра-нізкія тэмпературы могуць быць атрыманы пры апусканні ў азот вадкасці або паравой фазе.

Вадкасць ці паравая фаза?

Захоўванне ў азоце вадкай фазе, як вядома, падтрымлівае халодную тэмпературу з абсалютнай кансістэнцыяй, але часта не рэкамендуецца па наступных прычынах:

• Неабходнасць вялікіх аб'ёмаў (глыбіні) вадкага азоту, які ўяўляе патэнцыйную небяспеку. Апёкі альбо задушэнне з -за гэтага - гэта рэальная рызыка.
• Дакументаваныя выпадкі перакрыжаванага заражэння інфекцыйнымі агентамі, такімі як Aspergillus, HEP B і вірусны распаўсюджванне з дапамогай вадкага азотнага асяроддзя (2,3)
• Патэнцыял для вадкага азоту прасочваецца ў ампулы падчас апускання. Пры выдаленні з захоўвання і нагрэву да пакаёвай тэмпературы азот хутка пашыраецца. Такім чынам, флакон можа разбурацца пры выдаленні з вадкага захоўвання азоту, ствараючы небяспеку як ад палёту смецця, так і ад уздзеяння змесціва (1, 4).

Па гэтых прычынах ультра-нізкая тэмпературная захоўванне часцей за ўсё ў азоце паравой фазы. Калі ўзоры павінны захоўвацца ў вадкай фазе, неабходна выкарыстоўваць спецыялізаваную трубку Cryoflex.

Недахопам да паравой фазы з'яўляецца тое, што можа адбыцца вертыкальны градыент тэмпературы, што прыводзіць да ваганняў тэмпературы паміж -135 ℃ і -190 ℃. Гэта патрабуе ўважлівага і стараннага маніторынгу ўзроўню вадкага азоту і ваганняў тэмпературы (5).

Многія вытворцы рэкамендуюць, каб Cryovials падыходзілі для захоўвання да -135 ℃ або для выкарыстання толькі ў пары.

Адмарожванне вашых криоконсервированных клетак

Працэдура адтавання з'яўляецца напружанай для замарожанай культуры, і для забеспячэння аптымальнай жыццяздольнасці, аднаўлення і функцыянальнасці клетак патрабуецца належная апрацоўка і тэхніка. Дакладныя пратаколы адтавання будуць залежаць ад пэўных тыпаў ячэйкі. Аднак хуткае адтаванне лічыцца стандартным для:

• Зніжэнне любога ўплыву на аднаўленне клетак
• Дапамажыце скараціць час уздзеяння растваральнікаў, якія прысутнічаюць у замярзаючых носьбітах
• Мінімізуйце любыя пашкоджанні праз перакрышталізацыю лёду

Вадзяныя ванны, пацерныя ванны або спецыялізаваныя аўтаматызаваныя інструменты звычайна выкарыстоўваюцца для адтавання ўзораў.

Часцей за ўсё 1 клеткавая лінія размарожваецца адначасова на працягу 1-2 хвілін, мякка закручваючыся на вадзяной лазні на 37 ℃, пакуль у флаконе застаецца толькі невялікі лёд, перш чым іх мыць у папярэдне бярулым.

Для некаторых клетак, такіх як эмбрыёны млекакормячых, павольнае пацяпленне мае важнае значэнне для іх выжывання.

Цяпер клеткі гатовыя да клеткавай культуры, ізаляцыі клетак альбо ў выпадку гематопоэтических ствалавых клетак - Даследаванні жыццяздольнасці, каб гарантаваць цэласнасць ствалавых клетак донара перад міелаабла -тэрапіяй.

Звычайная практыка прымае невялікія аликвоты папярэдняга ўзору, які выкарыстоўваецца для выканання колькасці клетак для вызначэння канцэнтрацыі клетак для пакрыцця ў культуры. Затым вы можаце ацаніць вынікі працэдур ізаляцыі клетак і вызначыць жыццяздольнасць клетак.

Лепшыя практыкі для захоўвання криовіалаў

Паспяховая криоконсервацыя ўзораў, якія захоўваюцца ў криовіалах, залежыць ад многіх элементаў пратакола, уключаючы належнае захоўванне і ўтрыманне запісу.

