Пры піпетаванні аб'ёмаў ад 0,2 да 5 мкл дакладнасць і дакладнасць піпетавання мае вялікае значэнне. Добрая тэхніка піпетавання вельмі важная, таму што памылкі пры апрацоўцы больш відавочныя пры невялікіх аб'ёмах.
Паколькі ўсё больш увагі надаецца зніжэнню рэагентаў і кошту, меншыя аб'ёмы карыстаюцца вялікім попытам, напрыклад, для падрыхтоўкі PCR Mastermix або ферментных рэакцый. Але піпетаванне невялікіх аб'ёмаў ад 0,2 да 5 мкл ставіць новыя задачы для дакладнасці і дакладнасці піпетавання. Істотныя наступныя моманты:
- Памер піпеткі і наканечніка: заўсёды выбірайце піпетку з найменшым магчымым намінальным аб'ёмам і найменшым наканечнікам, каб паветраная падушка была як мага меншай. Пры піпетцы 1 мкл, напрыклад, выбірайце піпетку 0,25–2,5 мкл і адпаведны наканечнік, а не піпетку 1–10 мкл.
- Каліброўка і абслугоўванне: Вельмі важна, каб вашыя піпеткі былі належным чынам адкалібраваны і абслугоўваліся. Невялікія рэгуляванні і зламаныя дэталі піпеткі прыводзяць да значнага павелічэння значэнняў сістэматычных і выпадковых памылак. Каліброўка ў адпаведнасці з ISO 8655 павінна праводзіцца адзін раз у год.
- Аб'ёмныя піпеткі: праверце, ці ёсць у вашай лабараторыі аб'ёмныя піпеткі з нізкім дыяпазонам аб'ёму. Увогуле, выкарыстанне гэтага тыпу піпеткі прыводзіць да лепшага выніку піпеткі з пункту гледжання дакладнасці і дакладнасці, чым у класічных піпетак на паветранай падушцы.
- Паспрабуйце выкарыстоўваць большыя аб'ёмы: Вы можаце разгледзець пытанне аб развядзенні ўзору, каб піпетаваць большыя аб'ёмы з такой жа колькасцю ў канчатковай рэакцыі. Гэта можа паменшыць памылкі піпетавання з вельмі малымі аб'ёмамі ўзораў.
У дадатак да добрага інструмента даследчык павінен валодаць вельмі добрай тэхнікай піпетавання. Звярніце асаблівую ўвагу на наступныя дзеянні:
- Прымацаванне наканечніка: не забівайце піпетку на наканечнік, бо гэта можа пашкодзіць тонкі канец наканечніка, выклікаць перанакіраванне пучка вадкасці або пашкодзіць адтуліну. Пры падключэнні наканечніка аказвайце лёгкі націск і выкарыстоўвайце піпетку з падпружыненым конусам наканечніка.
- Трымаючы піпетку: не трымайце піпетку ў руцэ, пакуль чакаеце цэнтрыфугі, цыклера і г.д. Унутраная частка піпеткі будзе награвацца, што прывядзе да пашырэння паветранай падушкі, што прывядзе да адхіленняў ад зададзенага аб'ёму пры піпетцы.
- Папярэдняе змочванне: увільгатненне паветра ўнутры наканечніка і піпеткі рыхтуе наканечнік да ўзору і прадухіляе выпарэнне пры аспірацыі аб'ёму для пераносу.
- Вертыкальная аспірацыя: гэта вельмі важна пры апрацоўцы невялікіх аб'ёмаў, каб пазбегнуць капілярнага эфекту, які ўзнікае, калі піпетку трымаць пад вуглом.
- Глыбіня апускання: апускайце наканечнік як мага менш, каб прадухіліць трапленне вадкасці з-за капілярнага эфекту. Эмпірычнае правіла: чым менш кончык і аб'ём, тым меншая глыбіня апускання. Мы рэкамендуем максімум 2 мм пры піпетцы невялікіх аб'ёмаў.
- Дазаванне пад вуглом 45°: аптымальнае выцяканне вадкасці гарантуецца, калі піпетку трымаць пад вуглом 45°.
- Кантакт са сценкай пасудзіны або паверхняй вадкасці: невялікія аб'ёмы можна правільна дазаваць, толькі калі наканечнік прылягае да сценкі пасудзіны або пагружаны ў вадкасць. Нават апошнюю кроплю з наканечніка можна дакладна дазаваць.
- Выдзіманне: Выдзіманне з'яўляецца абавязковым пасля дазавання невялікіх аб'ёмаў, каб выпусціць нават апошнюю кроплю вадкасці, якая знаходзіцца ў наканечніку. Выдзіманне варта таксама праводзіць супраць сценкі пасудзіны. Будзьце асцярожныя, каб не занесці бурбалкі паветра ва ўзор, калі выдзімаеце паверхню вадкасці.
Час публікацыі: 18 лютага 2021 г