ما الذي يجب مراعاته عند خلطات PCR PIPTTING؟

لتفاعلات التضخيم الناجحة ، من الضروري أن تكون مكونات التفاعل الفردية موجودة في التركيز الصحيح في كل إعداد. بالإضافة إلى ذلك ، من المهم عدم حدوث تلوث.

خاصة عندما يجب إعداد العديد من ردود الفعل ، فقد تم تأسيسها لإعداد مزيج رئيسي يسمى بدلاً من أن يشبه كل كاشف بشكل منفصل في كل سفينة. تتوفر خلطات مُصنَّعة مسبقًا تجاريًا ، حيث تتم إضافة مكونات خاصة فقط من العينة (التمهيدي) والماء. بدلاً من ذلك ، يمكن إعداد المزيج الرئيسي بنفسك. في كلا الاختلافين ، يتم توزيع الخليط على كل وعاء PCR بدون قالب ويتم إضافة عينة الحمض النووي الفردية بشكل منفصل في النهاية.

باستخدام مزيج رئيسي له العديد من المزايا: أولاً ، يتم تقليل عدد خطوات الأنابيب الفردية. وبهذه الطريقة ، يتم تقليل كل من مخاطر أخطاء المستخدم أثناء التقليل من الأنابيب وخطر التلوث ، وبالطبع يتم حفظ الوقت. من حيث المبدأ ، تكون دقة الأنابيب أعلى أيضًا ، حيث يتم جرع أحجام أكبر. من السهل فهم ذلك عند التحقق من البيانات الفنية للأنابيب: كلما كان حجم الجرعات أصغر ، كلما زادت الانحرافات. حقيقة أن جميع الاستعدادات تأتي من نفس السفينة لها تأثير إيجابي على التجانس (إذا كان مختلطًا جيدًا). هذا أيضا يحسن استنساخ التجارب.

عند إعداد المزيج الرئيسي ، يجب إضافة حجم إضافي بنسبة 10 ٪ على الأقل (على سبيل المثال ، إذا كانت هناك حاجة إلى 10 مستحضرات ، فحسب على أساس 11) ، بحيث تملأ السفينة الأخيرة بشكل صحيح. وبهذه الطريقة ، يمكن تعويض عدم دقة الأنابيب (الطفيفة) ، وتأثير فقدان العينة عند الجرعات التي تحتوي على حلول تحتوي على منظفات. توجد المنظفات في حلول الإنزيم مثل البوليميرات والمزيج الرئيسي ، مما يسبب تكوين الرغوة ومخلفات على السطح الداخلي الطبيعينصائح ماصة.

اعتمادًا على التطبيق ونوع السائل المراد توزيعه ، يجب اختيار تقنية الأنابيب الصحيحة (1) والمعدات المناسبة المحددة. بالنسبة للحلول التي تحتوي على المنظفات ، يوصى بنظام النزوح المباشر أو ما يسمى بنصائح ماصة "الاحتفاظ المنخفض" كبديل لمراكز وسادة الهواء. تأثيرنصيحة ماصة الآسيعتمد على سطح مسعور بشكل خاص. السوائل التي تحتوي على المنظفات لا تترك فيلم بقايا من الداخل والخارج ، بحيث يمكن تقليل فقدان الحل.

إلى جانب الجرعات الدقيقة لجميع المكونات ، من المهم أيضًا عدم حدوث تلوث للمستحضرات. لا يكفي استخدام المواد الاستهلاكية ذات الطهارة العالية ، لأن عملية الأنابيب في ماصة وسادة الهواء يمكن أن تنتج الهباء الجوي الذي تبقى في الماصة. يمكن نقل الحمض النووي الذي يمكن احتواءه في الهباء الجوي من عينة إلى أخرى في خطوة الأنابيب التالية وبالتالي تؤدي إلى التلوث. قد تقلل أنظمة الإزاحة المباشرة المذكورة أعلاه من هذا الخطر. بالنسبة لمادة وسادة الهواء ، من المنطقي استخدام نصائح المرشح لحماية مخروط ماصة عن طريق الاحتفاظ بالبقع والهباء الجوي والجزيئات الحيوية.