• Раздзельныя клеткі паміж месцамі захоўвання- Калі аб'ёмы дазваляюць, падзялілі клеткі паміж флаконамі і захоўваюць іх у асобных месцах, каб знізіць рызыку страты пробы з -за збояў у абсталяванні.
• Прадухіліць перакрыжаванае забруджванне-Выбірайце стэрыльныя криогенныя флаконы з аднаразовым выкарыстаннем перад наступным выкарыстаннем
• Выкарыстоўвайце флаконы адпаведнага памеру для вашых вочак- Флаконы бываюць у розных аб'ёмах паміж 1 і 5 мл. Пазбягайце перапоўненых флаконаў, каб знізіць рызыку парэпання.
• Выберыце ўнутраныя або вонкава разьбовыя криогенныя флаконы- Унутраныя флаконы рэкамендуюцца некаторымі універсітэтамі для мер бяспекі - яны таксама могуць прадухіліць забруджванне падчас запаўнення альбо пры захоўванні ў вадкім азоце.
• Прадухіліць уцечку-Выкарыстоўвайце двух ін'екцыйных ушчыльненняў, вылічаных у шрубавыя шапкі або кольцы, каб пазбегнуць уцечкі і забруджвання.
• Выкарыстоўвайце 2D штрых -коды і этыкеткі- Каб забяспечыць прасочванне, флаконы з вялікімі ўчасткамі напісання дазваляюць кожнаму ампулу належным чынам маркіраваць. 2D штрых -коды можа дапамагчы ў кіраванні сховішчамі і ўліку. Каляровыя шапкі карысныя для палягчэння ідэнтыфікацыі.
• Адэкватнае абслугоўванне сховішчаў- Для таго, каб клеткі не губляліся, сасуды для захоўвання павінны пастаянна кантраляваць узровень тэмпературы і вадкага азоту. Сігналізацыі павінны быць усталяваны, каб папярэдзіць карыстальнікаў пра памылкі.

Меры засцярогі бяспекі

Вадкі азот стаў звычайнай практыкай у сучасных даследаваннях, але пры ужыванні няправільна ўжывае рызыку сур'ёзнай траўмы.

Правільнае асабістае ахоўнае абсталяванне (PPE) трэба насіць, каб мінімізаваць рызыку абмаражэння, апёкаў і іншых неспрыяльных інцыдэнтаў пры апрацоўцы вадкага азоту. Насіць

• Крыягенныя пальчаткі
• Лабараторнае паліто
• Ударны ўстойлівы да поўнага шчыта асобы, які таксама пакрывае шыю
• Абутак з закрытым токам
• Плёскавы пластыкавы фартух

Вадкія халадзільнікі азоту павінны быць размешчаны ў добра вентыляваных участках, каб мінімізаваць рызыку асфіксіі-пазбегнуць выпарэння азоту і выцясняе атмасферны кісларод. Вялікія крамы аб'ёму павінны мець нізкія сістэмы сігналізацыі кіслароду.

Праца ў пары пры апрацоўцы вадкага азоту ідэальна падыходзіць, і яго выкарыстанне па -за звычайным працоўным часам павінна быць забаронена.

Cryovials, каб падтрымаць ваш працоўны працэс

Biomedical Company Suzhou Ace прапануе шырокі выбар прадуктаў, якія адпавядаюць вашым патрэбам у криоконсервации для розных тыпаў клетак. У партфель уваходзіць шэраг труб, а таксама шэраг стэрыльных криовіалаў.

Нашы криовіалы:

• Лабараторны шруба

  ● 0,5 мл, 1,5 мл, 2,0 мл спецыфікацыі, са спадніцай або без спадніцы
  ● Даступныя канічныя або самастойныя канструкцыі, стэрыльныя або нестэрыльныя
  ● Шруба
  ● PP Cryotube флаконы можна неаднаразова замарозіць і адтаваць
  ● Канструкцыя знешняй вечка можа паменшыць верагоднасць забруджвання падчас лячэння ўзору.
  ● Шрубавая крышка крыёгенных труб універсальных шрубавых нітак
  ● трубы адпавядаюць найбольш распаўсюджаным ротарам
  ● Крыягенныя трубкі з ушчыльняючымі трубамі падыходзяць стандартныя 1-цалевыя і 2-цалевыя, 48-х велічы
  ● Аўтаацэнка да 121 ° С і замарожваецца да -86 ° С

  Частка №	Матэрыял	Аб'ём	ВечкаКолер	ПК/Торба	Сумкі/футляр
  ACT05-BL-N	PP	0,5 мл	Чорны, жоўты, сіні, чырвоны, фіялетавы, белы	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1,5 мл	Чорны, жоўты, сіні, чырвоны, фіялетавы, белы	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1,5 мл	Чорны, жоўты, сіні, чырвоны, фіялетавы, белы	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2,0 мл	Чорны, жоўты, сіні, чырвоны, фіялетавы, белы	500	10