ما الذي يجب مراعاته عند سحب مخاليط PCR؟

لتفاعلات التضخيم الناجحة، من الضروري أن تكون مكونات التفاعل الفردية موجودة بالتركيز الصحيح في كل مستحضر. بالإضافة إلى ذلك، من المهم عدم حدوث أي تلوث.

خاصة عندما يتعين إعداد العديد من التفاعلات، فقد تم إنشاء ما يسمى بالمزيج الرئيسي بدلاً من وضع كل كاشف على حدة في كل وعاء. تتوفر الخلطات المعدة مسبقًا تجاريًا، حيث تتم إضافة المكونات الخاصة بالعينة فقط (التمهيدي) والماء. وبدلاً من ذلك، يمكن تحضير المزيج الرئيسي بنفسك. في كلا الخيارين، يتم توزيع الخليط على كل وعاء PCR بدون قالب ويتم إضافة عينة الحمض النووي الفردية بشكل منفصل في النهاية.

يتميز استخدام المزيج الرئيسي بالعديد من المزايا: أولاً، يتم تقليل عدد خطوات السحب الفردية. وبهذه الطريقة، يتم تقليل مخاطر أخطاء المستخدم أثناء سحب العينة وخطر التلوث، وبالطبع يتم توفير الوقت. من حيث المبدأ، دقة بيبيتينج أعلى أيضا، حيث يتم جرعات كميات أكبر. من السهل فهم ذلك عند التحقق من البيانات الفنية للماصات: كلما كان حجم الجرعات أصغر، زادت الانحرافات. إن حقيقة أن جميع المستحضرات تأتي من نفس الوعاء له تأثير إيجابي على التجانس (إذا تم مزجه جيدًا). وهذا أيضا يحسن إمكانية تكرار نتائج التجارب.

عند تحضير المزيج الرئيسي، يجب إضافة حجم إضافي بنسبة 10% على الأقل (على سبيل المثال، إذا كانت هناك حاجة إلى 10 تحضيرات، احسب على أساس 11)، حتى يتم ملء الوعاء الأخير بشكل صحيح. وبهذه الطريقة، يمكن تعويض عدم الدقة (الطفيفة) في سحب العينة، وتأثير فقدان العينة عند تحديد جرعات المحاليل التي تحتوي على المنظفات. توجد المنظفات في محاليل إنزيمية مثل البوليمرات والخلائط الرئيسية، مما يتسبب في تكوين الرغوة وبقايا على السطح الداخلي العادينصائح ماصة.

اعتمادًا على التطبيق ونوع السائل المراد توزيعه، يجب اختيار تقنية الماصة الصحيحة (1) واختيار المعدات المناسبة. بالنسبة للحلول التي تحتوي على منظفات، يوصى باستخدام نظام الإزاحة المباشرة أو ما يسمى بأطراف الماصات "منخفضة الاحتفاظ" كبديل للماصات ذات الوسائد الهوائية. تأثيرنصيحة ايس ماصةيعتمد على سطح مسعور بشكل خاص. لا تترك السوائل التي تحتوي على منظفات بقايا من الداخل والخارج، مما يقلل من فقدان المحلول.

بالإضافة إلى الجرعات الدقيقة لجميع المكونات، من المهم أيضًا عدم حدوث أي تلوث للمستحضرات. لا يكفي استخدام المواد الاستهلاكية ذات النقاء العالي، لأن عملية السحب في ماصة وسادة الهواء يمكن أن تنتج الهباء الجوي الذي يبقى في الماصة. يمكن نقل الحمض النووي الذي قد يكون موجودًا في الهباء الجوي من عينة إلى أخرى في خطوة السحب التالية، مما يؤدي إلى التلوث. أنظمة الإزاحة المباشرة المذكورة أعلاه قد تقلل أيضًا من هذا الخطر. بالنسبة للماصات ذات الوسائد الهوائية، من المنطقي استخدام أطراف المرشح لحماية مخروط الماصة من خلال الاحتفاظ بالرذاذ والهباء الجوي والجزيئات الحيوية.