Proseslərin standartlaşdırılması onların optimallaşdırılmasını və sonradan qurulmasını və uyğunlaşdırılmasını əhatə edir, istifadəçidən asılı olmayaraq uzunmüddətli optimal performansa imkan verir. Standartlaşdırma yüksək keyfiyyətli nəticələri, habelə onların təkrar istehsalını və müqayisəliliyini təmin edir.
(Klassik) PCR-nin məqsədi etibarlı və təkrarlana bilən nəticənin yaradılmasıdır. Müəyyən tətbiqlər üçün məhsuldarlıqPCR məhsuludə aktualdır. Bu reaksiyalar üçün nümunələrin pozulmamasına və PCR iş axınının sabit qalmasına diqqət yetirilməlidir. Xüsusilə, bu, yanlış müsbət və ya yanlış mənfi nəticələrə səbəb ola biləcək və ya hətta PCR reaksiyasını maneə törədə bilən çirklənmələrin daxil olmasını minimuma endirmək deməkdir. Bundan əlavə, reaksiya şərtləri bir dövr ərzində hər bir fərdi nümunə üçün mümkün qədər eyni olmalı və həmçinin sonrakı reaksiyalara (eyni üsulla) ötürülə bilən olmalıdır. Bu, reaksiyaların tərkibinə, həmçinin siklatorda temperatur nəzarətinin növünə aiddir. İstifadəçi səhvlərindən, əlbəttə ki, mümkün qədər qarşısını almaq lazımdır.
Aşağıda biz PZR-nin hazırlanması zamanı və bütün müddət ərzində qarşılaşılan çətinlikləri və PCR iş axınlarının standartlaşdırılması üçün istifadə olunan alətlər və istehlak materialları ilə bağlı mövcud olan həllərə yanaşmaları nümayiş etdirəcəyik.
Reaksiya hazırlığı
Reaksiya komponentlərinin müvafiq olaraq PCR-damarlara və ya plitələrə paylanması, aradan qaldırılmalı olan bir çox problemlərdən ibarətdir:
Reaksiya şərtləri
Ayrı-ayrı komponentlərin dəqiq və dəqiq dozası mümkün olan ən eyni reaksiya şərtlərini hədəfləyərkən əvəzolunmazdır. Yaxşı pipetləmə texnikasına əlavə olaraq, düzgün alətin seçilməsi vacibdir. PCR master-qarışıqlarında tez-tez özlülüyü artıran və ya köpük yaradan maddələr olur. Pipetləmə prosesi zamanı bunlar suyun əhəmiyyətli dərəcədə islanmasına səbəb olurpipet ucları, beləliklə, pipetləmə dəqiqliyini azaldır. Birbaşa paylama sistemlərinin və ya islanmaya daha az meylli olan alternativ pipet uclarının istifadəsi pipetləmə prosesinin dəqiqliyini və dəqiqliyini artıra bilər.
Çirklənmələr
Dağıtma prosesi zamanı aerozollar əmələ gəlir ki, onlar pipetin içərisinə daxil olarsa, növbəti pipetləmə addımı zamanı potensial olaraq başqa nümunəni çirkləndirə bilər. Bunun qarşısını filtr ucları və ya birbaşa yerdəyişmə sistemlərindən istifadə etməklə almaq olar.
kimi istehlak materiallarıməsləhətlər, PCR iş prosesində istifadə olunan qablar və lövhələr nümunəni pozan və ya nəticəni saxtalaşdıran maddələrdən ibarət olmamalıdır. Bunlara DNT, DNazlar, RNazlar və PCR inhibitorları, eləcə də reaksiya zamanı materialdan potensial olaraq yuyula bilən komponentlər – süzülən maddələr kimi tanınan maddələr daxildir.
