Əl Pipetləri ilə kiçik həcmləri necə pipetləmək olar

Reagentlərin və xərclərin azaldılmasına daha çox diqqət yetirildiyi üçün, məsələn, PCR Mastermix və ya ferment reaksiyalarının hazırlanması üçün daha kiçik həcmlərə yüksək tələbat var. Lakin 0,2 – 5 µL arasında kiçik həcmlərin pipetlənməsi pipetləmə dəqiqliyi və dəqiqliyi üçün yeni problemlər yaradır. Aşağıdakı məqamlar vacibdir:

1. Pipet və ucun ölçüsü: Hava yastığını mümkün qədər kiçik saxlamaq üçün həmişə mümkün olan ən aşağı nominal həcmi və ən kiçik ucu olan pipeti seçin. Məsələn, 1 µL pipetləyərkən, 1 - 10 µL pipetdən çox 0,25 – 2,5 µL pipet və uyğun uc seçin.
2. Kalibrləmə və texniki qulluq: Pipetlərinizin düzgün kalibrlənməsi və saxlanması vacibdir. Pipetdəki kiçik düzəlişlər və qırıq hissələr sistematik və təsadüfi səhv dəyərlərinin kütləvi artmasına səbəb olur. ISO 8655-ə uyğun olaraq kalibrləmə ildə bir dəfə aparılmalıdır.
3. Müsbət yerdəyişmə pipetləri: Laboratoriyanızda aşağı həcm diapazonuna malik müsbət yerdəyişmə pipetinizin olub olmadığını yoxlayın. Ümumiyyətlə, bu tip pipetlərdən istifadə klassik hava yastığı pipetləri ilə müqayisədə dəqiqlik və dəqiqlik baxımından daha yaxşı pipetləmə nəticəsinə gətirib çıxarır.
4. Daha böyük həcmlərdən istifadə etməyə çalışın: Son reaksiyada eyni miqdarda daha böyük həcmləri pipetləmək üçün nümunənizi seyreltməyi düşünə bilərsiniz. Bu, çox kiçik nümunə həcmləri ilə pipetləmə xətalarını azalda bilər.

Yaxşı alətlə yanaşı, tədqiqatçı çox yaxşı pipetləmə texnikasına malik olmalıdır. Aşağıdakı addımlara xüsusi diqqət yetirin:

1. Ucu qoşqu: Pipeti ucuna sıxmayın, çünki bu, incə uc ucuna zərər verə bilər, maye şüasının yönləndirilməsinə və ya ağıza zərər verə bilər. Ucu taxarkən yalnız yüngül təzyiq tətbiq edin və yaylı uc konuslu pipetdən istifadə edin.
2. Pipetin saxlanması: sentrifuqanı, siklatoru və s. gözləyərkən pipeti əlinizdə saxlamayın. Pipetin içi qızacaq və hava yastığının genişlənməsinə səbəb olacaq və nəticədə pipetləmə zamanı müəyyən edilmiş həcmdən kənara çıxacaq.
3. Əvvəlcədən islatma: Ucun və pipetin daxilindəki havanın nəmləndirilməsi ucu nümunə üçün hazırlayır və ötürmə həcminin aspirasiyası zamanı buxarlanmanın qarşısını alır.
4. Şaquli aspirasiya: Pipet bucaq altında tutulduqda meydana gələn kapilyar təsirdən qaçmaq üçün kiçik həcmlərlə işləyərkən bu çox vacibdir.
5. Daldırma dərinliyi: Kapilyar təsirə görə mayenin ucuna daxil olmasının qarşısını almaq üçün ucunu mümkün qədər az batırın. Əsas qayda: Ucu və həcmi nə qədər kiçik olsa, daldırma dərinliyi bir o qədər aşağı olar. Kiçik həcmləri pipetləyərkən maksimum 2 mm tövsiyə edirik.
6. 45° bucaq altında paylama: Pipet 45° bucaq altında tutulduqda mayenin optimal axmasına zəmanət verilir.
7. Damar divarına və ya maye səthinə təmas: Kiçik həcmlər yalnız ucu damar divarına qarşı tutulduqda və ya mayeyə batırıldıqda düzgün şəkildə buraxıla bilər. Ucundakı son damla belə dəqiq bir şəkildə buraxıla bilər.
8. Püskürtmə: Ucda mövcud olan mayenin son damlasını belə paylamaq üçün aşağı həcmlər verildikdən sonra üfürülmə məcburidir. Zərbə də damar divarına qarşı aparılmalıdır. Maye səthində üfürmə həyata keçirərkən nümunəyə hava qabarcıqları gətirməmək üçün diqqətli olun.