Cryovialsadətən hüceyrə xətlərinin və digər kritik bioloji materialların kriogen saxlanması üçün, maye azotla doldurulmuş devarlarda istifadə olunur.

Maye azotda hüceyrələrin müvəffəqiyyətlə qorunması üçün bir neçə mərhələ var. Əsas prinsip yavaş dondurma olsa da, tətbiq edilən dəqiq texnika hüceyrə növündən və istifadə olunan kriyoprotektordan asılıdır. Hüceyrələri belə aşağı temperaturda saxlayarkən nəzərə alınmalı olan bir neçə təhlükəsizlik mülahizələri və ən yaxşı təcrübələr var.

Bu yazı cryovialların maye azotda necə saxlandığına dair ümumi məlumat vermək məqsədi daşıyır.

Cryovials nədir

Krioviallar maye nümunələrinin olduqca aşağı temperaturda saxlanması üçün nəzərdə tutulmuş kiçik, qapaqlı flakonlardır. Onlar krioprotektorda saxlanılan hüceyrələrin maye azotla birbaşa təmasda olmamasını təmin edir, hüceyrə sınıqları riskini minimuma endirməklə yanaşı, maye azotun həddindən artıq soyuducu təsirindən hələ də faydalanır.

Flakonlar adətən müxtəlif həcmdə və dizaynda mövcuddur – onlar düz və ya yuvarlaq diblərlə daxili və ya xaricdən yivlənə bilər. Steril və qeyri-steril formatlar da mövcuddur.

Kim istifadə edirCyrovialsHüceyrələri Maye Azotda Saxlamaq

Bir sıra NHS və özəl laboratoriyalar, həmçinin kordon qanı bankçılığı, epitelial hüceyrə biologiyası, immunologiya və kök hüceyrə biologiyası üzrə ixtisaslaşmış tədqiqat institutları hüceyrələrin dondurulması üçün kriyoviallardan istifadə edir.

Bu şəkildə qorunan hüceyrələrə B və T Hüceyrələri, CHO Hüceyrələri, Hematopoetik Kök və Əcdad Hüceyrələri, Hibridomalar, Bağırsaq Hüceyrələri, Makrofaqlar, Mezenximal Kök və Əcdad Hüceyrələri, Monositlər, Miyeloma, NK Hüceyrələri və Pluripotent Kök Hüceyrələr daxildir.

Cryovialları Maye Azotda Necə Saxlamaq haqqında İcmal

Kriyokonservasiya hüceyrələri və digər bioloji konstruksiyaları çox aşağı temperaturlara qədər soyudaraq onları qoruyan bir prosesdir. Hüceyrələr hüceyrə canlılığını itirmədən illərlə maye azotda saxlanıla bilər. Bu tətbiq olunan prosedurların xülasəsidir.

Hüceyrə Hazırlanması

Nümunələrin hazırlanması üçün dəqiq üsul hüceyrə növündən asılı olaraq dəyişəcək, lakin ümumiyyətlə hüceyrələrlə zəngin pellet hazırlamaq üçün hüceyrələr toplanır və sentrifuqa edilir. Bu qranul daha sonra krioprotektor və ya kriokonservasiya mühiti ilə qarışdırılmış supernatantda yenidən dayandırılır.

Dondurma mühiti

Bu mühit hüceyrədaxili və hüceyrədankənar kristalların əmələ gəlməsini və nəticədə hüceyrə ölümünü maneə törətməklə məruz qalacaqları aşağı temperaturlu mühitlərdə hüceyrələri qorumaq üçün istifadə olunur. Onların rolu dondurma, saxlama və ərimə prosesləri zamanı hüceyrələr və toxumalar üçün təhlükəsiz, qoruyucu mühit təmin etməkdir.

Təzə dondurulmuş plazma (FFP), heparinləşdirilmiş plazmalit məhlulu və ya serumsuz, heyvan komponentləri olmayan məhlullar kimi mühit dimetil sulfoksid (DMSO) və ya qliserol kimi kriyoprotektorlarla qarışdırılır.

Yenidən mayeləşdirilmiş nümunə qranulları polipropilen krioviallara bölünür, məsələnSuzhou Ace Biomedical şirkəti Cryogenic Storage Flakon.

Kriovialları çox doldurmamaq vacibdir, çünki bu, çatlama riskini və məzmunun mümkün sərbəst buraxılmasını artıracaq (1).

Nəzarət olunan Dondurma dərəcəsi

Ümumiyyətlə, hüceyrələrin uğurlu kriokonservasiyası üçün yavaş idarə olunan dondurma dərəcəsi istifadə olunur.

Nümunələr kriogen flakonlara bölündükdən sonra nəm buzun üzərinə və ya 4℃ soyuducuya qoyulur və 5 dəqiqə ərzində dondurma proseduruna başlanır. Ümumi bir bələdçi olaraq, hüceyrələr dəqiqədə -1 ilə -3 nisbətində soyudulur (2). Bu, proqramlaşdırıla bilən soyuducudan istifadə etməklə və ya flakonları –70°C-dən –90°C-dək idarə olunan dondurucuya yerləşdirilmiş izolyasiya edilmiş qutuya yerləşdirməklə əldə edilir.