İstifadəçi xətası
Nə qədər çox nümunə emal edilərsə, səhv riski bir o qədər yüksək olar. Nümunənin yanlış qaba və ya yanlış quyuya pipetlə vurulması asanlıqla baş verə bilər. Bu risk quyuların asanlıqla nəzərə çarpan işarələnməsi ilə əhəmiyyətli dərəcədə azaldıla bilər. Dağıtma addımlarının avtomatlaşdırılması vasitəsilə “insan faktoru”, yəni səhvlər və istifadəçi ilə bağlı variasiyalar minimuma endirilir və beləliklə, xüsusilə kiçik reaksiya həcmləri zamanı təkrar istehsal qabiliyyəti artır. Bunun üçün iş stansiyasında kifayət qədər ölçülü sabitliyə malik plitələr tələb olunur. Əlavə edilmiş ştrix-kodlar əlavə maşın oxunmasını təmin edir ki, bu da bütün proses boyu nümunə izlənilməsini asanlaşdırır.
Termosiklçinin proqramlaşdırılması
Bir alətin proqramlaşdırılması həm vaxt aparan, həm də səhvlərə meylli ola bilər. Fərqli PCR termal siklator xüsusiyyətləri bu proses addımını sadələşdirmək və ən əsası onu təhlükəsiz etmək üçün birlikdə işləyir:
Asan əməliyyat və yaxşı istifadəçi təlimatı səmərəli proqramlaşdırmanın əsasını təşkil edir. Bu təməl üzərində qurularaq, parolla qorunan istifadəçi administrasiyası öz proqramlarının digər istifadəçilər tərəfindən dəyişdirilməsinin qarşısını alacaq. Əgər birdən çox cycler (eyni tip) istifadə olunursa, proqramın USB və ya qoşulma vasitəsilə birbaşa bir alətdən digərinə ötürülməsi faydalıdır. Kompüter proqram təminatı kompüterdə proqramların, istifadəçi hüquqlarının və sənədlərin mərkəzi və təhlükəsiz idarə edilməsinə imkan verir.
PCR əməliyyatı
Qaçış zamanı DNT reaksiya qabında gücləndirilir, burada hər bir nümunə eyni, ardıcıl reaksiya şəraitinə məruz qalmalıdır. Proses üçün aşağıdakı aspektlər aktualdır:
Temperatur nəzarəti
Temperaturun idarə edilməsində mükəmməl dəqiqlik və cycler blokunun homojenliyi bütün nümunələrin bərabər temperatur kondisionerinin əsasını təşkil edir. İstilik və soyutma elementlərinin (peltier elementləri) yüksək keyfiyyəti, eləcə də onların bloka qoşulma üsulu “kənar effekti” kimi tanınan temperatur uyğunsuzluğu riskini müəyyən edən həlledici amillərdir.
Buxarlanma
Ayrı-ayrı reaksiya komponentlərinin konsentrasiyası buxarlanma səbəbindən reaksiya zamanı dəyişməməlidir. Əks halda, çox az ola bilərPCR məhsuluyaradıla bilər, ya da heç biri ola bilər. Buna görə etibarlı bir sızdırmazlığı təmin etməklə buxarlanmanı minimuma endirmək çox vacibdir. Bu zaman termosikllərin qızdırılan qapağı və qabın möhürü əl-ələ işləyir. Üçün müxtəlif sızdırmazlıq variantları mövcuddurPCR lövhələri (link: Sızdırmazlıq məqaləsi), bunun sayəsində ən yaxşı sızdırmazlıq istilik sızdırmazlığı ilə əldə edilir. Velosiped qapağının təmas təzyiqi seçilmiş möhürə uyğunlaşdırıla bildiyi müddətcə digər qapaqlar da uyğun ola bilər.
Uzun müddətdə dəqiq və təkrarlana bilən nəticələri qorumaq üçün prosesin standartlaşdırılması mövcuddur. Buraya avadanlığın həmişə yaxşı vəziyyətdə olmasını təmin etmək üçün müntəzəm texniki qulluq daxildir. İstehsal olunan bütün partiyalar üzrə bütün istehlak materialları davamlı olaraq yüksək keyfiyyətli olmalıdır və onların etibarlı mövcudluğuna zəmanət verilməlidir.
Göndərmə vaxtı: 29 noyabr 2022-ci il