Maye Azota köçürün

Dondurulmuş kriogen flakonlar daha sonra -135℃-dən aşağı temperatur saxlamaq şərti ilə qeyri-müəyyən müddətə maye azot çəninə köçürülür.

Bu ultra aşağı temperaturları maye və ya buxar fazalı azotun içərisinə batırmaqla əldə etmək olar.

Maye və ya buxar fazası?

Azotun maye fazasında saxlanması soyuq temperaturu mütləq konsistensiya ilə qoruduğu bilinir, lakin aşağıdakı səbəblərə görə çox vaxt tövsiyə edilmir:

• Potensial təhlükə olan maye azotun böyük həcmdə (dərinlik) ehtiyacı. Buna görə yanıqlar və ya asfiksiya real riskdir.
• Aspergillus, hep B və maye azot mühiti vasitəsilə viral yayılma kimi yoluxucu agentlər tərəfindən çapraz yoluxma halları (2,3)
• Daldırma zamanı maye azotun flakonlara sızması potensialı. Anbardan çıxarıldıqda və otaq temperaturuna qədər qızdırıldıqda, azot sürətlə genişlənir. Nəticə etibarilə, flakon maye azot anbarından çıxarıldıqda parçalana bilər, həm uçan zibil, həm də içindəkilərə məruz qalma təhlükəsi yaradır (1, 4).

Bu səbəblərə görə, ultra aşağı temperaturda saxlama ən çox buxar fazalı azotda olur. Nümunələr maye fazada saxlanmalı olduqda, xüsusi kriofleks borulardan istifadə edilməlidir.

Buxar fazasının dezavantajı odur ki, şaquli temperatur gradienti -135 ℃ ilə -190 ℃ arasında temperatur dəyişikliyi ilə nəticələnə bilər. Bu, maye azot səviyyələrinin və temperatur dəyişikliklərinin diqqətli və səylə monitorinqini tələb edir (5).

Bir çox istehsalçı kriyovialların -135 ℃-ə qədər saxlama və ya yalnız buxar fazasında istifadə üçün uyğun olmasını tövsiyə edir.

Dondurulmuş Hüceyrələrinizin əriməsi

Ərimə proseduru dondurulmuş mədəniyyət üçün streslidir və hüceyrələrin optimal canlılığını, bərpasını və funksionallığını təmin etmək üçün düzgün işləmə və texnika tələb olunur. Dəqiq ərimə protokolları xüsusi hüceyrə tiplərindən asılı olacaq. Bununla belə, sürətli ərimə aşağıdakılar üçün standart hesab olunur:

• Hüceyrə bərpasına hər hansı təsiri azaldın
• Dondurma mühitində mövcud olan məhlullara məruz qalma müddətini azaltmağa kömək edin
• Buzun yenidən kristallaşması ilə hər hansı zərəri minimuma endirin

Nümunələrin əriməsi üçün adətən su hamamları, muncuq vannaları və ya xüsusi avtomatlaşdırılmış alətlər istifadə olunur.

Ən tez-tez 1 hüceyrə xətti əvvəlcədən isidilmiş böyümə mühitində yuyulmadan əvvəl flakonda yalnız kiçik bir buz qalana qədər 37 ° C su banyosunda yumşaq bir şəkildə fırlanma ilə 1-2 dəqiqə ərzində əridilir.

Məməlilərin embrionları kimi bəzi hüceyrələr üçün onların sağ qalması üçün yavaş istiləşmə vacibdir.

Hüceyrələr artıq hüceyrə kulturasına, hüceyrə təcridinə və ya hematopoetik kök hüceyrələr vəziyyətində - miyeloablativ terapiyadan əvvəl donor kök hüceyrələrinin bütövlüyünü təmin etmək üçün canlılıq tədqiqatlarına hazırdır.

Kulturaya örtmək üçün hüceyrə konsentrasiyalarını müəyyən etmək üçün hüceyrə sayımını həyata keçirmək üçün istifadə edilən əvvəlcədən yuyulmuş nümunədən kiçik alikotların götürülməsi normal təcrübədir. Daha sonra hüceyrə izolyasiyası prosedurlarının nəticələrini qiymətləndirə və hüceyrə canlılığını təyin edə bilərsiniz.

Cryovialların saxlanması üçün ən yaxşı təcrübələr

Krioviallarda saxlanılan nümunələrin müvəffəqiyyətlə kriokonservasiyası protokolun bir çox elementindən asılıdır, o cümlədən düzgün saxlama və qeydlərin aparılması.

• Hüceyrələri saxlama yerləri arasında bölün– Həcmi imkan verirsə, avadanlıqların nasazlığı səbəbindən nümunə itkisi riskini azaltmaq üçün hüceyrələri flakonlar arasında bölün və ayrı yerlərdə saxlayın.
• Çarpaz çirklənmənin qarşısını alın– Sonrakı istifadədən əvvəl birdəfəlik steril kriogen flakonlara və ya avtoklavlara üstünlük verin
• Hüceyrələriniz üçün uyğun ölçülü flakonlardan istifadə edin– flakonlar 1 ilə 5 ml arasında müxtəlif həcmdə olur. Çatlama riskini azaltmaq üçün flakonları həddindən artıq doldurmaqdan çəkinin.
• Daxili və ya xarici dişli kriogen flakonları seçin– Daxili yivli flakonlar bəzi universitetlər tərəfindən təhlükəsizlik tədbirləri üçün tövsiyə olunur – onlar həmçinin doldurma zamanı və ya maye azotda saxlanarkən çirklənmənin qarşısını ala bilər.
• Sızmanın qarşısını alın- Sızmanın və çirklənmənin qarşısını almaq üçün vida qapağına və ya O-halqalara qəliblənmiş iki enjeksiyonlu möhürlərdən istifadə edin.
• 2D barkodlardan və etiket flakonlarından istifadə edin– izlənməni təmin etmək üçün böyük yazı sahələri olan flakonlar hər bir flakonun adekvat etiketlənməsinə imkan verir. 2D ştrix kodlar yaddaşın idarə edilməsində və qeydlərin aparılmasında kömək edə bilər. Rəng kodlu qapaqlar daha asan identifikasiya üçün faydalıdır.
• Adekvat saxlama xidməti- Hüceyrələrin itirilməməsini təmin etmək üçün saxlama qabları temperaturu və maye azot səviyyələrini daim nəzarət etməlidir. İstifadəçiləri səhvlər barədə xəbərdar etmək üçün siqnallar quraşdırılmalıdır.

Təhlükəsizlik tədbirləri

Maye azot müasir tədqiqatlarda adi bir təcrübə halına gəldi, lakin səhv istifadə edildikdə ciddi xəsarət riski daşıyır.

Maye azotla işləyərkən donma, yanma və digər xoşagəlməz hadisələr riskini minimuma endirmək üçün müvafiq fərdi qoruyucu vasitələrdən (PPE) istifadə edilməlidir. Geyinmək

• Kriogen əlcəklər
• Laboratoriya paltarı
• Zərbəyə davamlı tam üz qoruyucusu, boyunu da əhatə edir
• Bağlı ayaq ayaqqabıları
• Sıçramaya davamlı plastik önlük

Maye azot soyuducuları boğulma riskini minimuma endirmək üçün yaxşı havalandırılan ərazilərə yerləşdirilməlidir - qaçan azot buxarlanır və atmosfer oksigenini sıxışdırır. Böyük həcmli mağazalarda aşağı oksigen siqnalizasiya sistemləri olmalıdır.

Maye azotla işləyərkən cüt-cüt işləmək idealdır və onun normal iş vaxtından kənarda istifadəsi qadağan edilməlidir.

İş Aktınızı Dəstəkləmək üçün Cryovials

Suzhou Ace Biomedical şirkəti müxtəlif hüceyrə növləri üçün kriokonservasiya ehtiyaclarınıza cavab verən geniş məhsul seçimi təklif edir. Portfelə bir sıra borular, eləcə də bir sıra steril krioviallar daxildir.

Cryoviallarımız bunlardır:

• Lab Vidalı Qapaq 0.5mL 1.5mL 2.0mL Cryovial Kriogen Flakonlar, Contalı Konik Alt Kriyotub

  ● 0,5 ml, 1,5 ml, 2,0 ml spesifikasiya, ətəkli və ya ətəksiz
  ● Konusvari və ya müstəqil dizayn, steril və ya qeyri-steril hər ikisi mövcuddur
  ● Vida qapaqlı borular tibbi dərəcəli polipropilendən hazırlanır
  ● PP Cryotube flakonları dəfələrlə dondurulub əridilə bilər
  ●Xarici qapaq dizaynı nümunə ilə müalicə zamanı çirklənmə ehtimalını azalda bilər.
  ● Vidalı qapaq kriogen borular İstifadə üçün universal vint dişləri
  ● Borular ən çox yayılmış rotorlara uyğundur
  ● Kriogen boru o-halqalı borular standart 1 düym və 2 düym, 48 quyu, 81 quyu, 96 və 100 quyu dondurucu qutulara uyğundur
  ● 121°C-yə qədər avtoklavlana bilir və -86°C-yə qədər dondurulur

  HİSSƏ NO	MATERİAL	HƏCM	CAPRƏNG	PCS/ÇANTA	ÇANTA/KOL
  ACT05-BL-N	PP	0,5 ML	Qara, Sarı, Mavi, Qırmızı, Bənövşəyi, Ağ	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	Qara, Sarı, Mavi, Qırmızı, Bənövşəyi, Ağ	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	Qara, Sarı, Mavi, Qırmızı, Bənövşəyi, Ağ	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	Qara, Sarı, Mavi, Qırmızı, Bənövşəyi, Ağ	500	10